Epigentek-5mC-羟化酶TET活性/抑制分析试剂盒:比色法检测,步骤简单易跟
TET家族的5mC羟化酶包括TET1、TET2和TET3。这些TET蛋白可能通过结合到富含CpG的区域来防止不必要的DNA甲基转移酶活性,并通过羟化酶活性将5mC转化为5hmC,进而转化为5-羧基胞嘧啶(5-caC),从而促进DNA去甲基化。研究表明,基因组5hmC水平与TET羟化酶活性相关。此外,TET1在胚胎干细胞中通过结合不同靶基因显示出转录激活和抑制的双重功能。TET1也是急性髓性白血病中MLL基因的融合伴侣,被认为是一种癌蛋白。TET2在白血病中经常发生突变,被认为具有肿瘤抑制作用。TET3已被证明在哺乳动物合子中的DNA甲基化重编程过程中发挥独特作用。因此,在癌症诊断和开发新的基于靶点的癌症治疗中,激活肿瘤抑制因子TET酶如TET2或抑制癌蛋白TET酶如TET1将是重要的。然而,目前检测使用核提取物和纯化酶的TET羟化酶活性/抑制的方法很少。为了解决这个问题,EpigenTek开发并提供了Epigenase™ 5mC羟化酶TET活性/抑制检测试剂盒(比色法)。
5mC-羟化酶TET活性/抑制分析试剂盒用途:
适用于使用核提取物或从包括哺乳动物、植物、真菌和细菌等多种物种中纯化的TET同种型(TET 1-3)来测量总5mC羟化酶TET酶的活性/抑制。这些样本可以是培养细胞、新鲜和冷冻组织等多种形式,但不限于此。
艾美捷-5mC-羟化酶TET活性/抑制分析试剂盒(#P-3086)组分:
5mC-羟化酶TET活性/抑制分析试剂盒具有以下优点和特性:
比色法检测,步骤简单易跟,方便快速。整个程序可在5小时内完成。
直接测量TET羟化酶活性,通过直接检测TET转化的羟甲基化产物。
创新的试剂盒组合使背景信号极低,使检测简单、准确、可靠和一致。
可以使用细胞/组织提取物和纯化的TET蛋白,这允许检测体内外TET羟化酶抑制剂的抑制效果。
新颖的检测原理实现了高灵敏度。可以检测低至20纳克的纯化TET1羟化酶的活性。
包含羟甲基化标准品,可以量化TET羟化酶的特异性活性。
条形微孔板格式使检测灵活:手动或高通量分析(96个检测)。
原理与操作流程:
在这个检测中,一个甲基化的底物被稳定地包被在微孔板孔中。活性的TET酶与底物结合,将甲基化底物转化为羟甲基化产物。这些由TET转化的羟甲基化产物可以被特定的抗体识别。羟甲基化产物的比率或数量,与酶活性成正比,可以通过在450纳米波长的微孔板分光光度计上读取吸光度来进行比色测量。TET酶的活性反过来与所测量的光密度强度成正比。
5mC-羟化酶TET活性/抑制分析试剂盒运输与储存:
试剂盒分三部分运输:第一部分在常温下运输,第二和第三部分则在4°C的冰冻冰袋中运输。收到后请按以下方法储存:(1) 将TS、HC5、HC7、HC8、辅因子1、辅因子2和辅因子3存放在-20°C的避光环境中;(2) 将WB、HC6、DS和8孔检测条存放在4°C的避光环境中;(3) 将其余组分(TAB、BS和SS)存放在常温的避光环境中。
注意:使用前检查WB 10X洗涤缓冲液是否含有盐类沉淀物。如果有,将其在室温或37°C下加热并摇动缓冲液,直到盐类重新溶解。
如果储存得当,试剂盒的所有组分从发货日期起稳定有效期为6个月。
相关产品:
核提取物制备:
OP-0002-1 EpiQuik™ 核提取物提取试剂盒
DNA 羟甲基化:
P-1036 MethylFlash™ 羟甲基化DNA定量试剂盒(比色法)
P-1037 MethylFlash™ 羟甲基化DNA定量试剂盒(荧光法)
P-1038 EpiQuik™ 羟甲基化DNA免疫沉淀(hMeDIP)试剂盒
P-3087 Epigenase™ 5mC-羟化酶TET活性/抑制试剂盒(荧光法)
https://www.amyjet.com/products/P-3086-48.shtml
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细胞毒性小或无的FuGENE SI RNA转染试剂,使用指南
FuGENE SI RNA转染试剂利用与 DNA 转染试剂相同的温和可靠性,FuGENE SI,这是一种为 siRNA 传递而设计的创新 RNA 转染试剂。FuGENE SI 是一种 100% 合成的多组分转染试剂,专为将 RNA 分子传递到真核细胞系而设计。
FuGENE SI转染试剂是一种多组分试剂,它能与siRNA、miRNA和其他小RNA形成复合物,然后安全高效地将其运输到真核细胞内。
艾美捷FuGENE SI RNA转染试剂(#SI-1000)的优势包括:
在对细胞温和的同时,提供优质的敲低效率。
在许多常见的细胞类型和难以转染的细胞系中具有高转染效率。
细胞毒性z小或无,允许您使用较少的细胞进行工作,并消除了更换培养基的要求。
需要z小的优化。
灵活且快速的协议。
RNA干扰:
FuGENE SI专为将siRNA、miRNA和其他小RNA输送到常规和难以转染的细胞系而设计。以10nM的siRNA作为起点。
细胞培养条件:
通过使用经常传代、增殖良好(z好处于对数生长期)、并以一致的密度接种的细胞,z小化转染效率的变异性。
其他培养基添加剂:
在某些细胞类型中,通常包含在细胞培养基中的抗菌剂(例如,抗生素和杀真菌剂)可能对FuGENE SI转染试剂的转染效率产生不利影响。如果可能,z初实验时排除这些添加剂。一旦建立了高效率的条件,可以在监测您的转染结果的同时重新添加这些组分。
孵育时间:
将细胞孵育24至72小时。孵育时间的长度取决于siRNA基因靶标、被转染的细胞类型,以及所使用的下游检测方法。在此孵育期后,使用适合您系统的检测方法测量基因或蛋白表达。
附加所需试剂和耗材:
1.) 无菌、无血清的DMEM培养基,无添加剂或补充剂。
2.) siRNA、miRNA或相关的小RNA。
细胞转染前的准备:
选择以下选项之一:
选项 1:快速前向协议:
在转染当天,接种细胞(通常是在传统协议中细胞接种量的2倍,即在转染前一天接种细胞)。直接进行转染。
选项 2:传统前向协议:
在转染实验前一天,用胰蛋白酶处理细胞,调整细胞浓度,并进行接种。将细胞放置在孵化器中过夜。
选项 3:反向(高通量筛选)协议:
按照说明在试剂板中制备FuGENE SI和siRNA复合物,直接将细胞添加到含有复合物的试剂板中(通常是在传统前向协议中细胞接种量的2倍)。
如何使用FuGENE SI RNA转染试剂?
概述的协议将生成足够的主混合液,用于转染单个35毫米培养皿、6孔板的一个孔、24孔板的五个孔,或96孔板的二十五个孔,比例为推荐起始比例(每个96孔板孔0.3微升FuGENE SI + 1皮摩尔siRNA)。对于进一步的扩展和其他容器尺寸,请参见表1。
1.) 使用前让FuGENE SI转染试剂、RNA和培养基调整至室温。旋涡混合一秒,或倒置FuGENE SI转染试剂瓶以混合。
2.) 在两个不同的管中用无血清培养基(无抗生素或杀真菌剂)稀释FuGENE SI试剂和siRNA:
标记两个管:1.) “FuGENE SI” 2.) “siRNA”。
管1:通过将7.5微升FuGENE SI吸入117.5微升培养基中,准备125微升稀释的FuGENE SI。立即轻敲管子或旋涡混合一秒以混合。
管2:通过将2.5微升10微摩尔siRNA吸入122.5微升培养基中,准备125微升200纳摩尔siRNA。轻敲管子或旋涡混合以混合。
3.) 形成FuGENE SI和siRNA复合物:
将125微升稀释的siRNA(管2 “siRNA”)加入到125微升稀释的FuGENE SI(管1 “FuGENE SI”)中,制成250微升的复合溶液。轻敲管子或旋涡混合一秒以混合。
4.) 孵育siRNA-FuGENE SI复合物:
在室温下孵育siRNA-FuGENE SI复合物5分钟(z长可达15分钟)。
5.) 将siRNA-FuGENE SI复合物加入细胞:
从孵化器中取出培养容器。无需移除生长培养基。以滴加方式将siRNA-FuGENE SI复合物加入细胞。摇动孔板或烧瓶以确保分布到整个板表面。
35毫米容器:加入250微升至孔中(每个孔z终使用量:25皮摩尔siRNA + 7.5微升FuGENE SI)
24孔板:每个孔加入50微升(每个孔z终使用量:5皮摩尔siRNA + 1.5微升FuGENE SI)
96孔板:每个孔加入10微升(每个孔z终使用量:1皮摩尔siRNA + 0.3微升FuGENE SI)
关于向其他容器尺寸添加复合物的数量的详细信息,请参见表1。
6.) 孵育细胞24-72小时。然后,通过选择的方法分析转染的细胞。
注意:
与任何实验一样,包括适当的对照。准备未转染的细胞孔、仅含转染试剂的细胞孔,以及适当的阳性和阴性检测对照孔。
siRNA与FuGENE SI的z佳比例,以及添加复合物的z佳总量可能因细胞系、细胞密度、检测日和基因靶标而异。我们建议在96孔板的每个孔中测试0.1-10.0皮摩尔siRNA和0.15-0.6微升FuGENE SI。
表1:制备各种培养容器尺寸的FuGENESI+siRNA复合物的指南表1强调了各种容器尺寸的起始量,使用1pmol siRNA+0.3ul FuGENE SI建议的96孔培养容器单孔起始量。请注意,这只是一个起点,对于特定的细胞系和应用,可能需要优化siRNA+FuGENESI比例和每孔添加的复合物总量。
https://www.amyjet.com/products/SI-1000.shtml
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FuGENE丨FuGENE HD转染试剂,轻松优化高性能转染
轻松优化高性能转染:
根据用户指南,将A549、COS7、HCT116、HEK293和HeLa细胞接种在96孔板中,随后用FuGENE®HD试剂和GFP表达质粒以各种FuGENE HD与总DNA的比例转染。24小时后,利用流式细胞术分析细胞的转染效率。标准化GFP表达的数据绘制在图1中,突出显示了每个测试细胞系的z佳FuGENE HD与DNA比率。
FuGENE HD的优势:
依赖于在1000多种细胞类型中证明的高转染效率,避免耗时的优化程序,包括许多“难转染”的细胞。
z小化毒性或无毒性。
可在无血清或含血清的培养基中进行转染。
通过减少多个操作步骤节省时间和劳力。只需稀释FuGENE® HD,与其与质粒DNA孵育,然后将混合物直接滴加到您的细胞上。
与竞争试剂相比,每次转染使用的试剂量更少。
艾美捷FuGENE丨FuGENE HD转染试剂:
图2:使用FuGENE HD转染查看Unseen
图3:FuGENE®HD与Lipofectamine®3000相比具有z越的转染性能:根据用户指南将HCT116细胞接种在96孔板中,随后以推荐的3:1比例用FuGENE®HD或Lipofectamine®3000+GFP表达质粒转染。然后在转染后24、48和72小时通过流式细胞术分析细胞,以测量表达+GFP的细胞和总细胞活力(碘化丙啶)。图中显示了FuGENE®HD相对于Lipofectamine®3000在HCT116细胞中的优越性能。
FuGENE HD转染试剂关键应用领域:
病毒与蛋白质生产
基因表达
细胞分析
癌症研究
难转染细胞
稳定细胞系生产
艾美捷科技是FuGENE的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/FuGENE.shtml
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FuGENE丨FuGENE 6:更高的细胞存活率获得更高产量的稳定转染
FuGENE 6可用于基因表达、癌症生物学、基于细胞的蛋白质和病毒生产的研究,以及功能基因组学、蛋白质组学和细胞分析的许多其他应用。
艾美捷FuGENE丨FuGENE 6的优势:
依赖于在800多种细胞类型中证明的高转染效率,避免耗时的优化程序,包括许多“难转染”的细胞。
利用FuGENE 6®的低细胞毒性,获得生理相关的结果。
可在无血清或含血清的培养基中进行转染。
通过减少多个操作步骤节省时间和劳力。只需稀释FuGENE 6®,与其与质粒DNA孵育,然后将混合物直接滴加到您的细胞上。
每次转染使用的试剂量更少。
通过更高的细胞存活率获得更高产量的稳定转染。
轻松优化高性能转染:
根据用户指南,将A549、COS7、HCT116、HEK293和HeLa细胞接种在96孔板中,随后用FuGENE 6试剂和GFP表达质粒以各种FuGENE 6与总DNA的比例转染。24小时后,利用流式细胞术分析细胞的转染效率。标准化GFP表达的数据绘制在右侧的图表中,突出显示了每个测试细胞系的z佳FuGENE 6与DNA的比例。
FuGENE 6转染试剂关键应用领域:
病毒与蛋白质生产:涉及病毒载体的制备和蛋白质的表达。
基因表达:研究基因如何在细胞中转录和翻译成蛋白质。
细胞分析:对细胞的各种特性和功能进行分析和评估。
癌症研究:致力于癌症机理、诊断和治疗的研究。
难转染细胞:指那些难以通过常规方法进行基因转染的细胞类型。
稳定细胞系生产:指建立能够长期表达外源基因的稳定细胞系的过程。
艾美捷科技是FuGENE的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/FuGENE.shtml
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QuickZyme Biosciences敏感组织羟脯氨酸测定试剂盒,不到2小时!
QuickZyme敏感组织羟脯氨酸测定法用于羟脯氨酸的定量测定。QuickZyme Sensitive Tissue羟脯氨酸测定试剂盒是唯1一种基于羟脯氨酸的测定方法,它不显示基质效应,也不需要进一步稀释水解产物,从而能够在低羟脯氨酸浓度的小样品中进行测量。此外,不需要对水解液进行干燥,从而实现快速(<2小时)、灵敏且简单(96孔板型)的测定。
艾美捷QuickZyme Biosciences敏感组织羟脯氨酸测定试剂盒:
货号:QZBtishyp1
动态范围:6-300 微米
灵敏度:2.4 微米
样本体积:5 - 35 微升
格式:96孔板
预期用途:针对胶原蛋白水平低的组织和组织提取物进行了优化。
定量测定羟脯氨酸:
比色法在570纳米处读取结果。
快速/简便(无需样品干燥)。
物种无关性。
宽广的动态范围。
不需要特殊设备。
由于没有基质效应,优化适用于胶原蛋白含量低的组织。
可用于所有类型组织的胶原蛋白分析。
由于基质效应,许多asssays需要(>5倍)稀释。这种新的检测方法消除了基质效应,可以使用未稀释的样品
QuickZyme Biosciences-敏感组织羟脯氨酸测定试剂盒相关产品:
总胶原蛋白检测
敏感组织胶原蛋白检测
羟脯氨酸检测
可溶性胶原蛋白检测
人类MMP-2活性检测
人类MMP-7活性检测
人类MMP-8活性检测
人类和小鼠MMP-9活性检测
人类MMP-14活性检测
艾美捷科技是QuickZyme Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/QuickZyme-Biosciences-new.shtml
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QuickZyme Biosciences人颗粒酶B活性化验试剂组:操作简便且灵敏度高
QuickZyme人颗粒酶B活性化验试剂组特色:
人类活性颗粒酶B的定量测量
也能识别小鼠颗粒酶B
96孔板格式(每套2个板)
在405纳米处的比色读数
能够在一次检测中检测高低范围
操作简便且灵敏度高
每个样本的成本低
艾美捷QuickZyme Biosciences人颗粒酶B活性化验试剂组:
货号:QZBGrB2
动态范围:0.05 - 10 纳克/毫升
灵敏度:0.01 纳克/毫升(24小时孵育)
样本体积:10 - 100 微升
格式:96孔板
预期用途:组织匀浆、细胞培养上清液、血清、尿液
人颗粒酶B活性化验试剂组包括以下试剂:
2x无涂层96孔微孔板,2x Coatingantibody溶液,2x Granzyme B标准品,2x检测酶,2x显色底物,Protocol。
QuickZyme人颗粒酶B活性化验试剂组检测原理:
QuickZyme Biosciences-人颗粒酶B活性化验试剂组相关产品:
人类和小鼠MMP-9活性检测
人类MMP-2活性检测
人类MMP-7活性检测
人类MMP-8活性检测
人类MMP-14活性检测
可溶性胶原蛋白检测
羟脯氨酸检测
总胶原蛋白检测
艾美捷科技是QuickZyme Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/QuickZyme-Biosciences-new.shtml
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QuickZyme Biosciences:作为酶谱法的定量替代方法--人MMP-2活性测定
QuickZyme人MMP-2活性测定特色:
对人类活性和总MMP-2的定量测量
96孔板格式
在405纳米处的比色读数
能够在一次检测中同时检测高低范围
操作简便且灵敏度高
作为酶谱法的定量替代方法
现在基于单克隆抗体
艾美捷QuickZyme Biosciences人MMP-2活性测定:
货号:QZBmmp2Hv2
动态范围:0.02 - 16 纳克/毫升
灵敏度:0.04 纳克/毫升(2小时孵育)
0.02 纳克/毫升(6小时孵育)
4 皮克/毫升(过夜孵育)
交叉反应性:MMP-1, -3, -8, -9 < 0.05%,-13 <1%,-7 <7%
样本体积:10 - 100 微升
格式:96孔板
预期用途:细胞培养基,细胞和组织提取物,血清,尿液
人MMP-2活性测定包括以下试剂:
所有标准品、缓冲液和平板:预涂96孔微量滴定板、测定缓冲液、APMA、前检测酶、肽底物、洗涤缓冲液、人MMP-2标准品。
QuickZyme人MMP-2活性测定检测原理:
活性MMP-2:直接测量
Pro MMP-2:APMA激活后的测量
QuickZyme Biosciences-人MMP-2活性测定相关产品:
人类和小鼠MMP-9活性检测
人类MMP-7、MMP-8、MMP-14活性检测
可溶性胶原蛋白检测
总胶原蛋白检测
羟脯氨酸检测
艾美捷科技是QuickZyme Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/QuickZyme-Biosciences-new.shtml
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QuickZyme Biosciences/艾美捷总蛋白测定:非常适合水解样品中胶原蛋白的标准化
QuickZyme Biosciences-总蛋白测定试剂盒用于定量酸水解产物中的总蛋白质。它可用于新鲜或冷冻组织、福尔马林固定组织和石蜡包埋组织切片的酸水解产物。它非常适合水解样品中胶原蛋白的标准化。该试剂盒基于通过显色反应检测氨基酸。它有一个快速而简单的协议,不需要特殊的设备。
艾美捷QuickZyme Biosciences/艾美捷总蛋白测定试剂盒:
货号:QZBtotprot1
动态范围:0.04 - 3.00 毫克/毫升
灵敏度:0.007 毫克/毫升
样本体积:15 微升
格式:96孔板
预期用途:组织酸水解产物、调节培养基、细胞/细胞提取物、组织提取物、冷冻或石蜡组织切片,物种无关性。
试剂盒组分:
微量滴定板、蛋白质标准品、缓冲液、显色试剂、板封。不包括HCl和DMSO。
QuickZyme总蛋白测定试剂盒特色:
对新鲜、冷冻、固定和石蜡包埋组织的酸水解产物中蛋白质的定量测量
物种无关性
在570纳米处的比色读数
宽广的动态范围
不需要特殊设备
QuickZyme总蛋白测定试剂盒定量测量:
在0.047-3.00 mg/ml蛋白质范围内的典型蛋白质标准曲线,不减去背景。
QuickZyme Biosciences-总蛋白测定试剂盒相关产品:
羟脯氨酸检测
总胶原蛋白检测
可溶性胶原蛋白检测
人类和小鼠MMP-9活性检测
人类和小鼠MMP-2活性检测
人类MMP-8活性检测
艾美捷科技是QuickZyme Biosciences的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/QuickZyme-Biosciences-new.shtml