BMA Biomedicals钙颗粒蛋白B，MRP14，ELISA试剂盒测试原理
Peninsula Laboratories International, Inc.专门从事抗肽抗体和放射免疫分析领域，研究产品线包括为科研用户提供高品质的免疫学检测试剂，如 ELISA 试剂盒、放免试剂盒、免疫荧光试剂盒及抗体相关辅助试剂等。Peninsula Laboratories International (PLI)和BMA Biomedicals 已合并。BMA和PLI 分别专注于它们在免疫组织化学和免疫测定中的应用。
人类MRP8的分子量为11.0千道尔顿，而人类MRP14以13.3千道尔顿的形式存在，还有一种截短形式为12.9千道尔顿。Ca2+能够诱导形成如下形式的异质复合物：(MRP8)(MRP14)（简称MRP8/14）、(MRP8)2(MRP14)和(MRP8/14)2。MRP8和MRP14上各自有两个EF手型结构域。MRP14对钙的亲和力比MRP8高，而且C末端的EF2结构域的亲和力高于N末端的EF1。C末端结构域也主要决定了二聚体的特异性。EF2中的螺旋在钙离子结合时会发生大的构象变化，可能作为Ca2+诱导的构象变化的触发因素。MRP8/14的抗菌活性是由MRP14 C末端附近的多组氨酸序列通过螯合锌引起的，并且可以通过Zn2+逆转。两个亚基本身都没有显示出抗菌活性，这表明Ca2+诱导的二聚体化导致多组氨酸序列的暴露发生了变化。Ca2+诱导的花生四烯酸和多不饱和脂肪酸与MRP8/14的结合可以通过添加Zn2+或Cu2+来防止，这是通过影响钙依赖性脂肪酸结合口袋的构象来实现的。在MRP8和MRP14的摩尔浓度相等时，以及每个EF手型结构域的钙离子数量大于3时，发生最大的脂肪酸结合。
艾美捷BMA Biomedicals-钙颗粒蛋白B，MRP14，ELISA试剂盒（#S-1008）测试原理：
一步法非竞争性夹心酶联免疫吸附测定，试剂包含辣根过氧化物酶催化的四甲基联苯胺颜色反应，包括在多孔板阅读器中450/630nm处的反应停止和读数。
提供的试剂：
S-1008A：即用型预包被并稳定的微孔板 + 板盖（各1个）。
S-1008B：500纳克标准品，重组MRP14的稳定冻干制剂。
S-1008D*：检测缓冲液，3倍浓缩，轻微浑浊的蓝色溶液。
S-1008E：0.48%四甲基联苯胺，0.18% H₂O₂在乙醇/丙酮9:1中的溶液。需避光保存。
S-1008F*：TMB底物缓冲液（柠檬酸钾）。
S-1008R*：试剂混合物：两瓶1.1毫升（每瓶）的混合物，包含HRPO偶联的检测抗体，11倍浓缩。
*所有标有星号(*)的液体溶液都含有0.1%（体积/体积）的Kathon CG作为防腐剂。试剂盒在冷藏条件下至少稳定至标示的日期。
未提供的物料：停止溶液（1N硫酸）、用于稀释的塑料管；用于洗涤的等渗盐水、移液管、可重复吸取的移液管、8通道移液管（2个）、微孔板洗涤器和阅读器（450nm/630nm滤光片）。
计算方法：
由重复测定形成的，样本中的含量是通过微孔板计算软件（例如Softmax，Molecular Device）或手动借助标准曲线来计算的。如果样本稀释超出标准范围，应该用适当的稀释度重新进行测定。
测试程序：
向每个孔中加入100微升稀释后的试剂混合物（见上文）。如果您处理多列，使用可分配100微升的可重复吸取的移液管最为方便。 2a. 按照下文建议，向第1列和第2列的孔中分别加入50纳克/毫升（“50”）至0.2纳克/毫升（“0.2”）的标准品，每孔100微升。包括两个空白对照孔（如果是用重复样本工作的话），这两个孔各加入100微升的检测缓冲液。 2b. 向相应的孔中加入100微升适当稀释后的样本。
在湿润环境中室温下孵育90分钟。
用等渗盐水洗涤板子3次。用柔软的吸收纸拍干。此时稀释TMB底物溶液，准备好停止溶液和8通道移液管，以便及时停止颜色反应。
向每个孔中加入200微升稀释后的TMB底物溶液。在室温下孵育4分钟。在MRP14存在的地方会发生蓝色颜色反应。
通过向每个孔中加入100微升停止溶液来停止颜色反应。颜色从蓝色变为黄色。注意：停止溶液含有1N硫酸，具有腐蚀性并会导致烧伤。如果接触到眼睛，请立即用大量水冲洗并寻求医疗建议。
在大约15分钟内，如果可能的话，将参考波长设置为630纳米，读取450纳米处的吸光度。 建议的板子设置： 可以选择以下板子排列方式，其中St50至St0.2是从50纳克/毫升到0.2纳克/毫升的标准稀释液，如上所述。Sa-1至Sa-38是重复样本。Cont指的是已知MRP14含量的对照血清（试剂盒中不包含）。
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BMA Biomedicals-Apelin-17，纯化IgG：强效利尿神经肽
Peninsula Laboratories International, Inc.专门从事抗肽抗体和放射免疫分析领域，研究产品线包括为科研用户提供高品质的免疫学检测试剂，如 ELISA 试剂盒、放免试剂盒、免疫荧光试剂盒及抗体相关辅助试剂等。Peninsula Laboratories International (PLI)和BMA Biomedicals 已合并。BMA和PLI 分别专注于它们在免疫组织化学和免疫测定中的应用。
Apelin（也称为APLN）是一种肽，它在人类中由APLN基因编码。它是G蛋白偶联受体APJ的内源性配体，该受体表达在某些细胞类型的表面。Apelin在各种器官中有广泛表达，如心脏、肺、肾脏、肝脏、脂肪组织、胃肠道、大脑、肾上腺、内皮细胞以及人类血浆中。Apelin-17是一种强效的利尿神经肽，通过抑制血管加压素神经元活性和血管加压素释放来抵消血管加压素的作用。这种抗体是通过用与载体蛋白偶联的Apelin-17免疫兔子产生的。
艾美捷BMA Biomedicals-Apelin-17，纯化IgG：
货号：T-4824
批号：A04773
宿主物种：兔 IgG
数量：400微克
格式：来自抗血清的蛋白A亲和纯化，冻干，氮气包装。
通过添加0.2毫升蒸馏水进行复溶。此库存溶液含有2毫克/毫升IgG、磷酸盐缓冲液pH 7.4（PBS）和0.02%（重量/体积）的Thimerosal作为防腐剂。
稳定性：原始瓶：从交付日期起至少一年在4º - 8ºC下。通过在-20ºC或更低的温度下冷冻分装来最小化抗血清的反复冻融。
应用：这种抗体已经在ELISA中进行了测试和验证。其他应用，如免疫组化（IHC）、FACS或西方印迹（Western Blot）也可能有效。最终用户应确定z佳稀释度。
免疫原：合成肽H-Lys-Phe-Arg-Gln-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-GlyPro-Met-Pro-Phe-OH与载体蛋白偶联。
交叉反应性：
PEPTIDE: %:
Apelin-17 (human, bovine, mouse, rat) 100
Apelin-15 (human, bovine, mouse, rat) 0
Apelin-13 (human, bovine, mouse, rat) 0
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BMA Biomedicals-生长激素释放因子（GRF），纯化IgG在免疫测定中的应用
Peninsula Laboratories International, Inc.专门从事抗肽抗体和放射免疫分析领域，研究产品线包括为科研用户提供高品质的免疫学检测试剂，如 ELISA 试剂盒、放免试剂盒、免疫荧光试剂盒及抗体相关辅助试剂等。Peninsula Laboratories International (PLI)和BMA Biomedicals 已合并。BMA和PLI 分别专注于它们在免疫组织化学和免疫测定中的应用。
生长激素释放因子（GRF），也称为生长激素，是一种在下丘脑弓状核中产生的44个氨基酸的肽激素。GRF通过与垂体前叶细胞上的GRF受体（GHRHR）结合来刺激生长激素的产生和释放。这种抗体是通过用与载体蛋白偶联的生长激素释放因子对兔子进行免疫接种而产生的。
艾美捷BMA Biomedicals-生长激素释放因子（GRF），纯化IgG：
货号：T-4378
批号：960367
宿主物种：兔 IgG
数量：400微克
格式：来自抗血清的蛋白A亲和纯化，冻干，氮气包装。
复溶方法：添加0.2毫升蒸馏水。此库存溶液含有2毫克/毫升IgG、pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS），以及作为防腐剂的0.02%（重量/体积）Thimerosal。
稳定性：原始瓶：从交付日期起至少一年在4º - 8ºC下。通过在-20ºC或更低的温度下冷冻分装来最小化抗血清的反复冻融。
应用：这种抗体已经在针对生长激素释放因子的ELISA中进行了测试和验证。其他应用，如免疫组化（IHC）、FACS或西方印迹（Western Blot）也可能有效。最终用户应确定z佳稀释度。
交叉反应性：
GRF(rat) 100
GRF (human) 100
GRF (porcine) 0
GRF (bovine) 0
GRF(ovine,caprine) 0
GRF(mouse) 0
[His',Nle²]-GRF(1-32)amide (human) 0
VIP (human,bovine,porcine,rat) 0
PHI-27 (rat) 0
pTH(1-34)(human) 0
BMA Biomedicals-生长激素释放因子（GRF），纯化IgG相关产品：
S-1172：ELISA，适用于提取样本的高灵敏度检测
T-4060：抗生长激素释放因子（人类）纯化IgG
T-4374：抗生长激素释放因子（30-44）（人类）纯化IgG
T-4061：抗生长激素释放因子（人类）原液抗血清
T-4059：抗生长激素释放因子（人类）稀释抗血清
T-4377：抗生长激素释放因子（大鼠）稀释抗血清
T-4079：抗生长激素释放因子（大鼠）原液抗血清
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BMA Biomedicals-降钙素，纯抗血清：在细胞信号传导研究中的应用
Peninsula Laboratories International, Inc.专门从事抗肽抗体和放射免疫分析领域，研究产品线包括为科研用户提供高品质的免疫学检测试剂，如 ELISA 试剂盒、放免试剂盒、免疫荧光试剂盒及抗体相关辅助试剂等。Peninsula Laboratories International (PLI)和BMA Biomedicals 已合并。BMA和PLI 分别专注于它们在免疫组织化学和免疫测定中的应用。
降钙素是一种32个氨基酸的肽激素，定义了降钙素样蛋白家族。它是由更大的前肽的蛋白水解切割形成的，前肽是CALC1基因的产物，由人类甲状腺滤泡旁细胞和动物多咽体分泌。该激素通过降低血钙参与钙和磷代谢，并抵消甲状旁腺激素和维生素D3的影响。这种抗体是通过用降钙素偶联载体蛋白对兔子进行免疫接种而产生的。
艾美捷BMA Biomedicals-降钙素，纯抗血清：
货号：T-4027
批号：A12243
宿主物种：兔 IgG
数量：50微升
格式：原液未稀释抗血清，冻干，氮气包装。
复溶方法：添加50微升蒸馏水。这将产生等同于未稀释抗血清的浓度。
稳定性：原始瓶：从交付日期起至少一年在4º - 8ºC下。通过在-20ºC或更低的温度下冷冻分装来最小化抗血清的反复冻融。
应用：这种抗体已经在针对降钙素的ELISA中进行了测试和验证。其他应用，如免疫组化（IHC）、FACS或西方印迹（Western Blot）也可能有效。最终用户应确定z佳稀释度。
免疫原：合成肽 H-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2（二硫键），与载体蛋白偶联。
使用该抗体的竞争性ELISA中降钙素的典型滴定曲线：
BMA Biomedicals-降钙素，纯抗血清相关产品：
T-4026：抗降钙素（鲑鱼I型）纯化IgG
S-1166：ELISA，适用于提取样本的高灵敏度检测（鲑鱼I型）
S-1154：ELISA，无需提取，适用于血清/血浆样本
T-4025：抗降钙素（鲑鱼I型）稀释抗血清
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QuickZyme Biosciences敏感组织羟脯氨酸检测试剂盒：轻松测定胶原蛋白水平低的小组织样本
胶原蛋白代谢的失调可能导致如纤维化（胶原蛋白过多）或骨关节炎（胶原蛋白过少）等病理状态。因此，在许多与疾病相关的研究中，测量胶原蛋白的生成是重要的。
羟脯氨酸是一种非蛋白质氨基酸，在哺乳动物中出现在弹性蛋白和胶原蛋白中。它的存在主要限于胶原蛋白的三螺旋结构中，在那里它增加了三螺旋结构的稳定性。羟脯氨酸是在翻译后由酶脯氨酸羟化酶作用于特定的脯氨酸残基而形成的。组织水解产物中的羟脯氨酸可以用作胶原蛋白含量的直接测量。
QuickZyme敏感组织羟脯氨酸检测试剂是对Prockop和Udenfriend（《分析生物化学》，1960年，1: 228-239）描述方法的改进。该检测测量样本中存在的总羟脯氨酸量。如果这些羟脯氨酸是通过胶原蛋白的水解获得的，它代表了样本中存在的所有类型的胶原蛋白，而不会区分胶原蛋白的类型以及前胶原蛋白、成熟胶原蛋白和胶原蛋白降解产物。
该检测简单，产生的色素在570纳米处有z大的吸收。该检测被开发用于测量酸性组织和/或蛋白质水解产物中的羟脯氨酸，其方式是不需要酸解胶原蛋白后的干燥步骤，而这通常需要特殊设备。
现在羟脯氨酸可以很容易地在胶原蛋白水平低的小组织样本中测定。
艾美捷QuickZyme 灵敏组织羟脯氨酸测定法用于羟脯氨酸的定量测定。QuickZyme敏感组织羟脯氨酸检测试剂盒是唯1一种基于羟脯氨酸的检测试剂盒，它没有基质效应，也不需要进一步稀释水解产物，可以在低羟脯氨酸浓度的小样本中进行测量。此外，不需要干燥水解产物，从而实现了快速（<2小时）、灵敏和简单（96孔板型）的测定。
数据分析：
有几种选项可用于计算检测样本中羟脯氨酸浓度。建议使用一个软件包来处理数据，该软件包采用回归曲线拟合程序。如果没有可用的软件包，可以按照以下方法手动计算羟脯氨酸浓度。
1、计算每个标准品或样本的重复读数的平均值，并从所有读数中减去空白的平均值。
2、通过在y轴上绘制每个标准品的平均A570（减去空白）与x轴上的羟脯氨酸含量（0-12.5-25-50-100-150-200-300微摩尔羟脯氨酸）相对应，创建一个标准曲线。在图表上的点之间画出z佳拟合的线性化曲线。使用这个标准曲线将测试样本的A570值转换为微摩尔羟脯氨酸。这样就可以得到水解产物中的羟脯氨酸浓度。如果在水解后包括了稀释步骤，则应将浓度乘以稀释因子，以得到水解产物中的羟脯氨酸浓度。根据样本的准备情况，可以计算出原始样本中羟脯氨酸的含量。
典型的羟脯氨酸标准曲线：
所示的数据曲线（见下方）仅供参考。确切的A570值可能会根据每个实验略有不同。
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QuickZyme-Sensitive组织胶原测定，方法快速简单
胶原蛋白是细胞外基质的主要成分之一。胶原蛋白生成的失调可能导致如纤维化（胶原蛋白过多）或骨关节炎（胶原蛋白过少）等病理状态。因此，在许多与疾病相关的研究中，测量胶原蛋白的生成是重要的。QuickZyme敏感组织胶原蛋白检测试剂基于羟脯氨酸的检测。羟脯氨酸是一种非蛋白质氨基酸，在哺乳动物中主要出现在胶原蛋白中。组织水解产物中的羟脯氨酸可以用作组织中胶原蛋白含量的直接测量。
胶原蛋白的测量从在6M盐酸中于95°C完全水解组织样本开始。在水解产物中，使用Prockop和Udenfriend描述的方法的改进版本（《分析生物化学》，1960年，1: 228-239）来定量羟脯氨酸残基。该检测测量样本中存在的总羟脯氨酸量，这代表了样本中存在的所有类型的胶原蛋白，而不会区分胶原蛋白的类型以及前胶原蛋白、成熟胶原蛋白和胶原蛋白降解产物。
与其他基于羟脯氨酸的检测相比，QuickZyme敏感组织胶原蛋白检测没有基质效应，也不需要对水解产物进行稀释，从而能够在胶原蛋白浓度较低的小样本中进行测量。该检测方法简单，并且不需要酸水解后的干燥步骤，这通常需要特殊设备。
现在可以在胶原蛋白水平较低的小组织样本中轻松确定胶原蛋白
艾美捷QuickZyme Biosciences敏感组织胶原蛋白检测试剂盒基于通过胶原蛋白的酸水解获得的羟脯氨酸残基的定量比色测定。敏感组织胶原蛋白检测没有基质效应，也不需要对水解产物进行进一步稀释，从而能够在如肝脏这样的胶原蛋白浓度较低的小样本中进行测量。该检测方法简单，并且不需要酸水解后的干燥步骤，因此在水解步骤之后，可以在快速（小于2小时）且简便（96孔板格式）的检测中进行。
数据分析：
数据分析有几种可选的方法。建议使用一个软件包来处理数据，该软件包采用回归曲线拟合程序。如果没有可用的软件包，可以按照以下方法手动计算胶原蛋白浓度。
1、计算每个标准品或样本的重复读数的平均值，并从所有读数中减去空白的平均值。
2、通过在y轴上绘制每个标准品的平均A570（减去空白）与x轴上的胶原蛋白含量相对应（0-6.25–12.5–25-50–100–200–300微克胶原蛋白/毫升水解产物），创建一个标准曲线。在图表上的点之间画出最佳拟合的线性化曲线。使用这个标准曲线将测试样本的A570值转换为微克/毫升胶原蛋白。这样就可以得到水解样本中的胶原蛋白浓度。如果水解后包括了稀释步骤，这个浓度应该乘以稀释因子，以得到水解样本中的胶原蛋白浓度。
典型的胶原蛋白标准曲线
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QuickZyme可溶性胶原蛋白测定--各种类型的纤维胶原蛋白
胶原蛋白是细胞外基质的主要成分之一。胶原蛋白生产的失调可能导致如纤维化（胶原蛋白过多）或骨关节炎（胶原蛋白过少）等病理状态。因此，在许多与疾病相关的研究中，测量胶原蛋白的生成是重要的。QuickZyme胶原蛋白检测试剂基于染料Sirius Red与胶原蛋白的结合。染料结合后，胶原蛋白-染料复合物沉淀，形成一个有色的颗粒。这种颜色可以在碱性溶液中释放。
该检测可以测量各种类型的纤维胶原蛋白。z丰富的胶原蛋白类型是胶原蛋白类型I（皮肤、骨骼、血管、结缔组织）、类型II（软骨）和类型III（皮肤、骨骼、结缔组织）。该检测对胶原蛋白具有特异性。在50°C加热后信号会丧失，因为该检测不识别变性的胶原蛋白（明胶）。
该检测可用于分析可溶性胶原蛋白或通过乙酸单独或与胃蛋白酶结合溶解的胶原蛋白。该检测适用于在细胞培养基和细胞提取物中进行胶原蛋白分析。该检测至少在10%的血清浓度下不受影响。
艾美捷QuickZyme Biosciences可溶性胶原蛋白测定原理：
QuickZyme Biosciences可溶性胶原蛋白测定试剂盒组成：
板组和平衡板组，每组包含：
1个检测微板 96孔V型聚丙烯微板。根据样本数量，板子可以切割使用部分。
1个读取微板 96孔透明聚苯乙烯平底微板。此板用于在微板阅读器中测量540纳米处的吸光度；它也可以作为离心过程中的检测板的支架。
1个粘合板封条
胶原蛋白标准溶液 大鼠尾部I型胶原蛋白，20 mM乙酸中浓度为714微克/毫升。该溶液可用于多条标准线。
Sarstedt 1.5毫升管（含500微升）
染料溶液 含有Sirius Red染料的无菌溶液。
15毫升塑料瓶（含8毫升）
稀释缓冲液 用于空白和标准/样本稀释的无菌缓冲液。
30毫升塑料瓶（含20毫升）
洗涤缓冲液 含有洗涤剂（易燃）的缓冲液。
120毫升瓶（含80毫升）
检测溶液 无菌碱性缓冲液。
30毫升瓶（含18毫升）
开启的试剂盒/重组试剂的储存条件：
溶于20 mM乙酸中的胶原蛋白标准品：在4°C下储存，有效期z长1个月。
染料溶液：在4°C下储存，有效期z长1个月。
稀释缓冲液：在-20°C下储存，有效期z长6个月。
洗涤缓冲液：在-20°C下储存，有效期z长6个月。
检测溶液：可在4°C或室温下储存，有效期z长1个月
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QuickZyme-Hydroxyproline测定：高效生物化学分析解决方案
胶原蛋白代谢的失调可能导致如纤维化（胶原蛋白过多）或骨关节炎（胶原蛋白过少）等病理状态。因此，在许多与疾病相关的研究中，测量胶原蛋白的生成是重要的。
羟脯氨酸是一种非蛋白质氨基酸，在哺乳动物中主要出现在弹性蛋白和胶原蛋白中。它的存在主要限于胶原蛋白的三螺旋结构中，在那里它增加了三螺旋结构的稳定性。羟脯氨酸是在翻译后由脯氨酸羟化酶的作用从特定的脯氨酸残基形成的。组织水解产物中的羟脯氨酸可以用作胶原蛋白含量的直接测量。
QuickZyme羟脯氨酸检测试剂是对Prockop和Udenfriend描述的方法（《分析生物化学》，1960年，1: 228-239）的改进。该检测测量样本中存在的总羟脯氨酸量。如果这些羟脯氨酸是通过胶原蛋白的水解获得的，它代表了样本中存在的所有类型的胶原蛋白，而不会区分胶原蛋白的类型以及前胶原蛋白、成熟胶原蛋白和胶原蛋白降解产物。
该检测简单，产生的色素在570纳米处有z大的吸收。该检测被开发用于测量酸性组织和/或蛋白质水解产物中的羟脯氨酸，其方式是不需要酸解胶原蛋白后的干燥步骤，而这通常需要特殊设备。
艾美捷QuickZyme Biosciences-Hydroxyproline测定试剂盒组成：
2个粘合板封条
检测缓冲液
2个检测试剂A
检测试剂B
无菌水中的羟脯氨酸标准品（3 mM）
96孔检测板
检测协议手册
注意事项：
试剂盒包含正丙醇、高氯酸和二甲基亚砜。在样本水解和使用试剂盒过程中，请佩戴眼部、手部、面部和衣物防护装备。在通风柜中进行检测。
关键参数：
1、这类检测，像许多生化检测一样，可能会显示出基质效应：样本中的干扰因素影响信号。通过稀释水解产物可以避免这种效应。如果首次使用某种样本类型，应测试不同的稀释度，直到获得A570与稀释度的线性关系。通常至少需要5倍的稀释（在100毫克组织/毫升6M盐酸水解产物中）。应用说明中给出了几种小鼠组织的建议稀释度（请参阅产品网页）。
2、如果为了避免基质效应，特定样本类型所需的稀释度导致A570值非常低，我们建议使用QuickZyme敏感组织羟脯氨酸试剂盒。
3、检测中使用的样本应存在于含有4-6M盐酸（酸水解）或2-4M氢氧化钠（碱水解）的溶液中。
4、在检测的z后一步，60°C下颜色发展的孵化时间为1小时。这是基于在烘箱中的孵化。如果在板式孵化器中进行孵化（孵化器与板之间接触紧密），则缩短孵化时间（20-30分钟）就足够了。
5、当检测缓冲液加入35微升的水解产物时，可能会出现混浊现象，这将在一分钟内消失，不会影响检测。
6、在低温下，检测缓冲液中可能含有一些晶体。这些可以通过加热轻松溶解。
7、在室温以下，试剂A可能会变成凝胶状或固体，加热至37°C并涡旋混合可以解决这个问题。
典型的羟脯氨酸标准曲线（不减去背景）：
所示数据曲线（见下文）仅用于演示。精确的A570值在每次实验中可能略有不同
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