GPCR检测：将cADDis传感器添加到您的细胞中
测量环AMP（cAMP）信号传导动力学，筛选Gs活性的GPCR，以及使用活细胞、荧光、cADDis cAMP测定的更多功能。将cADDis传感器添加到您的细胞中，并在第二天在自动酶标仪或荧光成像系统上测量稳健的信号。增加的绿色荧光指示cAMP增加。该检测试剂在BacMam中进行遗传编码和包装，可在大多数细胞类型中进行有效转导-包括在HEK 293细胞中的均匀和接近100%的效率以及在许多原代或iPSC衍生细胞中的表达。
Montana Molecular-GPCR检测试剂盒包括cAMP传感器BacMam、500 mM丁酸钠水溶液以及阳性对照受体和激动剂（B2 AR BacMam和10 mM异丙肾上腺素HCl溶液）。30 mL和60 mL的尺寸也可用。其他Montana分子工具，包括BacMam包装的GPCR或红色荧光DAG和钙传感器，可以很容易地与该测定共表达。
GPCR检测套装（#U0200G）中包含的材料：
绿色增强型cADDis cAMP传感器BacMam
500 mM的丁酸钠，溶于H2O
带有核红标记的β2肾上腺素受体BacMam
10 mM的异丙肾上腺素，溶于10 mM的盐酸中
GPCR检测参考：
Borealis Arrestin Assay References：
H. Schiff, et al. β-arrestin-biased proteinase-activated receptor-2 antagonist C781 limits allergen-induced airway hyperresponsiveness and inflammation. British Journal of Pharmacology. June 2022.
cADDis cAMP Assay References：
B. Polacco, et al. Profiling the proximal proteome of the activated μ-opioid receptor. nature chemical biology. March 2024.
DAG Assay References：
X. Chen, et al. A PACAP-activated network for secretion requires coordination of Ca2+ influx and Ca2+ mobilization. bioRxiv. January 2024.
PIP2 Assay References：
L. Brueggemann, et al. Structural Determinants of Kv7.5 Potassium Channels that Confer Changes in Phosphatidylinositol 4,5-Biphosphate (PIP2) Affinity and Signaling Sensitivity in Smooth Muscle Cells. Molecular Pharmacology. March 2020.
GECO Calcium Assay References：
C. Amos, et al. Membrane lipids couple synaptotagmin to SNARE-mediated granule fusion in insulin-secreting cells. Molecular Biology of the Cell. December 2023.
GPCR检测相关产品：
#U0600R Red GECO Ca2+ Assay Kit
#D0400R Red PIP2 Assay Kit
#U0601R Mitochondrial-targeted Red GECO Assay Kit
#D0241G Green Membrane-Targeted fS15 cADDis cAMP
https://www.amyjet.com/products/MTA-U0200G-010.shtml
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VitroGel水凝胶基质，三维细胞培养，仅需20分钟
VitroGel 水凝胶基质是一种用于3D细胞培养研究的即用无异种（无动物来源）功能水凝胶。VitroGel®水凝胶基质是一种多功能配体和浓度的优化配方，可支持不同应用的多种细胞类型。“只需添加细胞”-水凝胶基质可直接与细胞悬浮液混合。
无需额外调整。VitroGel 水凝胶基质紧密模仿天然细胞外基质（ECM）环境，使细胞感觉更像在家里。水凝胶在室温下稳定，具有中性pH，透明、可渗透，并与不同的成像系统兼容。通过简单地与细胞培养基混合，溶液转化为水凝胶基质。使用我们的VitroGel®细胞回收溶液，可以很容易地收获在该系统中培养的细胞。这种用户友好的功能性水凝胶在简单性和多功能性之间取得了极好的平衡。
艾美捷VitroGel水凝胶基质 特性：
货号：VHM01
配方：无异种成分，功能性水凝胶
用途：三维和二维细胞培养
操作：室温下即用型
生物相容性：生物相容，适合动物研究
注射：可注射的水凝胶，适用于体内研究和实验室自动化
pH值：中性
储存：在2-8°C下储存。常温运输
规格：10毫升和2毫升
使用次数：(10毫升) 每孔50微升，可使用300次
(2毫升) 每孔50微升，可使用60次
配套产品：
细胞收获
VitroGel组织球回收溶液
10-15分钟细胞恢复
细胞活性
Cyto3D活死细胞检测试剂盒
快速、灵敏
VitroGel水凝胶基质-三维细胞培养：
1、无异种成分，具有生物功能的水凝胶
2、室温下即用型（20分钟协议）
3、支持广泛的细胞类型和应用
4、简便、高效、无需酶的细胞收获，仅需20分钟
VitroGel水凝胶基质数据说明：
图1。在VitroGel水凝胶基质和天然细胞外基质（ECM）水凝胶Matrigel中3D培养的骨髓细胞
成纤维细胞样小鼠骨髓基质细胞（OP9-GFP）在VitroGel水凝胶基质和Matrigel®（一种来自Engelbreth-Holm-Swarm小鼠肉瘤的基于ECM的天然水凝胶）中进行3D培养。将单个细胞均匀悬浮在每个水凝胶内，每个细胞在第1天形成拉伸的成纤维细胞样结构。上面的图像显示了在第7天在两种水凝胶中形成的清晰的3D细胞网络结构。与Matrigel相比，VitroGel水凝胶基质中的多种功能配体促进了更强的细胞-基质相互作用，这有助于在3D细胞培养过程中加速细胞增殖和细胞间交流。
部分文献参考：
Venuta, A., Nasso, R., Gisonna, A., Iuliano, R., Montesarchio, S., Acampora, V., Sepe, L., Avagliano, A., Arcone, R., Arcucci, A., & Ruocco, M. R. (2023). Celecoxib, a Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drug, Exerts a Toxic Effect on Human Melanoma Cells Grown as 2D and 3D Cell Cultures. Life, 13(4), 1067. https://doi.org/10.3390/life13041067
Tsai, Y.-C., Kung Hung Cheng, Shih Sheng Jiang, Hawse, J. R., Shun En Chuang, Su Liang Chen, Huang, T.-S., & Hui-Ju Ch’ang. (2023). Krüppel-like factor 10 modulates stem cell phenotypes of pancreatic adenocarcinoma by transcriptionally regulating notch receptors. Journal of Biomedical Science, 30(1). https://doi.org/10.1186/s12929-023-00937-z
Mavinga, M., Palmier, M., Rémy, M., Jeannière, C., Lenoir, S., Rey, S., Saint-Marc, M., Alonso, F., Génot, E., Thébaud, N., Chevret, E., Mournetas, V., Rousseau, B., Boiziau, C., & Boeuf, H. (2022). The Journey of SCAPs (Stem Cells from Apical Papilla), from Their Native Tissue to Grafting: Impact of Oxygen Concentration. Cells, 11(24), 4098. https://doi.org/10.3390/cells11244098
https://www.amyjet.com/products/VHM01.shtml
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VitroGel STEM，高效的细胞收获或传代培养
VitroGel STEM是一种无异种（无动物来源）水凝胶系统，旨在提高三维（3D）静态悬浮培养的性能，并扩大人类多能干细胞（hPSCs）的规模，以创建高通量系统来模拟各种组织和疾病状态。
该水凝胶系统可与优化的配方一起使用，该配方完全支持具有多能特性的高质量3D干细胞球体的快速扩增。从液氮中直接解冻或从2D基质包被的培养容器中传代的hPSC可以立即与用于静态悬浮培养的水凝胶溶液混合。此外，优化协议是时间敏感实验的理想选择，因为它不需要过多的介质交换，最终可以节省时间和材料。该水凝胶系统与大多数hPSC培养基和组织培养血管相容。由于独特的静态悬浮培养程序，消除了大规模生物反应器对微载体的需求，使细胞收获简单有效。使用该系统开发的3D干细胞球体可用于进一步的亚培养、图案化分化、类器官发育或重建2D培养形态。
艾美捷VitroGel STEM 特性：
货号：VHM02
配方：无异种成分，功能性水凝胶
用途：用于人类多能干细胞的三维静态悬浮培养
操作：室温下即用型
生物相容性：生物相容，适合动物研究
注射：可注射的水凝胶，适用于体内研究和实验室自动化
细胞收获：VitroGel组织球回收溶液
5-15分钟细胞恢复
pH值：中性
储存：在2-8°C下储存，常温运输
规格：10毫升和2毫升
使用次数：(10毫升) 适用于90-180毫升的悬浮培养
(2毫升) 适用于15-30毫升的悬浮培养
VitroGel STEM特性：
1、直接从液氮中建立干细胞球体（5分钟协议）
2、用于分化和组织球形成的高质量三维干细胞
3、易于扩大规模（从实验室规模到工业规模）
4、高效的细胞收获或传代培养
VitroGel STEM数据说明：
图1。从二维基质培养中获得hPSC的三维静态悬浮培养
24小时后，小的hPSC球体开始形成。从第1天到第6天，悬浮培养物中的细胞快速生长，从而产生健康、高质量的干细胞球体。第3天后，细胞数量呈指数级增长（图1B），球体大小稳步增加（图1C）。hPSC球体显示出浅坑或麻点的特征，表明hPSC标记物的表达以及健康和高质量干细胞球体的成功扩增。由此产生的球体为研究人员提供了大量健康的hPSC用于进一步的实验。
文献参考：
Powell K. Adding depth to cell culture. Science, 356(6333), 96–98.
https://www.amyjet.com/products/VHM02.shtml
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VitroGel MSC，生物相容，5-15分钟细胞恢复
VitroGel MSC是一种无异种（无动物来源）水凝胶系统，旨在支持间充质干细胞（MSC）的三维（3D）培养。该水凝胶系统可用于制备用于MSC放大的水凝胶细胞珠。MSC放大不需要微载波。
VitroGel MSC可与优化配方一起使用，完全支持MSC的快速扩张。从液氮中直接解冻或从2D培养容器中传代的细胞可以立即与水凝胶溶液混合，用于3D培养或水凝胶细胞珠的产生。该水凝胶系统与大多数MSC培养基和组织培养血管相容。通过使用VitroGel细胞回收溶液，3D培养后的细胞收获简单有效。
艾美捷VitroGel MSC 特性：
货号：VHM03
配方：无异种成分，功能性水凝胶
用途：三维细胞培养、二维水凝胶涂层、水凝胶-细胞珠形成
操作：室温下即用型
生物相容性：生物相容，适合动物研究
细胞收获：VitroGel组织球回收溶液
5-15分钟细胞恢复
pH值：中性
储存：在2-8°C下储存，常温运输
规格：10毫升和2毫升
使用次数：(10毫升) 每孔50微升，可使用300次
(2毫升) 每孔50微升，可使用60次
VitroGel MSC数据说明：
图:水凝胶珠中MSC的3D培养。
将MSC与VitroGel MSC混合，并作为用于水凝胶细胞珠形成的液滴添加到细胞培养基中（根据VHM03的水凝胶细胞珠方案）。水凝胶珠粒的大小可以通过液滴的体积来控制。MSC细胞可以在水凝胶珠中生长用于长期培养（>3周）。图像显示了从第0天到第11天水凝胶珠内部细胞的生长和扩增。放大图像显示从第0天到第11天，细胞从单细胞生长为细胞球体和基质结构。
文献参考：
Teryek, M., Jadhav, P., Bento, R., & Biju Parekkadan. (2023). High-Throughput Production of Microcapsules for Human Bone Marrow Derived Mesenchymal Stem Cell Biomanufacturing in a Vertical-Wheel Bioreactor. Biotechnology and Bioprocess Engineering, 28(4), 528–544.
Powell K. Adding depth to cell culture. Science, 356(6333), 96–98.
https://www.amyjet.com/products/VHM03.shtml
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VitroGel ORGANOID：无异种成分的水凝胶，用于组织球形成
VitroGel ORGANOID（1-4）是一种不含异种（不含动物来源）的水凝胶，支持患者来源的类器官或由多能干细胞（PSC）、共培养和PDX模型开发的类器官的生长。
VitroGel ORGANOID水凝胶可在室温下使用，具有中性pH、透明、可渗透性，并与不同的成像系统兼容。通过简单地与细胞培养基混合，溶液转化为水凝胶基质。VitroGel ORGANOID水凝胶适用于3D细胞培养和2D水凝胶涂层应用。
通过将在VitroGel STEM中培养的干细胞球体转移到用于类器官分化的VitroGelORGANOID水凝胶中，VitroGel-ORGANOID水凝胶可以与VitroGel-STEM（一种用于3D静态悬浮培养和放大人类多能干细胞的无异种水凝胶）协同工作。参见Xeno free 3D Organoid Workflow B.关键生长因子和分子可以直接与水凝胶基质混合，也可以在水凝胶顶部添加。在这个系统中培养的类有机物可以很容易地用我们的VitroGel细胞回收溶液收获。VitroGel ORGANOID水凝胶为个性化医疗的未来提供了一个明确的3D微环境。
艾美捷VitroGel ORGANOID 特性：
货号：VHM04
配方：无异种成分，功能性水凝胶
用途：组织球培养
操作：室温下即用型
生物相容性：生物相容，适合动物研究
注射：可注射的水凝胶，适用于体内研究和实验室自动化
细胞收获：VitroGel组织球回收溶液
5-15分钟细胞恢复
pH值：中性
储存：在2-8°C下储存，常温运输
规格：单瓶装：10 mL
发现套装：(2 mL) 每种ORGANOID-1, ORGANOID-2, ORGANOID-3, ORGANOID-4各一瓶
使用次数：(10 mL)：每顶25微升600次使用，或每孔50微升300次使用
(2 mL)：每顶25微升120次使用，或每孔50微升60次使用
VitroGel ORGANOID特性：
1、无异种成分的水凝胶，用于组织球形成
2、支持从病人样本、干细胞、组织、共培养和PDX资源中培养出广泛的组织球
3、室温下的操作协议，适合自动化
4、简便的20分钟无酶细胞收获
VitroGel ORGANOID数据说明：
图1。在VitroGel ORGANOID和Matrigel上进行小鼠肠道ORGANOD培养。
从液氮中回收的小类有机物分别用VitroGel和Matrigel直接接种。
VitroGel采用2D水凝胶涂层法。图像显示了从第0天到第14天小鼠肠道类器官的生长。
文献参考：
Hakuno, S., Michiels, E., Kuhlemaijer, E., Rooman, I., Hawinkels, L., & Slingerland, M. (2022). Multicellular Modelling of Difficult-to-Treat Gastrointestinal Cancers: Current Possibilities and Challenges. International Journal of Molecular Sciences, 23(6), 3147.
Cherne, M. D., Sidar, B., Sebrell, T. A., Sanchez, H. S., Heaton, K., Kassama, F. J., Roe, M. M., Gentry, A. B., Chang, C. B., Walk, S. T., Jutila, M., Wilking, J. N., & Bimczok, D. (2021).A Synthetic Hydrogel, VitroGel ORGANOID-3, Improves Immune Cell-Epithelial Interactions in a Tissue Chip Co-Culture Model of Human Gastric Organoids and Dendritic Cells. Frontiers in Pharmacology, (12).
Powell K. Adding depth to cell culture. Science, 356(6333), 96–98.
https://www.amyjet.com/products/index___VHM04__.shtml
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VitroGel HEK293：简单的细胞采集方案
VitroGel HEK293是一种独特的系统，可轻松支持HEK293细胞的快速3D生长。从液氮直接解冻或从2D培养容器传代的细胞可以立即与用于3D静态悬浮培养的水凝胶溶液混合。我们的标准3D细胞培养方案和3D静态悬浮培养方案都可以用于快速细胞扩增。高质量的3D球体增强了蛋白质表达和下游应用的细胞性能。在VitroGel HEK293中培养的HEK293细胞可以容易地放大用于大规模生物反应器或旋转烧瓶。通过使用VitroGel细胞回收溶液，3D培养后的细胞收获简单有效。
艾美捷VitroGel HEK293 特性：
货号：VHM05
配方：无Xeno，功能性水凝胶
使用：3D细胞培养、2D水凝胶涂层、水凝胶细胞珠形成
操作室温下即可使用
生物相容性：生物相容性，对动物研究是安全的
用于体内研究和实验室自动化的注射可注射水凝胶
细胞采集：玻璃体凝胶类有机物回收溶液
5-15分钟细胞回收
pH：中性
储存温度：为2-8°C。环境温度下的船舶
规格：10 mL和2 mL
使用次数：（10 mL）每孔50µL时使用300次
（2 mL）60次使用，每孔50µL
VitroGel HEK293特性：
1、简单的5分钟协议
2、高质量的3D球体
3、使用烧瓶和生物反应器轻松放大
4、简单的细胞采集方案（无酶，无胰蛋白酶）
VitroGel HEK293数据说明：
图1。HEK293细胞在VitroGel HEK293中的3D静态悬浮培养。
将细胞与VitroGel HEK293以（2:1凝胶/细胞v/v比）混合，然后以1:3的比例与细胞培养基混合（细胞凝胶混合物：培养基，1:3 v/v）。HEK293细胞在水凝胶中形成细胞球体。这些图像显示了从第0天到第7天的生长和扩展。放大的图像显示培养7天后的细胞球体。通过细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞增殖。该曲线显示了在14天的培养中细胞数量的增加。
文献参考：
Powell K. Adding depth to cell culture. Science, 356(6333), 96–98.
https://www.amyjet.com/products/VHM05.shtml
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Cardiolipin琼脂糖珠--脂质珠蛋白质下拉实验说明
脂质珠TM是为蛋白质下拉实验而设计的。可能的用途是在纯化蛋白溶液、细胞裂解物中测试脂质结合，或测试放射性标记的体外翻译产物的结合。
心磷脂珠由琼脂糖组成，每1ml珠含有10纳摩尔结合的心磷脂，足以进行多次蛋白质结合实验。
细胞裂解物/蛋白质的制备（过程可能因细胞类型/来源而异）：
这是使用细胞裂解物时的通用方法。应避免苛刻的裂解条件，因为它们可能会干扰脂质结构和结合。非离子清洁剂，如Igepal、NP40和Triton X-100，比离子清洁剂不那么苛刻，不变性，用于溶解和纯化膜蛋白复合物。
1、分离并离心细胞。
2、溶解颗粒。
3、涡旋和离心以制备澄清样品。
艾美捷Cardiolipin琼脂糖珠（BGT-OPU-101）裂解缓冲液：
盐（10-20 mM HEPES，pH 7.4，100-150 mM NaCl）
非离子洗涤剂*（如0.1–2%Igepal）
二价阳离子（0-10 mM EDTA和/或EGTA）
蛋白酶抑制剂（完整的迷你蛋白酶片、原钒酸钠、氟化钠）
脂质珠™检测说明：
1. 脂质包被珠有1 mL和0.1 mL两种规格，以50%的浆液形式在1X PBS缓冲液中提供。
2. 订购1 mL脂质珠，附带200 µL的对照珠。对照珠也可单独购买，建议用于分析。
3. 储存于2-8°C。产品对温度和光线敏感，请勿冷冻。
4. 以1,000 x g或更低速度离心珠。不要高速离心珠，因为这可能会压碎珠。
5. 每1 mL珠中总共有10纳摩尔的结合脂质。
6. 珠的直径范围在45至165微米之间。
7. 每个蛋白使用50-100 µL的50%浆液脂质包被珠和对照珠。
脂质珠™ - 蛋白拉下协议：
1. 充分混合珠（不要涡旋）。将50-100 µL的50%珠浆液转移到0.5-1.5 mL的管中。
2. 以1,000 x g或更低速度离心珠以沉淀。小心移除上清液，避免丢失珠。
3. 用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤两次。
4. 小心移除洗涤上清液，并将珠在含有您的蛋白的结合缓冲液中重新悬浮。
a. 对于纯化的蛋白，使用1-10微克的蛋白，稀释在足够的结合缓冲液中形成50%脂质珠浆液。
b. 对于细胞裂解物、提取物、亚细胞分数：使用大约1毫克的总蛋白对1 mL结合缓冲液。将整个1 mL准备好的样品加入您洗涤过的珠中。
5. 孵育蛋白-珠溶液1-3小时。孵育可以在室温或4°C下进行，取决于您蛋白的稳定性。需要连续运动以保持珠悬浮。
6. 沉淀珠并小心移除上清液。如果需要，上清液可以用来监测未结合的蛋白。
7. 用洗涤缓冲液的10倍过量洗涤珠。轻轻混合，孵育1-2分钟。重复洗涤步骤五次。如果您选择在结合缓冲液中使用牛血清白蛋白（BSA），请确保在进入下一步之前将其彻底洗出。
8. 在最后一次洗涤后，通过向珠中加入等体积的2X Laemmli样品缓冲液（或类似物）并加热至70°C 10分钟来洗脱结合的蛋白。
9. 加热后，沉淀珠并移除上清液。将上清液储存在4°C下，直到分析。丢弃珠。
10. 蛋白可以通过SDS-PAGE分离，并通过凝胶的Coomassie蓝染色、蛋白转移和免疫印迹来检测感兴趣的蛋白，或进行自显影。
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Ceramide 1-Phosphate (C1P) 琼脂糖珠的生物功能研究
脂质包被珠被设计用于蛋白质下拉实验。用于测试纯化蛋白质、细胞裂解物中蛋白质的脂质结合，或放射性标记的体外翻译产物的结合。
神经酰胺1-磷酸（C1P）珠粒由琼脂糖组成，每1ml珠粒含有10纳摩尔结合的神经酰胺1-磷酸盐（C1P），足以进行多次蛋白质结合实验。每1mL顺序的神经酰胺1-磷酸（C1P）珠包括少量的对照珠。也可购买更大数量的控制珠。
艾美捷Ceramide 1-Phosphate（C1P）是一种生物活性的鞘脂类分子，近年来在细胞信号传导、免疫调节和细胞死亡等生物过程中显示出其重要性。C1P的生物功能研究对于揭示细胞内信号网络具有重要意义，而C1P琼脂糖珠作为一种新型研究工具，为科学家提供了探索C1P生物学特性的新途径。
脂质珠™检测说明：
1. 脂质包被珠有1 mL和0.1 mL两种规格，以50%的浆液形式在1X PBS缓冲液中提供。
2. 订购1 mL脂质珠，附带200 µL的对照珠。对照珠也可单独购买，建议用于分析。
3. 储存于2-8°C。产品对温度和光线敏感，请勿冷冻。
4. 以1,000 x g或更低速度离心珠。不要高速离心珠，因为这可能会压碎珠。
5. 每1 mL珠中总共有10纳摩尔的结合脂质。
6. 珠的直径范围在45至165微米之间。
7. 每个蛋白使用50-100 µL的50%浆液脂质包被珠和对照珠。
Ceramide 1-Phosphate (C1P) 琼脂糖珠的应用：
细胞信号传导研究：C1P琼脂糖珠可用于模拟细胞内C1P的信号传导过程，研究其对细胞行为的影响。
药物筛选：作为C1P模拟物，C1P琼脂糖珠可用于高通量筛选，寻找能够调节C1P信号通路的潜在药物。
免疫学研究：C1P在免疫细胞的激活和功能中起作用，C1P琼脂糖珠可用于研究免疫细胞对C1P的反应。
细胞死亡机制探索：C1P与细胞凋亡和坏死等死亡形式有关，C1P琼脂糖珠有助于研究其在细胞死亡中的作用机制。
Ceramide 1-Phosphate (C1P) 琼脂糖珠具有以下技术优势：
稳定性：C1P的化学性质在琼脂糖珠中得到稳定，减少了实验过程中的降解。
可控性：通过调整C1P的结合量，可以精确控制实验条件。
易于操作：与液体形式的C1P相比，珠形式更易于在实验中操作和回收。
文献参考：
Gálvez-Santisteban, M., Rodriguez-Fraticelli, A. and Martin-Belmonte, F. (2014). Phosphoinositides Coated Beads Binding Assay. Bio-protocol 4(3): e1039.