TET Activity试剂盒,使检测简单、准确、可靠和一致
TET家族的5mC羟化酶包括TET1、TET2和TET3。这些TET蛋白可能通过结合富含CpG的区域来防止不必要的DNA甲基转移酶活性,并通过羟化酶活性将5mC转化为5hmC,进而转化为5-羧基胞嘧啶(5-caC)来促进DNA去甲基化。研究表明,基因组5hmC水平与TET羟化酶活性相关。此外,TET1在转录激活和抑制中显示出双重功能,通过结合ES细胞中的不同目标基因。TET1也是急性髓系白血病中MLL基因的融合伴侣,被认为是一种致癌蛋白。TET2被发现在白血病中经常发生突变,被认为是一种肿瘤抑制因子。TET3已被证明在哺乳动物合子的DNA甲基化重编程过程中发挥独特作用。因此,激活肿瘤抑制因子TET酶如TET2或抑制致癌蛋白TET酶如TET1,在癌症诊断和开发新的基于靶点的癌症治疗中将非常重要。然而,目前检测TET羟化酶活性/抑制的方法很少,既适用于核提取物,也适用于纯化的酶。
为了解决这个问题,EpigenTek开发并提供了Epigenase™ 5mC羟化酶TET活性/抑制检测试剂盒(比色法)。
TET Activity试剂盒(比色法)(不包含)绑定底物,并转换甲基化底物为羟甲基化产物.其产物可以被特异抗体所识别.比率或者大量的羟基化产物与酶活性成比例,然后通过酶标仪,450nm处比色法检测结果.TET酶活性与光密度值成比例.
该TET Activity试剂盒(#P-3086)具有以下优点和特点:
1、比色法检测,步骤简单明了,方便快速。整个程序可在5小时内完成。
2、直接通过检测TET转化的羟甲基化产物来测量TET羟化酶活性。
3、创新的试剂盒组成使背景信号极低,使检测简单、准确、可靠和一致。
4、既可以使用细胞/组织提取物,也可以使用纯化的TET蛋白,这允许检测体内外TET羟化酶抑制剂的抑制效果。
5、新颖的检测原理实现了高灵敏度。即使是低至20纳克的纯化TET1羟化酶的活性也能被检测到。
6、包含羟甲基化标准品,允许量化TET羟化酶的特异性活性。
7、条状微孔板格式使检测灵活:可进行手动或高通量分析(96次检测)。
艾美捷TET Activity试剂盒原则与程序:
在该测定中,甲基化底物被稳定地涂覆在微孔板孔上。活性TET与底物结合,将甲基化底物转化为羟甲基化产物。TET转化的羟甲基化产物可以用特异性抗体识别。羟甲基化产物的比例或量与酶活性成正比,然后可以通过读取微孔板分光光度计在450nm波长下的吸光度进行比色测量。TET酶的活性又与测量的光密度强度成正比。
TET Activity试剂盒用户指南:
用途: Epigenase™ 5mC羟化酶TET活性/抑制检测试剂盒适用于使用核提取物或纯化的TET同工酶(TET 1-3)从包括哺乳动物、植物、真菌和细菌在内的广泛物种中测量总5mC羟化酶TET酶的活性/抑制,并且可以应用于包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织等多种形式。
起始材料: 输入材料可以是核提取物或纯化的TET酶。每个检测所需的核提取物量可以是2微克到20微克,最佳范围为5-10微克。纯化酶的用量可以是20纳克到1微克,具体取决于酶的纯度和催化活性。
内部控制: 本试剂盒提供了TET检测标准品(5-羟甲基胞嘧啶),用于量化TET酶活性。由于TET活性可能因组织而异,以及正常和疾病状态之间可能存在差异,建议运行重复样本以确保产生的信号是经过验证的。
注意事项: 为了避免交叉污染,请小心地将样本或溶液滴入条状微孔板孔中。使用防气溶胶的移液管头,并在液体转移之间始终更换移液管头。在整个过程中佩戴手套。如果手套与样本接触,请立即更换手套。
https://www.amyjet.com/products/P-3086-48.shtml
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亚硫酸氢盐测序试剂盒丨EpiNext 高敏感亚硫酸盐测序试剂盒(illumina)
DNA甲基化是通过在胞嘧啶环的5-碳上共价添加一个甲基基团(CH3),从而形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)。DNA甲基化在调节几乎所有生物过程中的基因表达中起着至关重要的作用,包括发育、生长和分化。DNA甲基化的改变已被证明会导致基因表达的变化。例如,高甲基化会导致基因沉默或基因表达降低,而低甲基化则激活基因或增加基因表达。异常的DNA甲基化也与疾病的病因有关,如癌症、自身免疫性疾病和精神分裂症。因此,全基因组DNA甲基化分析可以提供有价值的信息,用于发现用于疾病诊断的表观遗传标记,以及用于治疗的潜在靶点。
目前,全基因组亚硫酸盐测序(WGBS)或简化代表性亚硫酸盐测序(RRBS)等几种方法用于全基因组DNA甲基化分析。这些方法将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而5-mC在亚硫酸盐处理中保持不变。这允许将表观遗传差异解释为遗传差异,然后可以通过单碱基分辨率和全基因组范围内的测序来检测。然而,实现这一点的传统方法仍然没有实际应用,因为(1)这些方法需要大量的DNA(>1微克)作为输入材料,这在从有限的生物样本(如肿瘤活检样本、早期胚胎、胚胎组织和循环DNA)中制备是困难的;(2)这些方法要求DNA首先被剪切,然后与适配器连接,接着进行亚硫酸盐转化(连接后亚硫酸盐转化)。这个过程导致大多数包含在适配器-DNA片段构建中的DNA片段断裂,从而形成单标签模板,在文库富集中将被移除。因此,在进行全基因组亚硫酸盐测序时会出现不完全覆盖和偏差;以及(3)这些方法耗时(2天)。为了克服这些方法的弱点,EpigenTek提供了EpiNext™高灵敏度亚硫酸盐测序试剂盒(Illumina)(#P-1056A)。
艾美捷亚硫酸氢盐测序试剂盒特点:
创新方法:允许同时进行亚硫酸盐转化和适当大小的DNA片段化。亚硫酸盐处理后的DNA可以直接连接到适配器,从而消除了通常在使用全基因组亚硫酸盐测序(WGBS)和简化代表性亚硫酸盐测序(RRBS)方法时发生的适配器连接片段断裂的可能性。
快速且流程简化的程序:从DNA亚硫酸盐处理到准备好的文库DNA,整个过程可以在6小时30分钟内完成。
完全转化:将未甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶(>99%),同时对甲基胞嘧啶到胸腺嘧啶的不当或错误转化忽略不计。
高灵敏度和高效率:创新的亚硫酸盐DNA适配器连接消除了片段丢失和选择偏差,使得输入DNA可以低至0.2纳克,非常适合对珍贵且有限的样本进行甲基化分析。该试剂盒可用于非条形码(单重)和条形码(多重)DNA文库的准备。
极其方便:试剂盒包含DNA文库准备每个步骤所需的所有组分,足够进行亚硫酸盐转化、连接、清洁、大小选择和文库扩增,从而使亚硫酸盐DNA文库准备流程化,以获得最可靠和一致的结果。
最小偏差:超高频(Ultra HiFi)扩增能够以最小的序列偏差和低错误率获得可重复的高产量DNA文库。
广泛的样本适用性:起始材料可以是来自各种组织/细胞样本的基因组DNA,如新鲜和冷冻组织、培养瓶或微孔板中的培养细胞、显微切割样本、石蜡包埋组织、活检、胚胎细胞、血浆/血清样本以及体液样本等。来自各种富集反应的DNA,如ChIP、MeDIP/hMeDIP或外显子捕获,也可以作为起始材料。
亚硫酸氢盐测序试剂盒检测原理:
该试剂盒包含了直接使用微量输入DNA生成的亚硫酸盐DNA成功制备文库所需的所有试剂。在这种制备过程中,DNA在亚硫酸盐处理的同时被转化为适当长度的片段。经过亚硫酸盐处理的DNA,以单链形式存在,随后同时转化为双链DNA并连接适配器。连接后的片段使用MQ结合珠进行大小选择和纯化,然后使用高保真度PCR混合液进行扩增,这确保了从最小量的起始材料中获得最大产量,并以低错误率和最小偏差提供了文库DNA的高度精确扩增。
https://www.amyjet.com/products/P-1056A-12.shtml
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CUT&RUN丨一文带你了解CUT&RUN实验的流程和使用指南
CUT&RUN(Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)是一种用于研究内源蛋白质与DNA相互作用的新技术。它是在2017年由染色质研究领域的大牛Steven Henikoff实验室发明的。这个方法结合了抗体靶向和原位核酸酶剪切的优势,提供了一种高效且精准的方法来分析染色质蛋白结合位点。 类似于ChIP(chromatin immunoprecipitation),CUT&RUN也是利用抗体靶向染色质相关修饰和蛋白,但其所需细胞量和测序深度比传统ChIP更低。
CUT&RUN实验可以用来分析多种蛋白的染色质图谱,包括PTMs,转录因子,染色质remodelers和染色质writers/readers。
CUT&RUN原理:
跟ChIP的靶点覆盖范围类似,CUT&RUN也适用于研究组蛋白修饰、转录因子、染色质修饰酶以及其他DNA结合蛋白在基因组上的结合位点。但跟ChIP不同的是,CUT&RUN是通过抗体靶向和核酸酶原位切割的方法,将目的蛋白结合的DNA从染色质上切割并释放出来。CUT&RUN的主要步骤是首先将细胞通透化,随后加入目的蛋白抗体特异性的结合在目的蛋白处,并招募和protein A/G偶联的微球菌核酸酶(pA/G-MNase),最后加入Ca²⁺激活MNase活性,切割目标区域的DNA并回收,用于qPCR检测或NGS建库测序。
CUT&RUN实验流程:
1. 收获细胞并和beads结合:
收获细胞,并且进行细胞计数,推荐起始细胞数量5千-50万个。用室温的wash buffer对细胞清洗两次后加入ConA beads,室温下温柔孵育5-10min,使细胞结合在beads上。
2. 细胞通透化处理和一抗孵育
在细胞和beads结合之后,将管子转移到磁力架上弃去上清,并加入适量抗体结合buffer重悬beads。按照1:100或者厂家推荐的浓度加入一抗,室温孵育2h或4℃孵育过夜。
3. 结合pA/G-MNase融合蛋白
抗体孵育完成后,将管子转移到磁力架上弃去上清,并加入适当清洗溶液清洗2-3次,去除未结合到目的蛋白上的多余游离抗体。最后一步清洗完成后,用含有pA/G-MNase融合蛋白的溶液重悬ConA beads,孵育时间最短可以室温孵育10分钟,或者可以4℃孵育1个小时。这一步是为了使MNase通过其融合的protein A/G被抗体招募到目的蛋白结合处。
4. DNA片段化与纯化
pA/G-MNase孵育完成后,将管子转移到磁力架上弃去上清,并加入适当清洗溶液清洗2-3次,去除没有结合到目的蛋白上的游离pA/G-MNase。最后一步清洗完成后,将管子放置在冰上,加入钙离子激活结合到目的蛋白上的pA/G-MNase,使其可以切割目的蛋白结合的DNA,此步孵育反应在冰上进行。切割完成后加入反应终止液,并在37℃孵育30分钟,这是为了将被切割的DNA释放到上清中。随后将管子转移到磁力架上吸附,小心地将上清转移到新的离心管子中。这里就是目的蛋白结合的DNA,随后进行DNA进行纯化回收。
DNA纯化回收后,可以进行文库构建,然后送测序分析。对于太少的细胞,Epigentek不太推荐做qPCR,因为起始细胞比较少,得到的目的DNA量非常低,qPCR的循环数会非常高。
艾美捷 EpiNext™ CUT&RUN RNA m6A-Seq试剂盒使用指南:
旨在从微量RNA输入中富集含有m6A的RNA片段,并为使用Illumina平台(如Illumina Genome Analyzer II、HiSeq和MiSeq系统)的下一代测序准备文库。试剂盒的创新工作原理、优化的协议和组分允许以最小的非特异性背景水平捕获m6A片段。富集的RNA特别适合快速构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,允许以较小的偏差和高分辨率映射m6A区域。
输入量: 一般来说,每个反应的总RNA量可以是1微克到20微克。为了最佳准备,输入量应该是10微克RNA,尽管使用总量低至500纳克的RNA也可以获得CUT&RUN RNA m6A-Seq数据。
起始材料: 起始材料可以包括各种哺乳动物细胞样本,如来自培养瓶或板的培养细胞、从血液、体液和新鲜/冷冻组织中分离的原代细胞或稀有细胞群体、从整个细胞群体中分选的特定细胞和胚胎细胞等。
抗体: 该试剂盒中使用的抗m6A兔多克隆抗体对m6A RNA片段具有高度特异性,具有MeRIP级,并且不与未甲基化的腺嘌呤RNA片段发生交叉反应。
内部对照: 该试剂盒提供了一个阴性对照非免疫IgG。
注意事项: 为了避免交叉污染,请小心地将样本或溶液滴入试管中。使用防气溶胶的移液管头,并在液体转移之间始终更换移液管头。在整个过程中佩戴手套。如果手套与样本接触,请立即更换手套。
https://www.amyjet.com/products/P-9016-12.shtml
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CUT&RUN试剂盒丨高富集度CUT&RUN试剂盒的检测原理
体内富集与组蛋白或转录因子(TF)复合的DNA,随后进行下一代测序,为研究全基因组蛋白质-DNA相互作用提供了一个有利的工具。 它允许分析特定蛋白质在活细胞中与DNA序列的结合。这种分析要求方法可靠地识别真正的目标蛋白质富集区域,特别是来自有限的细胞样本。这些样本可能包括从组织中分离出来的稀有细胞群体、从整个细胞群体中分选出来的特定细胞,以及如胚胎细胞等原代培养的亚群体细胞。此外,该方法应确保富集的DNA含有最小的背景,并且以最小的偏差和高分辨率映射蛋白质-DNA结合区域。
长期以来,实现这一目标的主要方法是染色质免疫沉淀,随后进行测序(ChIP-Seq)。 然而,ChIP的主要限制是它需要1)大量的输入材料,细胞或组织,以产生足够强的信号以覆盖背景噪声;以及2)在初始固定步骤中进行交联。目前有几种先进的方法可用于ChIP-Seq,以减少细胞数量或提高分辨率。这些方法包括ChIP-exo和ChIPmentation。ChIP-exo提供高分辨率映射,但耗时且需要大量输入细胞。而ChIPmentation使用转座酶和与测序兼容的适配器,以实现ChIP过程中的连接整合,它遵循传统的慢速(2天)ChIP程序,无法实现高分辨率映射。
CUT&RUN(Cleavage Under Target & Release Using Nuclease,目标下切割与释放使用核酸酶)是为释放有限生物材料中捕获的目标蛋白质/DNA复合物以映射蛋白质-DNA相互作用而开发的,它显著提高了映射分辨率。 然而,CUT&RUN需要昂贵的PA/Mnase融合蛋白,该蛋白具有显著的A/T序列偏差,导致目标蛋白质相互作用的DNA区域轮廓受到MNase消化水平的严重影响。因此,作为一种改进,我们开发了一种新技术:目标下切割并使用核酸酶快速恢复(CUT&RUN Fast),用于富集组蛋白或转录因子结合的DNA。我们的创新方法结合了ChIP-exo和CUT&RUN的优势,并具有超级快的程序,将其整合到EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒中。
艾美捷CUT&RUN试剂盒具有以下特点:
高富集度: 使用一种独特的核酸切割酶混合物,这种酶具有低序列偏差,能够同时将染色质片段化,并在目标蛋白质/DNA复合物的两端切割/移除任何DNA序列,而不影响目标蛋白质占据的DNA。富集的DNA片段大于20个碱基对,可以高效快速地回收。因此,可以在高分辨率映射中可靠地实现和识别目标蛋白质富集区域。
低输入材料: 强大的无需超声的片段化、未结合DNA的切割和免疫捕获都在同一个单管中进行,使用珠上连接。这种方法适用于细胞和组织,并允许最大限度地保护目标蛋白质的降解,同时最小化样本损失。结果,输入的细胞数量可以少至500个,或者染色质的量可以低至0.1微克。
最小化背景: 在目标蛋白质/DNA复合物的两端原位切割未结合的DNA序列,能够最小化免疫捕获的背景,允许进行少于1000万次读取的测序数据分析。
快速、流程简化的程序: 从细胞到文库DNA的程序不到3小时。
高度便捷: 试剂盒包含了CUT&RUN每个步骤所需的所有组分,因此EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒是最方便的,能够提供可靠和一致的结果。
EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒包含了从哺乳动物细胞或分离的核/染色质开始执行成功CUT&RUN所需的所有必要试剂。 在反应中,从细胞中分离出核。目标蛋白质-DNA复合物通过感兴趣的CHIP级抗体进行结合/捕获。使用一种独特的核酸切割酶混合物,染色质被片段化,目标蛋白质/DNA复合物两端的DNA序列被切割/移除。同时,目标蛋白质占据的DNA序列不受影响。然后对目标蛋白质结合的DNA进行纯化和洗脱。富集的DNA可用于分析蛋白质-DNA相互作用,尤其是用于下一代测序。
试剂盒中包括: 一个阳性对照抗体(抗H3K9me3)、一个阴性对照非免疫IgG,以及控制染色质,这些可以用来在PCR/生物分析仪步骤中展示试剂盒的效果和性能。
CUT&RUN试剂盒检测原理:
图 1. EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒的工作流程。
图 2. 使用EpiNext™ CUT&RUN Fast试剂盒进行目标蛋白质/DNA富集: 通过控制抗体(抗H3K9me3和抗RNA聚合酶II,EpigenTek)从100,000个Jurkat细胞中捕获组蛋白/DNA复合物。非免疫IgG作为对照。富集的DNA被纯化并通过荧光定量以比较富集倍数。
图3。库片段的大小分布。使用EpiNext™CUT&RUNFast试剂盒,组蛋白DNA复合物被对照抗体(H3K9me3)从Hela细胞分离的1 ug染色质中捕获,并用于DNA文库制备。290 bps左右的峰值反映了单核小体的插入大小(150 bps)。
https://www.amyjet.com/products/P-2028-24.shtml
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CUT&Tag试剂盒丨EpiNext cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒高度便捷
在体内富集组蛋白或转录因子(TF)复合的DNA,然后进行下一代测序,为研究全基因组蛋白质-DNA相互作用提供了有利的工具。它允许分析与活细胞中的DNA序列结合的特定蛋白质。这种分析要求该方法可靠地鉴定真正的靶蛋白富集区域,特别是从有限的细胞样品中。这些样品可以包括从组织中分离的稀有细胞群、从整个细胞群中分选的特定细胞和原代培养的亚群细胞如胚胎细胞。此外,该方法应确保富集的DNA包含最小的背景,并且蛋白质-DNA结合区域的作图具有最小的偏差和高分辨率。长期以来用于实现这一目标的主要方法是染色质免疫沉淀,然后测序(ChIP-Seq)。然而,ChIP的主要限制是它需要1)大量的输入材料,细胞或组织,以产生超过背景噪声的足够强的信号;和2)在初始固定步骤期间交联。有几种先进的方法可用于减少细胞数量或提高分辨率的ChIP-Seq。这些方法包括ChIP-exo、ChIPmentation。ChIP-exo提供了高分辨率的映射,但很耗时,并且需要大量的输入细胞。虽然ChIPmentation使用转座酶和测序兼容衔接子来实现ChIP过程中的连接整合,但它遵循传统的缓慢(2天)ChIP程序,无法实现高分辨率映射。
EpiNext™ cTIP(CUT& Tag In-Place)测序试剂盒是 从哺乳动物细胞开始成功进行cTIP-Seq所需的一整套试剂。该试剂盒旨在从低输入细胞/染色质中富集蛋白质(组蛋白或强结合转录因子)特异性DNA复合物,并使用Illumina平台(如Illumina Genome Analyzer II、HiSeq和MiSeq系统)制备用于下一代测序的文库。创新的工作原理、优化的方案和试剂盒的组分允许以最小化的非特异性背景水平捕获靶蛋白/DNA复合物,并快速构建非条形码(单重)和条形码(多重)文库,以便以较小的偏差和高分辨率映射靶蛋白-DNA相互作用区域。
艾美捷CUT&Tag试剂盒特点:
高富集度:使用一种独特的、具有低序列偏差的核酸切割酶混合物,能够同时将染色质片段化,并在不影响目标蛋白质占据的DNA的情况下,切割/移除目标蛋白质/DNA复合物两端的任何DNA序列。因此,可以可靠地识别真正的目标蛋白质富集区域,并实现高分辨率的映射。
低输入材料:强大的无需超声的片段化、未结合DNA的切割和免疫捕获都在同一个单管中通过珠上连接进行。这种方法适用于细胞和组织,并允许最大限度地保护目标蛋白质,同时最小化样本损失。结果,输入的细胞数量可以少至500个,或者染色质的量可以低至50纳克。
原位标记:在DNA纯化之前,将DNA适配器通过珠上连接(原位)连接到染色质上,这会增加DNA片段的大小,使得能够纯化那些对于转录因子(TF)来说太短的片段(例如:<70个碱基对),以便用于文库构建。
最小化背景:在目标蛋白质/DNA复合物的两端原位切割未结合的DNA序列,能够最小化免疫捕获/测序的背景,允许进行少于1000万次读取的数据分析。
快速、流程简化的程序: 从细胞到文库DNA的程序不到5小时。
高度便捷:试剂盒包含了CUT&Tag原位测序每个步骤所需的所有组分,这些组分足够用于蛋白质/DNA的捕获和捕获的DNA文库的准备,从而使cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒成为最方便的,能够提供可靠和一致的结果。
CUT&Tag试剂盒检测原理:
图 1. EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒的工作流程。
图 2. 使用EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒的文库片段大小分布: 通过控制抗体(H3K9me3)从Hela细胞分离的500纳克染色质中捕获组蛋白/DNA复合物,并用于DNA文库的准备。295个碱基对的峰值反映了单核小体(约150个碱基对)的插入大小。
图 3. 使用EpiNext™ cTIP(CUT&Tag In-Place)测序试剂盒的文库片段大小分布: 通过抗RNA聚合酶II(PoLII)抗体从50,000个Jurkat细胞中富集RNA聚合酶II/DNA复合物,并用于DNA文库的准备。280个碱基对的峰值反映了PoLII占据的插入大小(约130个碱基对)。
https://www.amyjet.com/products/P-2032-12.shtml
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快速MS-qPCR试剂盒:简单、可靠且一致的检测条件
DNA甲基化在基因表达调控、肿瘤发生以及其他遗传和表观遗传疾病中扮演着重要角色。因此,检测病变细胞中某些基因的甲基化情况可以为该疾病的鉴别提供非常有用的信息。近年来,已经开发了许多针对基因/序列特异性检测DNA甲基化的方法,其中甲基化特异性PCR(MS-PCR)是最常用的方法。MS-PCR通过亚硫酸盐转化DNA中的胞嘧啶为尿嘧啶,能够使用特异性的甲基化引物选择性地扩增甲基化序列。
MS-PCR在扩增亚硫酸盐处理后的DNA时面临挑战。由于原始GC丰富度造成的高目标序列冗余,会产生长链的胸腺嘧啶,这对于聚合酶来说通常很难读取。此外,由于需要延长时间来扩增亚硫酸盐处理后的DNA,以及化学转化后引物结合的减少,使得扩增变得困难。
EpigenTek提供了Methylamp™ MS-qPCR Fast试剂盒来解决这些问题。该试剂盒允许进行快速、特异性、敏感和可重复的甲基化特异性定量PCR处理。试剂盒中包含的新型热启动DNA聚合酶可以特别减少MS-qPCR所需的总体时间,从大约2.5小时缩短到只需70分钟。该试剂盒还通过显著增加引物-亚硫酸盐DNA模板的退火,同时减少非特异性退火,从而提高MS-qPCR的灵敏度和特异性。这带来了相当大的时间节省和更高效的MS-qPCR。
艾美捷Methylamp™ MS-qPCR试剂盒具有以下特点:
极快速的程序: 可以在70分钟内完成。
丰富的产量: 由于高扩增效率。
在MS-PCR中高度准确和特异性: 减少了假阳性结果。
便捷的主混合体系格式: 允许轻松设置反应。
简单、可靠且一致的检测条件。
可与任何基于模块的实时PCR仪器一起使用。
MS-qPCR试剂盒检测原理:
Methylamp™MS qPCR快速试剂盒提供了一种主混合格式,其中包含热启动DNA聚合酶、dNTP、MS-PCR增强剂、优化的缓冲液和插层绿色染料。这种主混合物便于反应设置。独特的热启动DNA聚合酶在环境温度下处于非活性状态,在95˚C下孵育几分钟即可重新激活,可以很容易地整合到现有的热循环步骤中。热启动DNA聚合酶与优化的缓冲液相结合,确保了MS qPCR的特异性和敏感性。绿色染料允许在不使用序列特异性探针的情况下进行DNA检测和分析。
快速MS-qPCR试剂盒相关产品:
DNA亚硫酸盐修饰:
BisulFlash™ DNA Modification Kit P-1026:快速DNA亚硫酸盐修饰试剂盒。
Methylamp™-96 DNA Modification Kit P-1008:96孔DNA亚硫酸盐修饰试剂盒。
Methylamp™ Whole Cell Bisulfite Modification Kit P-1016:全细胞亚硫酸盐修饰试剂盒。
Methylamp™ Coupled DNA Isolation & Modification Kit P-1002:DNA提取与修饰联用试剂盒。
DNA甲基化分析:
TuMinute™ PCR Clean-Up Kit P-1005:PCR产物清洁试剂盒。
Methylamp™ Universal Methylated DNA Kit P-1011:通用甲基化DNA试剂盒。
Methylamp™ Universal Methylated DNA Preparation Kit P-1019:通用甲基化DNA制备试剂盒。
DNA甲基化定量:
Methylamp™ Global DNA Methylation Quantification Ultra Kit P-1014B:全基因组DNA甲基化定量超级试剂盒。
SuperSense™ Methylated DNA Quantification Kit P-1021:甲基化DNA定量试剂盒。
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L3MBTL1 MBT Domains TR-FRET检测试剂盒,快速鉴定、稳定可靠
染色质的翻译后修饰(PTM)在基因转录调控、DNA修复以及许多其他细胞过程中发挥着关键作用。总体而言,染色质PTMs的组合构成了“组蛋白密码”的基础。这种密码由一大组蛋白质基序来解读,它们选择性地识别并结合特定的染色质PTM。这些阅读器结构域通常存在于转录因子和其他调节蛋白中,将它们的蛋白质定位到带有适当PTM的染色质上。此外,一个给定的蛋白质通常会在其旁边拥有多个阅读器结构域,可能为系统提供额外的特异性水平。
Cayman的L3MBTL1 MBT Domains TR-FRET检测试剂盒,是一种均相的TR-FRET检测方法,适用于高通量格式下快速鉴定Tudor结构域抑制剂。这种筛选检测方法稳定可靠,显示出Z'值大于0.6,并旨在协助早期发现和开发染色质阅读器结构域抑制剂。
艾美捷L3MBTL1 MBT Domains TR-FRET检测试剂盒:
货号:601030
同义词:H-l(3)MBT、致死(3)恶性脑瘤样蛋白1、L(3)MBT样
来源:动物/牛
储存条件:-80°C
运输条件:美国大陆地区使用干冰运输;其他地方可能有所不同
稳定性:有效期至少6个月
L3MBTL1 MBT Domains TR-FRET检测试剂盒示例数据:
示例数据此处显示的数据是使用此套件通常生成的数据示例;但是,您的结果将与这些结果不同。请勿使用以下数据直接与您的样本进行比较。你的结果可能会有很大差异。
左图:L3MBTL1 MBT结构域阳性对照对甲基化肽从L3MBTL1MBT结构域置换的典型抑制曲线。
右图:L3MBTL1 MBT结构域TR-FRET检测试剂盒的典型Zˊ数据。数据来自试剂盒手册中描述的24个阳性和阴性对照的重复孔。从这个实验中计算出的Z´为0.66。红线对应于每个控制值平均值的三个标准偏差。
部分文献参考:
1. Kim, J., Daniel, J., Espejo, A., et al. Tudor, MBT and chromo domains gaugethe degree of lysine methylation. EMBO Rep. 7(4), 397-403 (2006).
2. Filippakopoulos, P., Picaud, S., Mangos, M., et al. Histone recognition andlarge-scale structural analysis of the human bromodomain family. Cell149(1), 214-231 (2012).
3. Illingworth, R.S. and Bird, A.P. CpG islands - ‘A rough guide’. FEBS Lett. 583,1713-1720 (2009).
4. Strahl, B.D. and Allis, D. The language of covalent histone modifications.Nature 403, 41-45 (2000).
5. Filippakopoulos, P., Qi, J., Picaud, S., et al. Selective inhibition of BETbromodomains. Nature 468(7327), 1067-73 (2011).
6. Dawson, M.A., Prinjha, R.K., Dittmann, A., et al. Inhibition of BET recruitmentto chromatin as an effective treatment for MLL-fusion leukaemia. Nature478, 529-533 (2011).
https://www.amyjet.com/products/601030-9600.shtml