TET Activity试剂盒,即适用于手工操作又适用于高通量分析
目前只有有限的方法能用核提取物或者纯化酶来检测TET羟化酶活性/抑制剂.为解决这个问题,Epigentek提供TET Activity试剂盒--检测大范围种属的5mC羟化酶TET(TETs 1-3)活性/抑制,例如:哺乳动物,植物,真菌和细菌等多种形式,不受培养细胞,新鲜或者冰冻组织的限制。
TET Activity试剂盒(比色法)(不包含)绑定底物,并转换甲基化底物为羟甲基化产物.其产物可以被特异抗体所识别.比率或者大量的羟基化产物与酶活性成比例,然后通过酶标仪,450nm处比色法检测结果.TET酶活性与光密度值成比例.
艾美捷TET Activity试剂盒(#P-3086)组分:
TET Activity试剂盒特点:
1、比色法检测流程简单易用,方便,快速,完成时间需要5小时;
2、方便的测定TET转化羟甲基化产物,能直接检测TET的活性;
3、创新的试剂盒简单,准确,可靠,稳定并能保证低背景信号;
4、无论细胞/组织还是纯化的TET蛋白都适用于本试剂盒,还能在体内或者体外测定TEt羟甲基化酶抑制剂的功效;
5、高灵敏度,其活性检测可低至20ng纯化的TET羟化酶;
6、本试剂盒含有标准品,能特异的定量TET羟甲基化酶的活性;
7、微孔板形式即适用于手工操作又适用于高通量分析(96次实验)。
TET Activity试剂盒运输与储存:
试剂盒分为三部分进行运输:第一部分在常温下运输,第二部分和第三部分则在4°C的冷冻冰袋上运输。收到后,请按照以下方式储存:(1) 将TS、HC5、HC7、HC8、辅因子1、辅因子2和辅因子3存放在-20°C的避光环境中;(2) 将WB、HC6、DS和8孔检测条存放在4°C的避光环境中;(3) 将剩余的组分(TAB、BS和SS)存放在常温下的避光环境中。注意:使用前检查WB 10X洗涤缓冲液是否含有盐类沉淀物。如果有,将其在室温或37°C下加热并摇动缓冲液,直到盐类重新溶解。如果储存得当,试剂盒的所有组分从发货日期起稳定6个月。
相关产品:
核提取物制备
OP-0002-1 EpiQuik™ 核提取物制备试剂盒
DNA 羟甲基化
P-1036 MethylFlash™ 羟甲基化DNA定量试剂盒(比色法)
P-1037 MethylFlash™ 羟甲基化DNA定量试剂盒(荧光法)
P-1038 EpiQuik™ 羟甲基化DNA免疫沉淀(hMeDIP)试剂盒
P-3087 Epigenase™ 5mC-羟化酶TET活性/抑制试剂盒(荧光法)
https://www.amyjet.com/products/P-3086-48.shtml
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CUT&RUN丨CUT&RUN RNA m6A-Seq,操作时间少于1小时
N6-甲基腺苷(m6A)是真核生物RNA分子上Z常见和Z丰富的修饰。m6A修饰由甲基转移酶复合体METTL3催化,并通过m6A RNA去甲基化酶FTO和ALKBH5去除,这些酶以α-酮戊二酸(α-KG)和Fe2+依赖的方式催化m6A去甲基化。已知METTL3、FTO和ALKBH5在许多生物过程中发挥重要作用,包括发育、代谢和生育。m6A占所有RNA碱基甲基化的80%以上,存在于不同物种中。m6A主要分布在mRNA中,也出现在非编码RNA中,如tRNA、rRNA和snRNA。m6A在mRNA转录本中的相对丰度已被证明可以影响RNA代谢过程,如剪接、核输出、翻译能力和稳定性以及RNA转录。由于m6A RNA甲基化酶和去甲基化酶缺陷引起的m6A甲基化水平异常可能导致RNA功能障碍并引起疾病。例如,由于FTO突变患者中FTO活性增加,通过尚未定义的途径,目标mRNA中m6A水平异常低,有助于肥胖及相关疾病的发生。RNA上动态可逆的化学m6A修饰也可能作为具有深远生物学意义的新表观遗传标记。因此,更多有助于更好理解m6A RNA甲基化水平和分布的有用信息,可以促进疾病的诊断和治疗。
目前,有几种方法用于表观转录组范围的m6A定位。这些方法包括MeRIP-seq、PA-m6A-seq、miCLIP和m6A-CLIP。MeRIP-seq已被广泛使用,但无法实现m6A分析的高分辨率。PA-m6A-seq、miCLIP和m6A-CLIP提高了分析分辨率,但存在可重复性差和过程复杂的问题。特别是,这些方法耗时(>2天)且成本高。
为了解决这些问题,EpigenTek开发了一种新方法:CUT&RUN RNA m6A-Seq(在目标下切割并使用核酸酶回收用于m6A测序)。我们的创新方法结合了MeRIP和m6A-CLIP的优势,具有z快的程序,并将其整合到EpiNext™ CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒中。
艾美捷 EpiNext™ CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒(P-9016)特点:
1、高富集度:使用RNA切割酶混合液同时切割RNA,并在目标m6A含有序列的两端切割/移除任何RNA序列,而不会影响抗体占据的RNA区域。仅与抗m6A抗体结合的短RNA片段被生成。因此,可以可靠地识别真正的目标m6A富集区域,并实现高分辨率定位。
2、低输入量:未结合的RNA切割和免疫捕获在同一个管中进行,这使得目标m6A含有区域得到Z大程度的保护,同时Z小化样本损失,允许输入RNA低至500纳克。
3、Z小背景:在目标m6A含有序列的两端切割未结合的RNA序列,能够Z小化MeRIP/测序背景,允许数据分析时读取数少于1000万次。
4、快速、简化的程序:从RNA到cDNA库的程序少于6小时,且操作时间少于1小时。
5、高度方便:试剂盒包含CUT&RUN RNA m6A-Seq的每个步骤所需的所有组分,这些组分足以进行m6A含有RNA序列捕获和捕获的cDNA库制备,因此使CUT&RUN RNA m6A-Seq成为Z方便、可靠且结果一致的方法。
CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒检测原理:
EpiNext™ CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒包含了从总RNA开始进行成功的m6A-Seq所需的所有必要试剂。在反应中,目标m6A含有区域两端的RNA序列被切割/移除,并且使用结合有m6A捕获抗体的珠子捕获目标m6A含有片段。然后,目标m6A含有的RNA片段被回收、释放、逆转录,并连接接头。连接后的第一条链cDNA被扩增,然后用作文库合成的模板。使用高保真PCR混合液进行文库cDNA的扩增和索引。然后使用结合珠子清理cDNA。试剂盒中还包括一个阴性对照非免疫IgG,可以用来展示试剂盒的效果,并在富集RNA定量或生物分析仪分析步骤中展示性能。
EpiNext™CUT&RUNRNA m6A-Seq试剂盒的工作流程。
https://www.amyjet.com/products/P-9016-12.shtml
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CUT&Tag试剂盒--方便、可靠且结果一致的试剂盒
请在使用前阅读整个用户指南:
用途: EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒旨在从低输入量的细胞/染色质中富集特定蛋白(组蛋白或强结合转录因子)-DNA复合物,并为使用Illumina平台(如Illumina GenomeAnalyzer II、HiSeq和MiSeq系统)进行下一代测序准备文库。该试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组分允许捕获目标蛋白/DNA复合物,Z小化非特异性背景水平,并快速构建无条形码(单重)和有条形码(多重)文库,以便以较少的偏差和高分辨率绘制目标蛋白-DNA相互作用区域。
输入量: 对于细胞,一般每反应的量可以是2 x 10^3到2 x 10^5个细胞。为了Z佳准备,细胞输入量应为1 x 10^5,尽管cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒数据可以通过少至500个细胞获得修饰组蛋白的数据。对于从细胞或组织中分离的染色质,每反应的量可以是0.1微克到5微克的染色质。为了Z佳准备,染色质输入量应为2微克。
起始材料: 起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,如从培养瓶或培养皿中培养的细胞、原代细胞、从血液、体液和新鲜/冷冻组织中分离的稀有细胞群体、从整个细胞群体中分选的特定细胞和胚胎细胞等。
抗体: 抗体应为ChIP级,以便识别与DNA或其他蛋白结合的蛋白。如果您使用的是未经ChIP验证的抗体,则应使用适当的对照抗体,如抗RNA聚合酶II、抗H3K4me3或抗H3K27me3,以证明抗体适合ChIP。
内部对照: 该试剂盒中提供了阴性和阳性ChIP对照。
注意事项: 为避免交叉污染,仔细将样品或溶液移液到PCR管中。使用防气溶胶屏障移液管尖,并在液体转移之间始终更换移液管尖。在整个过程中佩戴手套。如果手套与样品接触,立即更换手套。
CUT&RUN(目标下切割与释放使用核酸酶)和CUT&TAG(目标下切割与标记)是为有限生物材料的蛋白-DNA相互作用图谱开发的方法。虽然它们显著提高了图谱分辨率,但两者都成本高昂。此外,CUT&RUN需要昂贵的PA/Mnase融合蛋白,这种蛋白对A/T序列有显著偏好,导致目标蛋白相互作用的DNA区域图谱严重受到MNase消化水平的影响。除了与CUT&RUN相同的消化偏好外,由于Tn5转座酶酶引起的染色质的非目标可及性,CUT&TAG的特异性较低。因此,作为一种改进,我们开发了一种新技术:目标下切割并就地标记测序(CUT&Tag In-Place测序),用于绘制全基因组范围内的蛋白-DNA相互作用。
我们的创新方法结合了ChIPmentation、ChIP-exo和CUT&RUN的优势,并采用Z快的程序,将其整合到EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒中。
艾美捷CUT&Tag试剂盒特点:
1、高富集度:使用具有低序列偏好性的独特核酸切割酶混合液,同时将染色质碎片化,并在不影响目标蛋白占据的DNA的情况下,切割/移除目标蛋白/DNA复合物两端的任何DNA序列。因此,可以可靠地识别真正的目标蛋白富集区域,并实现高分辨率映射。
2、低输入材料:强大的无超声碎片化、未结合DNA切割和免疫捕获都在同一个单管中进行,采用珠上连接。这种方法允许在细胞和组织中使用,并允许Z大限度地降解保护目标蛋白,同时Z小化样本损失。结果,输入的细胞数量可以少至500个,或者染色质量可以低至50纳克。
3、就地标记:在DNA纯化之前,将DNA接头珠上连接(就地)到染色质,可以增加DNA片段大小,允许对结合转录因子(TF)的过短片段(例如:<70碱基对)进行纯化,以构建文库。
4、Z小背景:在原位切割目标蛋白/DNA复合物两端的未结合DNA序列,能够Z小化免疫捕获/测序背景,允许数据分析时读取数少于1000万次。
5、快速、简化的程序:从细胞到文库DNA的过程少于5小时。
6、高度方便:试剂盒包含CUT&Tag就地测序的每个步骤所需的所有组分,这些组分足以进行蛋白/DNA捕获和捕获的DNA文库准备,从而使cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒成为Z方便、可靠且结果一致的试剂盒。
CUT&Tag试剂盒检测原理:
EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒包含了从哺乳动物细胞开始进行成功的cTIP-Seq所需的所有必要试剂。在反应中,从细胞中分离出细胞核。目标蛋白-DNA复合物与感兴趣的ChIP级抗体结合/捕获。使用独特的核酸切割酶混合液,染色质被碎片化,目标蛋白/DNA复合物两端的DNA序列被切割/移除。在此过程中,被目标蛋白占据的DNA序列不受影响。接头被连接到珠子上与目标蛋白结合的DNA片段。然后,连接的DNA被释放、纯化,并使用高保真PCR混合液进行扩增,以构建文库DNA。DNA随后被清洁、释放和洗脱。试剂盒中包括一个阳性对照抗体(抗H3K9me3)、一个阴性对照非免疫IgG和对照染色质,这些可以用来在PCR/生物分析仪步骤中展示试剂盒的效果和性能。
EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒的工作流程。
https://www.amyjet.com/products/P-2032-12.shtml
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PROGEN/艾美捷抗AAV5兔多克隆血清:适用于亲和层析和WB
抗体与AAV5的病毒衣壳蛋白VP1、VP2、VP3反应;与AAV血清型1-4无交叉反应。
艾美捷PROGEN-抗AAV5兔多克隆血清:
货号:610137
数量:250微升
抗体类型:多克隆
宿主:兔
结合物:未结合
应用:亲和层析,西方印迹(WB)
纯化:稳定抗血清
反应性:AAV5
储存:短期储存在2-8°C;长期储存分装在-20°C;避免反复冷冻/解冻
预期用途:仅供研究使用
免疫原:AAV5衣壳
配方:含有0.09%的叠氮钠
注意事项:开瓶前需离心
WB含有抗AAV5抗体(目录号610137,1:50)和二级抗兔HRP抗体
PROGEN-抗AAV5兔多克隆血清主要特性:
1、兔多克隆抗体
2、适用于亲和层析和西方印迹(WB)
3、与AAV5反应
PROGEN-抗AAV5兔多克隆血清相关产品:
anti-AAV5, human chimeric, ADK5b-h1
Cat. No. 692349
anti-AAV5, human chimeric, ADK5b-h2
Cat. No. 692347
Dip’n’Check AAV5 - lateral flow assay
Cat. No. PR5205
OptiPrep™ - Iodixanol
Cat. No. 1893
AAV5 ELISA Control
Cat. No. PRAAV5-C
AAV5 empty capsids
Cat. No. 66V050
AAV5 standard material (eGFP)
Cat. No. 66V051
AAV5 Titration ELISA
Cat. No. PRAAV5
Progen提供各种抗体用于鉴别AAV感染的不同阶段以及rAAV的组装分析。艾美捷科技是PROGEN的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/PROGEN-new.shtml