瘦素ELISA试剂盒：用于酶免疫测定法定量测定人血清中的瘦素
瘦素ELISA试剂盒用于酶免疫测定法定量测定人血清中的瘦素。此试剂盒仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷瘦素ELISA试剂盒（ALP-11-LEPHU-E01）测定原理：
以下酶免疫测定的原理遵循典型的两步捕获或“三明治”型测定。该检测利用了两种高度特异性的单克隆抗体：将瘦素特异性的单克隆抗体固定在微孔板上，将瘦素不同表位特异性的双克隆抗体与生物素结合。在第一步中，样品和标准品中存在的瘦素与固定抗体和生物素化抗体结合，从而形成三明治复合物。通过洗涤步骤去除过量和未结合的生物素化抗体。第二步，加入链霉抗生物素蛋白-HRP，它能特异性结合任何结合的生物素化抗体。同样，未结合的链霉抗生物素蛋白-HRP通过洗涤步骤去除。接下来，加入酶底物（TMB），形成与瘦素含量成正比的蓝色产物。通过加入终止溶液使酶反应停止，将蓝色转化为黄色。在450nm处用微量滴定板读数器测量吸光度。使用一组标准来绘制标准曲线，从中可以直接读取样品和对照中的瘦素含量。
程序注意事项和警告：
1. 本试剂盒仅供研究使用，不用于诊断程序。
2. 处理试剂盒试剂时，应遵循以下良好的实验室操作规范：
- 不要用口吸管。
- 在处理样品或试剂盒试剂的区域不要吸烟、饮食。
- 处理样品和试剂盒试剂时穿戴防护服和一次性手套。
- 测试后彻底洗手。
- 避免与眼睛接触；使用安全眼镜。如果发生接触，请立即用水冲洗并联系医生。
3. 用户应充分理解本协议，以成功使用此试剂盒。只有严格遵守和仔细遵循提供的说明，才能获得可靠的性能。
4. 不要使用超过标签上标明的有效期的试剂盒。
5. 如果试剂盒试剂明显损坏，请勿使用试剂盒。
6. 不要在测试中使用不同试剂盒批次的组分，并且不要使用任何超过标签上打印的有效期的组分。
7. 所有试剂盒试剂和样品在使用前应置于室温并轻轻但彻底混合。避免反复冻融试剂和样品。
8. 当指定使用水进行稀释或重组时，使用去离子水或蒸馏水。
9. 使用后，试剂盒的每个单独组分必须立即返回标签上标明的推荐储存温度。
10. 每次运行都必须建立校准曲线。
11. 建议所有客户准备自己的控制材料或血清池，应在每次运行中包括高浓度和低浓度水平，以评估结果的可靠性。
12. 试剂盒中包含的对照品应在每次运行中包含，其结果必须落在质量控制证书中规定的范围内。对照品结果失败可能表明操作技术不当或吸管使用不当、洗涤不完全或试剂储存不当。
13. 分发底物和终止溶液时，不要使用允许这些液体与任何金属部件接触的吸管。
14. 底物溶液（TMB）对光敏感，如果适当储存，应保持无色。如果出现蓝色，则不应使用，这可能表明不稳定性或污染。
15. 不要使用严重溶血、严重脂血、黄疸或储存不当的血清。
16. 含有叠氮化物或硫柳汞的样品或对照品与此试剂盒不兼容。它们可能导致虚假结果。
17. 超出试剂盒测量范围的样品值可能会报告为>100 ng/mL。如果需要进一步稀释和重新测试，只能使用测定缓冲液稀释血清样品。使用任何其他试剂可能导致虚假结果。
18. 避免试剂的微生物污染。
19. 为了防止试剂污染，分配每种试剂、样品、标准品和对照品时使用新的一次性吸管头。
20. 为了防止试剂污染，不要将试剂倒回原容器。
21. 试剂盒试剂必须被视为危险废物，并根据当地和/或国家规定进行处理。
22. 使用试剂盒的消耗品，如果可能含有生物危害（例如吸管头、瓶子或含有人体材料的容器），必须按照生物安全实践处理，以最小化感染风险，并根据当地和/或国家有关生物危害废物的规定进行处理。
23. 试剂盒中的终止溶液组分含有1M硫酸。不要将酸与含有叠氮化钠或次氯酸钠的废物混合。
24. 在操作生物危害或生物污染的溶液时，强烈建议使用安全眼镜和一次性塑料。
25. 需要正确校准与此测试一起使用的设备，例如吸管和吸光度微孔板阅读器。
26. 如果测定程序需要微孔板振荡器，则所需振荡器的类型和速度在“需要但未提供的试剂和设备”部分中说明。使用的振荡器类型和速度都会影响光密度和测试结果。如果使用不同类型的振荡器和/或速度，用户负责验证试剂盒的性能。
27. 不要重复使用微孔板孔。它们仅供一次性使用。
28. 为了避免在潮湿环境中微孔板孔内的凝结，直到微孔板达到室温之前，不要打开包含微孔板的袋子。
29. 当读取微孔板时，微孔中的气泡会影响光密度（OD）。在执行读取步骤之前，仔细移除任何气泡。
瘦素ELISA试剂盒典型校准器曲线：
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附文献参考丨小鼠总脂联素ELISA试剂盒解决方案
瘦素在1990年代初首次被描述为由脂肪细胞产生的内分泌因子。瘦素参与调节能量和脂肪代谢。其在循环中的浓度据说可以反映动脉粥样硬化的风险和胰岛素抵抗的程度。基于这些疾病的高发病率，瘦素是关于其背后的生物学机制及其作为生物标志物价值的密集研究对象。小鼠和大鼠是基础研究和临床前研究的合适模型生物。尽管小鼠和人类的可比性有限，以下是有关人类瘦素生理学的背景信息：
瘦素是一种30kDa的蛋白质，占血清蛋白的0.01%。它主要由脂肪细胞合成，但肌肉细胞和肝细胞也能合成瘦素。到目前为止，IGF-I是已知的唯一一种自然诱导瘦素合成的物质。它由一个类似胶原蛋白的N-末端和一个球形的C-末端结构域组成[1]。在体内，瘦素以不同的寡聚体形式出现。存在三聚体、二三聚体和高分子量多聚体[1-3]。已知有两种不同的受体，它们都普遍表达，尽管在组织中的分布不同。Adiponectin受体1（AdipoR1）存在于肌肉组织中，而AdipoR2存在于肝组织中[4]。
瘦素与葡萄糖和脂质代谢有关[5, 6]。研究表明，瘦素与BMI呈负相关，因此可能与能量代谢有关，例如，通过调节脂肪酸氧化。瘦素水平还与胰岛素抵抗相关[7-9]，因此也与2型糖尿病有关。HMW瘦素已被证明在评估胰岛素抵抗的存在方面具有与总瘦素相似的能力[10]。Blueher等人证明，就通过全身葡萄糖摄取测量的胰岛素抵抗诊断而言，当摄取低于40 ?mol/kg*min时，使用试剂盒测定的总瘦素在接收者操作曲线下的面积为0.92，具有更大的诊断价值[10]。
此外，瘦素参与炎症过程[11-15]。它在动脉粥样硬化[4, 5, 16]和冠状动脉疾病[17, 18]中很重要，因此血浆中瘦素水平的测定可以用来估计冠状动脉疾病的风险[19, 20]。瘦素还影响其他生理过程，如血管生成[21, 22]。
小鼠总脂联素ELISA是一种酶联免疫吸附试验（ELISA），用于定量测定小鼠血清、血浆和细胞培养上清液中的总脂联蛋白。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷小鼠总脂联素ELISA试剂盒，96-孔（ALP-22-ADPMS-E01）原理：
该检测是使用两种特异性和高亲和力抗体的夹心检测。样品中的脂联素与涂在微孔板上的第一抗体结合。在接下来的步骤中，第二特异性抗脂联素抗体依次与固定的脂联素结合。第二抗体是生物素化的，将与链霉抗生物素蛋白过氧化物酶偶联物混合使用。在最后一个底物反应中，混合物的颜色将定量地取决于样品中的二连接蛋白水平。
小鼠总脂联素ELISA试剂盒文献参考：
1.Nakano,Y,etal,Isolationand charactenizationof GBP28,anovelgelatin-binding protein purfied from human plasma.J Biochem (Tokyo),1996.120(4):p.803-12.
2.Pajvani,U.B,et al,Structure-function studies of theadipocyte-secreted hormone Acrp30/adiponectin. Implications for metabolic regulation and bioactivity.JBiol Chem,2003.278(11):p.9073-85.
3.Tsao,T.S.,etal,Role of disulfide bonds in Acrp30/adiponectin structure and signalingspecificity. Diferent oligomers activatedifferent signal transduction pathways.J BiolChem,2003.278(50):p.50810-7.
4.Shimada,K,T.Miyazaki,and H.Daida,Adiponectinand atheroscleroticdisease.CinChimActa,2004.344(1-2):p.1-12.
5.Higashiura,K,et al,Corelations of adiponectinlevel with insulin resistance and atherosclerosisin Japanese male populations.Clin Endocrinol (Oxf),2004.61(6):p.753-9.
6.Spranger,J.,et al,Adiponectin is independently associated withinsulin sensitvity in women with polycystic ovary syndrome.ClinEndocrinol (Oxf),2004.61(6):p.738-46.
7.Zoico,E.,et al,Adipocytokines,fat distribution,and insulin resistance in elderly men and women.J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2004.59(9):p.M935-9.
8.Ye,J.M.,et al,PPARalpha /gamma ragaglitazar eliminates fatty liverand enhances insulin action in fat-fedratsin the absence of hepatomegaly.AmJPhysiol Endocrinol Metab,2003.284(3):p.E531-40.
9.Yamauchi,T,et al,Adiponectinstimulates glucose utiization and fatty-acid oxidationby activating AMP-activatedproteinkinase.Nat Med,2002.8(11):p.1288-95.
10.Blüher (Blueher),M,et al.,Totaland high-molecular weight adiponectininrelation to metabolicvariables at baseline and in responsetoan exercise treatment program:comparative evaluation of threeassays.Diabetes Care,2007.30(2):p.280-5.
11.Delaigle,A.M.et al,Induction of adiponectin in skeletal muscle by inflammatory cytokines:in vivoand in vitro studies.Endocrinology,2004.145(12):p.5589-97.
12.Winzer,C.,et al.,Plasma adiponectin,insulin sensitivity,andsubclinicalinflammationin women with prior gestational diabetes melius.DiabetesCare,2004.27(7):p.1721-7.
13.Xydakis,AM.,et al,Adiponectin,inflammation,and theexpressionof the metabolic syndromein obese individuals:the impact of rapidweight lossthroughcaloricrestriction.J ClinEndocrinol Metab,2004.89(6):p.2697-703.
14.Motoshima,H,et al,Adiponectin suppresses proliferationand superoxide generation andenhances eNOS activityin endothelialcellstreatedwith oxidizedLDL.Biochem Biophys Res Commun,2004.315(2):p.264-71.
15.Wolf,A.M.,et al,Adiponectin induces the ant-inflammatory cytokines L-10 and IL-1RA in human leukocytes.Biochem Biophys Res Commun,2004.323(2):p.630-5.
16.Okamoto,Y,et al,Adiponectinreducesatherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice.Circulation,2002.106(22):p.2767-70.
17.Schlegel,A.,Adiponectinand riskof coronary heartdisease.Jama,2004.292(1):p.40;author reply 40.
18.Choi,K.M.,et al,Inflammation,Insulin Resistance,andGlucose Intolerance in Acute MyocardialInfarction Patients without a Previous Diagnosisof DiabetesMellitus.J Clin Endocrinol Metab,2004.
19.Nakamura,Y,et al,Implications of plasma concentrations of adiponectin in patients with coronaryartery disease.Heart,2004.90(5):p.528-33.
20. Pischon, T., et al., Plasma adiponectin levels and risk of myocardial infarction in men. Jama, 2004.291(14): p. 1730-7.
21. Shibata, R., et al., Adiponectin stimulates angiogenesis in response to tissue ischemia throughstimulation of amp-activated protein kinase signaling. J Biol Chem, 2004. 279(27): p. 28670-4.
22. Fernandez-Real, J.M., et al., Adiponectin is associated with vascular function independent of insulinsensitivity. Diabetes Care, 2004. 27(3): p. 739-45.
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ALPCO胰高血糖素ELISA试剂盒相关性能特征和总结
根据对胰高血糖素免疫分析的多项研究，现已确定，针对胰高血糖素C末端片段（19-29）的抗体与胰脏胰高血糖素具有特异性结合，而针对N末端片段（1-19）的抗体则与胰脏和肠道胰高血糖素（总胰高血糖素）都有特异性结合。最初，由Unger等人识别的30K蛋白被广泛用于生产特异性针对胰高血糖素C末端片段的抗体，但在1981年，Nishino、Shima、Yanaihara等人成功利用代表胰高血糖素C末端片段（19-29）的合成肽作为免疫原，生产了特异性针对胰脏胰高血糖素的抗体。这个ELISA试剂盒就是利用针对胰高血糖素（19-29）的多克隆抗体、合成胰脏胰高血糖素作为胰高血糖素标准，以及生物素标记的胰脏胰高血糖素作为标记抗原，用于测量大鼠、小鼠或人类血浆中的胰高血糖素。
胰高血糖素（人、小鼠、大鼠）ELISA试剂盒用于定量测定血浆样本中的大鼠、小鼠或人胰高血糖蛋白。仅供研究使用。不适用于独立程序。
艾美捷胰高血糖素ELISA试剂盒（ALP-48-GLUHU-E01）性能总结：
- 该试剂盒可在41-10,000 pg/mL的范围内测量胰高血糖素。
- 根据样本体积，检测时间有所不同：
100µL，20-24小时 + 1.5小时
50µL，44-48小时 + 1.5小时
- 使用一个试剂盒，可以测量41个样本，每个样本重复两次。
- 测试样本：血浆（大鼠、小鼠、人类）。
- 样本体积：100µL或50µL。
- 该试剂盒的96孔板由8孔条组成，可以分开使用。
- 精确度和可重复性：
批内变异系数（%）：3.3-5.1
批间变异系数（%）：7.3-18.9
- 稳定性和储存：
所有组分均需存放在2-8°C的条件下。
在此条件下，从生产日期起该试剂盒稳定12个月。
有效期在包装上标明。
胰高血糖素ELISA试剂盒组成部分：
1. 抗体包被板
2. 胰高血糖素标准品
3. 标记抗原
4. SA-HRP溶液
5. 底物缓冲液
6. OPD片
7. 终止溶液
8. 缓冲液（A）
9. 缓冲液（B）
10. 浓缩洗涤液
11. 粘附膜
胰高血糖素ELISA试剂盒性能特征：
胰高血糖素ELISA试剂盒文献参考：
1. Unger, R.H., Eisentraut, A.M., McCall, M.S., Keller, S., Lanz, H.C. and Madison, L.L.(1959): Glucagon antibodies and their use for immunoassay for glucagon. Proc．Soc ExpBiol． Med.,102： 621 - 623
2. Unger, R.H., Eisentraut, A.M., McCall, M.S. and Madison, L.L. (1961): Glucagonantibodies and an immunoassay for glucagon. J．Clin．Invest.,40: 1280-1289
3. Nishino, T., Kodaira, T., Shin, S., Imagawa, K., Shima, K., Kumahara, Y., Yanaihara, C.and Yanaihara, N.(1981): Glucagon radioimmunoassay with use of antiserum to glucagonC-terminal fragment. Clin．Chem.,27: 1690-1697
4. Jaspan, J.B., and Rubenstein, A.H. (1977): Circulating glucagon: Plasma profiles andmetabolism in health and disease. Diabetes., 26：887-902
5. Glucagon related peptides (1993): (Okuno, G., Ohneta, A. and Shima, K.ed.) pp． 52-65.Ishiyaku, Tokyo
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c肽(小鼠)ELISA试剂盒结果的计算方案
ALPCO小鼠C肽ELISA用于定量测定小鼠血清中的C肽。
艾美捷ALPCO-c肽(小鼠)ELISA试剂盒，96孔（ALP-80-CPTMS-E01）检测原理：
ALPCO小鼠C肽ELISA是一种夹心型免疫测定法。96孔微孔板涂有C肽特异性单克隆抗体。将标准品、对照品和样品加入到带有共轭物的微孔板孔中。然后将微孔板在室温下在微孔板振荡器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液洗涤细胞并吸干。加入TMB底物，在室温下在微孔板振荡器上以700-900rpm第二次孵育微孔板。第二次孵育完成后，加入终止溶液，用分光光度计在450nm处测量光密度（OD）。产生的颜色强度与样品中C肽的量成正比。
c肽(小鼠)ELISA试剂盒测定程序：
所有试剂和微孔板条在使用前应平衡至室温（18-25°C）。使用前轻轻混合所有试剂。每次测定运行和每次使用多个微孔板时，都必须执行标准曲线。所有标准品、对照品和样本都应双重运行。
1. 在打开铝箔袋前，应先将微孔板平衡至室温。为标准品、对照品和样本的双重测定分配足够的微孔板条。其余的微孔板条应存放在含干燥剂的密封铝箔袋中，置于2-8°C。
2. 将每个标准品、对照品和样本的10微升分别吸入相应的孔中。见试剂准备和分析证书上的对照品重组说明。
3. 向每个孔中加入100微升的工作强度结合物（见试剂准备）。
4. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下孵育2小时，在微孔板振荡器上以700-900转每分钟的速度摇动。
5. 倒掉孔中的内容物，使用微孔板洗涤器用每次350微升的工作强度洗涤缓冲液洗板3次（见试剂准备）。或者，使用带有洗涤喷嘴的洗涤瓶将工作强度洗涤缓冲液注入孔中。（不建议使用多通道移液管。洗涤缓冲液必须以足够且均衡的力量分配，以便正确洗涤孔。）每次洗涤之间，将微孔板倒置以丢弃液体，并在吸水纸上用力拍打倒置的微孔板。在最后洗涤后（自动或手动），通过倒置并用力拍打微孔板在吸水纸上，去除孔中的任何残留洗涤缓冲液和气泡。
6. 向每个孔中加入100微升的TMB底物。
7. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下孵育10分钟，在微孔板振荡器上以700-900转每分钟的速度摇动。
8. 向每个孔中加入100微升的终止溶液，并轻轻摇动微孔板以混合内容物。在进行下一步之前，去除任何气泡。
9. 将微孔板放入能够读取450纳米吸光度的微孔板阅读器中。在加入终止溶液后应立即分析微孔板，且不得超过30分钟。
c肽(小鼠)ELISA试剂盒结果的计算：
构建标准曲线：
从标准品中构建标准曲线。将零标准作为曲线的一部分。建议使用软件程序来计算标准曲线并确定样本的浓度。小鼠C肽ELISA是一种配体结合测定，其响应与分析物浓度呈现S形关系。目前被普遍接受的此类曲线的参考模型使用5参数逻辑（pl）拟合，因为这些模型可以在更大的范围内优化准确性和精确度。尽管三次样条和其他模型是可以接受的方法，但它们通常在范围的低端和高端显示出较低的测定内准确性和精确度。在以下示例中，使用了5参数逻辑拟合来最大化低浓度样本的准确性和精确度。然而，由于个别实验室条件的影响，所有模型在可检测范围的最低端和最高端的准确性和精确度都是有限的。因此，在解释分析物响应变得非线性时所得出的结果时，应始终谨慎。
不建议将样本浓度值外推至标准浓度值范围之外。
典型标准曲线：
以下结果仅供演示目的，不能代替实际测定所得数据。每次测定运行和板测试时都必须执行标准曲线。将摩尔值转换为纳克/毫升：320.3皮摩尔 = 1纳克/毫升。
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ALPCO胰岛素ELISA测定程序及结果计算方案
ALPCO胰岛素ELISA用于定量测定血清和血浆中的胰岛素。
艾美捷胰岛素ELISA（ALP-80-INSHU-E01.1）检测原理：
ALPCO胰岛素ELISA是一种夹心型免疫测定法。96孔微孔板涂有胰岛素特异性单克隆抗体。将标准品、对照品和样品加入带有检测抗体的微孔板孔中。然后将微孔板在酰胺板振荡器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗涤缓冲液洗涤孔并吸干。加入TMB底物，在微孔板振荡器上以700-900rpm的速度第二次孵育微孔板。一旦第二次孵育完成，加入停止溶液，用分光光度计在450nm处测量光密度（OD）。产生的颜色强度与样品中胰岛素的量成正比。
胰岛素ELISA测定程序：
所有试剂和微孔板条在使用前应平衡至室温（18-25°C）。使用前轻轻混合所有试剂。每次测定运行和每次使用多个微孔板时，都必须执行标准曲线。所有标准品、对照品和样本都应双重运行。
1. 在打开铝箔袋前，应先将微孔板平衡至室温。为标准品、对照品和样本的双重测定分配足够的微孔板条。其余的微孔板条应存放在含干燥剂的密封铝箔袋中，置于2-8°C。
2. 将每个标准品、对照品和样本的25微升分别吸入相应的孔中。见试剂准备部分以获取对照品重组说明。
3. 向每个孔中加入100微升的检测抗体。
4. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下孵育1小时，在微孔板振荡器上以700-900转每分钟的速度摇动。
5. 倒掉孔中的内容物，使用微孔板洗涤器用每次350微升的工作强度洗涤缓冲液洗板6次（见试剂准备）。或者，使用洗涤瓶（不要使用多通道移液管）将工作强度洗涤缓冲液注入孔中。每次洗涤之间，将微孔板倒置以丢弃液体，并在吸水纸上用力拍打倒置的微孔板。在最后洗涤后（自动或手动），通过倒置并用力拍打微孔板在吸水纸上，去除孔中的任何残留洗涤缓冲液和气泡。
6. 向每个孔中加入100微升的TMB底物。
7. 用板封膜覆盖微孔板，在室温下孵育15分钟，在微孔板振荡器上以700-900转每分钟的速度摇动。
8. 向每个孔中加入100微升的终止溶液，并轻轻摇动微孔板以混合内容物。在进行下一步之前，去除任何气泡。
9. 将微孔板放入能够读取450纳米吸光度的微孔板阅读器中。在加入终止溶液后应立即分析微孔板，且不得超过30分钟。
胰岛素ELISA结果计算：
从标准品中构建标准曲线。零标准应作为空白，其平均值从每个孔中减去。建议使用软件程序来计算标准曲线并确定样本的浓度。胰岛素ELISA是一种配体结合测定，其响应与分析物浓度呈现S形关系。目前被普遍接受的此类曲线的参考模型使用4或5参数逻辑（pl）拟合，因为这些模型可以在更大的范围内优化准确性和精确度。尽管三次样条和其他模型是可以接受的方法，但它们通常在范围的低端和高端显示出较低的测定内准确性和精确度。在以下示例中，使用了5参数逻辑拟合来最大化低浓度样本的准确性和精确度。然而，由于个别实验室条件的影响，所有模型在可检测范围的最低端和最高端的准确性和精确度都是有限的。因此，在解释分析物响应变得非线性时所得出的结果时，应始终谨慎。
胰岛素ELISA文献参考：
Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.
https://www.amyjet.com/products/ALP-80-INSHU-E01.1.shtml
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前白蛋白（小鼠）ELISA试剂盒，高灵敏度双位点ELISA
前白蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量小鼠血清和血浆样本中的前白蛋白。仅供研究使用。不用于诊断程序。
ALPCO前白蛋白（小鼠）ELISA试剂盒检测原理：
在该测定中，样品中存在的前白蛋白与吸附在聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗前白蛋白抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗前白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的前白蛋白形成复合物。在另一个洗涤步骤之后，通过添加显色底物3,3'，5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附结合的酶。结合酶的量与被测样品中前白蛋白的浓度直接相关；因此，450nm处的吸光度是测试样品中前白蛋白浓度的量度。测试样品中前白蛋白的量可以从标准品构建的标准曲线中插值，并根据样品稀释进行校正。
艾美捷前白蛋白（小鼠）ELISA试剂盒（ALP-41-PALMS-E01）组成：
试剂盒及其组件的有效期在包装盒标签上注明。如果按照本试剂盒方案说明书进行储存和使用，所有成分在有效期前都是稳定的。
未提供的必需材料：
- 用于制作和分配稀释液的精密移液管（2微升至1000微升）
- 试管
- 微孔板洗涤器/吸液器
- 蒸馏水或去离子水
- 微孔板阅读器
- 用于配制试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿
- 计时器
- 离心机
- 抗凝剂（用于收集血浆样本）
前白蛋白（小鼠）ELISA试剂盒样本收集和处理：
所有血液成分和生物材料应被视为潜在的危险物质。在处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血，或者样本的完整性受到质疑，请做好记录并谨慎解释结果。下面列出的样本收集和储存条件是一般指南。尚未评估样本的稳定性。
- 血清样本 - 应通过静脉穿刺采集血液。血液凝固后，通过离心分离血清。取出血清并立即检测，或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。
- 血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。
- 已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。
前白蛋白（小鼠）ELISA试剂盒结果计算方法：
1. 从每个孔的测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。
2. 对每个标准品的重复读数取平均值，并使用这些结果绘制标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据，从而构建标准曲线。也可以使用二次多项式或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不够精确。
3. 从标准曲线上插值测试样本值。根据稀释因子进行校正，以得出原始样本中的前白蛋白浓度。
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GLP-1（活性7-36）ELISA试剂盒检测原理和操作注意事项说明
GLP-1（活性7-36）ELISA试剂盒高灵敏度试剂盒用于定量测定血浆样本中的生物活性胰高血糖素样肽-1（7-36）[GLP-1（7-36）]水平。GLP-1肽的主要氨基酸序列在哺乳动物物种中是相同的，即大鼠、小鼠、猪、人等。该试剂盒仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷GLP-1（活性7-36）ELISA试剂盒（ALP-43-GP1HU-E01）检测原理：
本ELISA试剂盒旨在用于定量测量血浆样本中的生物活性GLP-1（7-36）。该检测采用双位点“夹心”技术，使用两种选定的GLP-1（7-36）特异性抗体。标准品、对照品和测试样本直接加入到已涂有链霉亲和素的微孔板孔中。随后，向每个孔中加入生物素标记的GLP-1（7-36）特异性抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的GLP-1（7-36）特异性抗体的混合物。在第一次孵化期后，形成“链霉亲和素 – 生物素抗体 – GLP-1(7-36) – HRP标记抗体”的“夹心”免疫复合物，并附着在板壁上。在随后的洗涤步骤中去除未结合的HRP标记抗体。为了检测这种免疫复合物，每个孔随后与底物溶液孵育，在定时反应后，使用分光光度计微孔板阅读器进行测量。与微孔板孔壁上GLP-1（7-36）结合的免疫复合物的酶活性与样本中GLP-1（7-36）的含量成正比。
试剂：配制和储存
试剂盒在收到后必须存放在2-8°C。有关试剂盒的有效期，请参考试剂盒盒上的标签。所有组分在有效期前都是稳定的。
1. 链霉亲和素包被微孔板（10040B）
涂有链霉亲和素的微孔板。
数量：1 x 96孔微孔板
储存：2-8°C
配制：即用型
2. GLP-1追踪抗体（30229）
稳定蛋白质基质中HRP标记的抗GLP-1特异性抗体。
数量：1 x 0.6 mL
储存：2-8°C
配制：使用前必须与GLP-1（7-36）捕获抗体（30230）和追踪抗体稀释液（30017）混合。
3. GLP-1（7-36）捕获抗体（30230）
生物素标记的GLP-1（7-36）特异性抗体。
数量：1 x 0.6 mL
储存：2-8°C
配制：使用前必须与GLP-1追踪抗体（30229）和追踪抗体稀释液（30017）混合。
4. ELISA洗涤浓缩液（10010）
含有非氮化物防腐剂的磷酸盐缓冲液中的表面活性剂。
数量：1 x 30 mL
储存：2-8°C
配制：30倍浓缩。使用前必须用870 mL的蒸馏水稀释并充分混合。
5. ELISA HRP底物（10020）
含有稳定过氧化氢的四甲基联苯胺（TMB）。
数量：1 x 24 mL
储存：2-8°C
配制：即用型
6. 终止溶液（30357）
1.0 M 硫酸。
数量：1 x 12 mL
储存：2-8°C
配制：即用型
7. GLP-1校准品1至6级（30441 – 30446）
含有非氮化物、非汞基防腐剂的液体蛋白质基质中冻干的GLP-1（7-36）。
数量：6 x 瓶
储存：2-8°C（冻干），<-20°C（重组）。不要超过三次冻融周期。
配制：必须用1 mL的蒸馏水重组，静置10分钟，然后通过翻转或轻轻涡旋混合。使用前确保所有固体完全溶解。
8. GLP-1对照品（30447 – 30448）
含有非氮化物、非汞基防腐剂的液体蛋白质基质中冻干的GLP-1（7-36）。
数量：2 x 瓶
储存：2-8°C（冻干），<-20°C（重组）。不要超过三次冻融周期。
配制：必须用1 mL的蒸馏水重组，静置10分钟，然后通过翻转或轻轻涡旋混合。使用前确保所有固体完全溶解。
9. 追踪抗体稀释液（30017）
用于追踪抗体稀释
数量：1 x 12 mL
储存：2-8°C
配制：即用型。
操作注意事项：
1. 未能按照上述方法收集样本可能会导致由于内源性DPP4活性而出现错误结果。
2. 建议所有标准品、对照品和未知样本都要进行双份检测。应使用每份重复的平均吸光度读数进行数据分析和结果计算。
3. 对于浓度高于6级标准品的样本，建议使用适当的无GLP-1缓冲基质（例如标准零）进行稀释，以获得更准确的结果。
4. 光敏感试剂应保存在原始的琥珀色瓶中。
5. 将未使用的链霉亲和素包被条存放在带有干燥剂的铝箔拉链袋中，以防止受潮。
6. 仔细的技术和正确校准的移液设备对于确保测试的可重复性是必要的。
7. 与本说明书中所述不同的孵化时间或温度可能会影响结果。
8. 避免在微孔中产生气泡，因为这可能会导致结合效率降低和重复读数的变异系数（%CV）增加。
9. 使用前应轻轻且彻底地混合所有试剂，避免产生泡沫。
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GLP-1(7-36和9-36)ELISA试剂盒，高通量血浆定量检测
GLP-1(7-36和9-36)ELISA试剂盒用于定量测定血浆样本中胰高血糖素样肽-1（7-36）[GLP-1（7—36）]和（9—36）[GLP1（9—36]的总值。GLP-1肽的一级氨基酸序列在哺乳动物物种中是相同的，即大鼠、小鼠、猪、人等。该试剂盒仅用于研究目的。
GLP-1(7-36和9-36)ELISA在收到后必须存放在2-8°C的条件下。有关试剂盒的有效期，请参考试剂盒盒上的标签。所有组分在此有效期之前都是稳定的。使用前让所有试剂恢复至室温。不同批次号的试剂盒中的试剂不应混合或互换。
艾美捷ALPCO-GLP-1(7-36和9-36)ELISA试剂盒（ALP-43-GPTHU-E01）：
试剂：准备和储存
1.链霉亲和素包被的微孔板（目录号10040B）
一个易碎的微孔板，共有12×8条（总计96孔），涂有链霉亲和素。该板装框并密封在带有干燥剂的铝箔拉链袋中。此试剂应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
2.总GLP-1追踪抗体（目录号30360）
一个含有0.6毫升辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗GLP-1特异性抗体的小瓶，处于稳定的蛋白质基质中。使用前，此试剂必须与总GLP-1捕获抗体和追踪抗体稀释液混合（详见测定程序）。此试剂应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
3.总GLP-1捕获抗体（目录号30361）
一个含有0.6毫升生物素标记的总GLP-1特异性抗体的小瓶。只有在与总GLP-1追踪抗体和追踪抗体稀释液按照测定程序混合后才能使用。此试剂应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
4.洗涤浓缩液（目录号10010）
一瓶含有30毫升30倍浓缩液。使用前，内容物必须用870毫升蒸馏水稀释并充分混合。稀释后，这会产生一个含有磷酸盐缓冲液中表面活性剂的工作洗涤溶液，含有非叠氮化物和非汞基防腐剂。稀释后的洗涤缓冲液应存放在室温下，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
5.HRP底物（目录号10020）
一瓶含有24毫升四甲基联苯胺（TMB）和稳定的过氧化氢。此试剂应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
6.终止溶液（目录号30357）
一瓶含有12毫升硫酸。此试剂应存放在2-8°C或室温，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
7.GLP-1标准品（目录号30261-30265）
五个小瓶，含有不同水平的冻干GLP-1（7-36），在含有非叠氮化物、非汞基防腐剂的液体蛋白质基质中。请参阅各小瓶上确切的每种标准品的浓度。这些试剂应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
8.GLP-1对照品（目录号30266-30267）
两个小瓶，含有不同水平的冻干GLP-1（7-36），在含有非叠氮化物、非汞基防腐剂的液体蛋白质基质中。请参阅各小瓶上每种对照品的确切浓度范围。两种对照品都应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
9.追踪抗体稀释液（目录号30017）
一个含有12毫升即用型缓冲液的小瓶。它只应用于按照测定程序稀释追踪抗体。此试剂应存放在2-8°C，并在试剂盒盒上的有效期之前保持稳定。
GLP-1(7-36和9-36)ELISA试剂盒示例数据和标准曲线：
代表了该总GLP-1 ELISA的典型吸光度数据和所得标准曲线。该曲线不应代替每次测定的标准曲线。
GLP-1(7-36和9-36)ELISA试剂盒文献参考：
1. Levy JC. Therapeutic intervention in the GLP-1 pathway in Type 2 diabetes. Diabet Med.2006 Mar;23 Suppl 1:14-9.
2. Mannucci E, Ognibene A, Cremasco F, Bardini G, Mencucci A, Pierazzuoli E, Ciani S,Fanelli A, Messeri G, Rotella CM. Glucagon-like peptide (GLP)-1 and leptin concentrationsin obese patients with Type 2 diabetes mellitus. Diabet Med. 2000 Oct;17(10):713-9.
3. Nauck MA, Weber I, Bach I, Richter S, Orskov C, Holst JJ, Schmiegel W. Normalizationof fasting glycaemia by intravenous GLP-1 ([7-36 amide] or [7-37]) in type 2 diabeticpatients. Diabet Med. 1998 Nov;15(11):937-45.
4. Byrne MM, G?ke B. Human studies with glucagon-like-peptide-1: potential of the guthormone for clinical use.
5. Mannucci E, Tesi F, Bardini G, Ognibene A, Petracca MG, Ciani S, Pezzatini A, Brogi M,Dicembrini I, Cremasco F, Messeri G, Rotella CM. Effects of metformin on glucagon-likepeptide-1 levels in obese patients with and without Type 2 diabetes. Diabetes Nutr Metab.2004 Dec;17(6):336-42.
https://www.amyjet.com/products/ALP-43-GPTHU-E01.shtml