Biogradetech人孕烯醇酮ELISA Kit的化学性质说明
以下酶免疫测定测试的原理遵循典型的竞争性结合场景。竞争发生在未标记的抗原（存在于标准品、对照品和样品中）和酶标记的抗原（缀合物）用于微孔板上有限数量的抗体结合位点。这个洗涤和倾析程序去除未结合的材料。在洗涤步骤之后，将酶底物补充。通过加入终止溶液终止酶促反应。测量吸光度我们的微量滴定板阅读器。所形成的颜色的强度与样品中的孕烯醇酮。标准一组标准用于绘制标准曲线样品和对照中的孕烯醇酮可以直接读取。
艾美捷人孕烯醇酮ELISA Kit（BGT-KET-150）：用于通过酶免疫测定法直接定量测定人血清中的孕烯醇酮。
局限性：
1. 试剂盒内的所有试剂均已校准，仅用于直接测定人血清中的孕烯醇。试剂盒未校准用于测定唾液、血浆或其他人源或动物源样本中的孕烯醇。
2. 不要使用明显溶血、明显脂血、黄疸或储存不当的血清。
3. 任何含有叠氮化物或硫柳汞的样本或对照血清与本试剂盒不兼容，因为它们可能导致虚假结果。
4. 只有标准A可用于稀释任何高血清样本。使用任何其他试剂可能导致虚假结果。
安全警告和注意事项：
潜在的生物危害材料：
用于制备标准品和对照品的人血清已经过测试，发现对乙型肝炎表面抗原无反应，并且已经测试了是否存在对丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)的抗体，结果为阴性。然而，没有任何测试方法可以提供完全保证HIV、HCV和乙型肝炎病毒或任何传染性因子的缺失。试剂应被视为潜在的生物危害，并以与任何血液样本相同的预防措施进行处理。
化学危害：
避免与含有TMB（四甲基联苯胺）、过氧化氢和硫酸的试剂接触。如果接触到这些试剂中的任何一种，请用大量水冲洗。TMB是可疑致癌物。
样本收集与储存：
每次重复测定需要大约0.2毫升的血清。将4-5毫升血液收集到适当标记的试管中并让其凝固。离心后小心移除血清层。如果分析将在稍后进行，可将其储存在4°C下最多24小时，或储存在-10°C或更低的温度下。将所有人源样本视为可能的生物危害材料，并在处理时采取适当的预防措施。
样本预处理：
该测定是直接系统；不需要样本预处理。
所需但未提供的试剂和设备：
1. 用于分配50、100、150和300微升的精密移液管
2. 一次性移液管尖
3. 蒸馏水或去离子水
4. 板式摇动器
5. 带有450纳米滤光片和3.0或更高上OD限的微孔板阅读器。
计算方法：
计算每个标准品重复样本的平均光密度。
在半对数坐标纸上绘制标准曲线，平均光密度在Y轴上，标准品浓度在X轴上。如果使用免疫分析软件，建议使用4参数或5参数曲线。
计算每个未知样本重复测定的平均光密度。
直接从标准曲线上读取未知样本的数值。
如果样本测定结果超过25.6纳克/毫升，则应使用标准A进行稀释，稀释度不超过1:8。所得结果应乘以稀释倍数。
典型标准曲线：
这仅是一个样本曲线，不要用来计算结果。
灵敏度：下限检测限是通过标准曲线计算得出的，计算方法是确定标准A的平均OD（光密度，基于10次重复分析）的浓度减去2倍SD（标准差）。因此，孕烯醇ELISA试剂盒的灵敏度为0.05纳克/毫升。
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酮体比色测定试剂盒，快速测量β-HB水平变化
酮体，作为脂肪酸代谢的产物，在多种生理和病理状态下发挥着重要作用。酮体水平的异常升高通常与糖尿病、饥饿、低碳水化合物饮食以及某些遗传性代谢疾病相关。因此，准确测定酮体水平对于诊断和监测相关疾病至关重要。酮体比色测定试剂盒作为一种实验室工具，提供了一种快速、简便、准确的酮体检测方法。
Biogradetech酮体比色测定试剂盒的原理：
酮体比色测定试剂盒通常基于酶联免疫吸附测定（ELISA）或其他比色法原理，通过特定的酶作用将酮体转化为可检测的颜色变化。试剂盒内的酶特异性地催化酮体与试剂中的其他成分反应，产生颜色变化，其强度与样本中酮体的浓度成正比。通过光度计测定吸光度，可以定量分析样本中的酮体含量。
艾美捷酮体比色测定试剂盒（BGT-KAT-200）提供了一种简单、可重复和灵敏的工具，用于测量血浆、血清、尿液、细胞裂解物或组织匀浆中的β-HB水平。β-HB的测定方法基于3-羟基丁酸脱氢酶将D-3-羟基丁酸氧化为乙酰乙酸盐。16伴随着这种氧化，辅因子NAD+被还原为NADH。在黄递酶的存在下，NADH与比色检测器WST-1反应，产生吸收Z大值为445-455nm的甲赞染料。染料的吸光度与β-HB浓度成正比。
试剂盒的组成：
一个完整的酮体比色测定试剂盒包括：
酶标抗体或酶标记的酮体结合蛋白
底物溶液，用于与酮体反应产生颜色变化
标准品，用于建立标准曲线
校准缓冲液和其他必要的试剂
详细的操作说明书
样本准备：
血浆和血清中的β-HB浓度可以在相当宽的范围内变化，正常水平测量为0.02-1.5 mM，在糖尿病患者中可增加至高达3-5 mM。在糖尿病酮症酸中毒期间，尿液中的β-HB浓度可能高达30-50 mM。
血浆：
1. 使用肝素、EDTA或柠檬酸盐等抗凝剂采集血液。
2. 将血液在4°C下以700-1,000 x g的速度离心10分钟。用移液管取上层黄色血浆层，不要扰动白色纤维层。将血浆存放在冰上。如果不在同一天进行检测，则在-80°C下冷冻。血浆样本在-80°C下储存时可稳定一个月。
3. 在检测前应通过10 kDa MWCO离心过滤器（遵循制造商的协议）对血浆进行过滤。
血清：
1. 无需使用抗凝剂采集血液。
2. 让血液在25°C下凝固30分钟。
3. 将血液在4°C下以2,000 x g的速度离心15分钟。用移液管取上层黄色血清层，不要扰动白色纤维层。将血清存放在冰上。如果不在同一天进行检测，则在-80°C下冷冻。血清样本在-80°C下储存时可稳定一个月。
4. 在检测前应通过10 kDa MWCO离心过滤器（遵循制造商的协议）对血清进行过滤。
尿液：
尿液的收集不需要任何特殊处理。如果不在同一天进行检测，则在-80°C下冷冻。
建议使用Cayman的肌酸酐ELISA试剂盒（货号502330）、肌酸酐（尿液）比色法检测试剂盒（货号500701）或类似的检测方法，将从尿液样本中获得的值标准化为肌酸酐水平。
β-羟丁酸荧光测定试剂盒与β-羟丁酸比色试剂盒的相关性测量：在6个血浆样本中，使用β-羟丁酸荧光测定试剂盒和β-羟丁酸比色试剂盒测量了内源性和添加的β-HB，以进行比较。
酮体比色测定试剂盒应用领域：
酮体比色测定试剂盒广泛应用于：
医学研究：研究酮体在疾病发展中的作用。
临床诊断：辅助诊断糖尿病酮症酸中毒、酮症以及其他代谢性疾病。
健康管理：监测低碳水化合物饮食或生酮饮食的效果。
药物监测：评估影响酮体代谢的药物疗效。
酮体比色测定试剂盒部分文献参考：
1. Taggart, A.K.P., Kero, J., Gan, X., et al. J. Biol. Chem. 280(29), 26649-26652(2005).
2. McMurray, C.H., Blanchflower, W.J., and Rice, D.A. Clin. Chem. 30(3),421-425 (1984).
3. Hansen, J.L. and Freier, E.F. Clin. Chem. 24(3), 475-479 (1978).
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DPP4抑制剂筛选试剂盒的性能特征介绍和示例
Biogradetech-DPP4抑制剂筛选试剂盒（BGT-KAT-100）提供了一种方便的基于荧光的方法来筛选DPP（Ⅳ）抑制剂。该测定使用荧光底物Gly-Pro氨基甲基香豆素（AMC）来测量DPP（IV）的活性。DPP对肽键的切割释放出游离的AMC基团，产生的荧光可以使用350-360nm的激发波长和450-465nm的发射波长进行分析。
艾美捷DPP4抑制剂筛选试剂盒特点：
1、筛选DPP (IV)抑制剂
2、可对46个样本进行双重测定
3、包含阳性对照抑制剂
4、基于板的荧光测量（激发波长530-540纳米，发射波长585-595纳米）
DPP4抑制剂筛选试剂盒性能特征：
Z'因子是一个用来描述检测方法稳健性的术语，它是通过使用下面的公式计算得出的。
Z´ = 1 -（3σc+ + 3σc-）/丨µc+ - µc-丨
Where σ: Standard deviation
µ: Mean
c+: Posive control
c-: Negative control
Z'因子的理论上限为1.0。一个稳健的检测方法其Z'因子应大于0.5。Cayman的DPP (IV)抑制剂筛选试剂盒的Z'因子被确定为0.96。
DPP4抑制剂筛选试剂盒示例数据：
DPP (IV)抑制剂筛选试剂盒的典型Z'数据。数据显示了按照试剂盒手册中描述准备的阳性和阴性对照孔的数据。此次实验计算出的Z'因子为0.96。红色线条对应于每个对照值的平均值偏差的三个标准差。
基本信息：
1、所有孔的最终检测体积为100微升。
2、在检测中使用稀释后的检测缓冲液。
3、除了酶之外，所有试剂在开始检测前必须平衡至室温。
4、没有必要一次使用板上的所有孔。
5、建议以三重复进行样本检测，但是否这样做取决于用户的判断。
6、检测在37°C下进行。
7、如果不知道适当的抑制剂浓度，可能需要在几个稀释度下进行检测。可以进行每个抑制剂的稀释系列，以确定IC50值。
8、三十个抑制剂样本可以进行三重复检测，或者四十五个样本进行双重复检测。
9、使用激发波长为350-360纳米和发射波长为450-465纳米的荧光监测。
执行检测：
1.初始活性孔 - 在三个孔中分别加入30微升稀释的检测缓冲液、10微升稀释的DPP (IV)和10微升溶剂（用于溶解抑制剂的相同溶剂）。
2.背景孔 - 在三个孔中分别加入40微升稀释的检测缓冲液和10微升溶剂（用于溶解抑制剂的相同溶剂）。
3.西他列汀阳性对照抑制剂孔 - 在三个孔中分别加入30微升稀释的检测缓冲液、10微升稀释的DPP和10微升西他列汀阳性对照抑制剂。
4.抑制剂孔 - 在三个孔中分别加入30微升稀释的检测缓冲液、10微升稀释的DPP (IV)和10微升抑制剂。注意：抑制剂可以溶解在检测缓冲液或二甲亚砜中，并且应以10微升的最终体积加入到检测中。乙醇和甲醇会大幅降低酶活性，因此不推荐用于溶解抑制剂。如果完全不知道需要抑制DPP (IV)的适当浓度，我们建议检测该化合物的几个浓度。
5.启动反应 - 向所有使用的孔中各加入50微升稀释的底物溶液。
6.盖板孵育 - 用板盖盖住板子，并在37°C下孵育30分钟。
7. 读取荧光 - 去掉板盖，并使用激发波长为350-360纳米和发射波长为450-465纳米的荧光读取。可能需要调整仪器的增益设置，以便测量所有样本。
*为了确定反应速率和表观IC50值，我们建议以动力学方式读取样本，在30分钟检测读取时间内收集尽可能多的时间点。基于动力学曲线的线性部分确定初始速率。可以通过用荧光代替，按照以下所示进行计算。
% Inhibition =【{Inial Acvity - Inhibitor}/ Inial Acvity 】x 100
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多功能Cibacron Blue琼脂糖珠，白蛋白和干扰素纯化方案
Immobilized Cibacron Blue 3G is prepared by covalent linking of Cibacron Blue 3G dye with 6% cross-linked agarose. The resin is offered based on property of textile dyes to bind proteins, especially those with affinities to various nucleotides. Furthermore, affinity of reactive dyes to proteins may be due to substrate/cofactor similarities as well as hydrophobic and ion exchange properties.
Immobilized Cibacron Blue 3G binds several proteins such as albumin, interferon, lipoproteins and blood coagulation factors. It also binds several enzymes such as kinases, dehydrogenase and most enzymes requiring adenyl-containing cofactors such as NAD+
Immobilized Cibacron Blue 3G is widely used in purification of albumins and interferons. Also helps in removing albumins from protein fraction.
Features
Cibacron Blue 3G dye coupled to 6% cross-linked Agarose
Extent of labeling is 2-6 µmol dye per ml resin
Shipped as hydrated resin in 20% ethanol.
Available in 50 ml size.
Application(s)
Immobilized Cibacron Blue 3G is widely used in purification of albumins and interferons. Also helps in removing albumins from protein fraction.
Cibacron Blue是一种合成的偶氮染料，属于酸性染料的一种。这种染料以其鲜艳的蓝色调而闻名，能够染制出从浅蓝到深蓝的多种色彩。它的化学稳定性和色彩牢度使其成为纺织工业中的一种理想选择。Cibacron Blue可与多种蛋白质结合，如白蛋白、脂蛋白、干扰素、凝血因子；也可与多种酶结合，如激酶、脱氢酶和大多数需要含腺苷辅因子的酶(如NAD+)。
琼脂糖珠（Agarose Beads）作为一种多功能的基质，广泛应用于核酸的纯化、固相支持和生物分子的分析中。琼脂糖珠具有多孔性、高机械强度和良好的化学稳定性。它们能够在不同的缓冲体系中保持稳定，不受pH和离子强度的影响。这些特性使得琼脂糖珠成为生物实验中理想的固体支持材料。
Biogradetech-Cibacron Blue琼脂糖珠（BGT-OPU-162）广泛应用于白蛋白和干扰素的纯化。它还有助于从蛋白质组分中去除白蛋白。
艾美捷Biogradetech-Cibacron Blue琼脂糖珠（BGT-OPU-162）特征：
1、Cibacron Blue琼脂糖珠染料与6%交联琼脂糖结合
2、标记程度为每毫升树脂2-6微摩尔染料
3、作为含20%乙醇的水合树脂发货。
4、提供50毫升规格。
Cibacron Blue琼脂糖珠应用程序：
固定化Cibacron蓝3G广泛用于蛋白和干扰素的纯化。也有助于去除蛋白质部分中的白蛋白。
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固定化D-丙氨酸树脂柱，纯化氨基酸结合蛋白利器
G-Biosciences offers pre-packed 5 ml Immobilized Amino Acids resin in a column format. Immobilized Amino Acids are prepared by coupling amino acid to preactivated 6% cross-linked agarose. The covalent coupling to agarose (resin) is achieved by cross-linking the amino or sulfhydryl group of the amino acid to the preactivated resin.
Features:
Amino acid coupled to 6% cross-linked Agarose
Coupling is covalent through linkage of amino group of the amino acid to the pre-activated agarose.
Shipped as hydrated resin in 20% ethanol
Available in 5 ml sizes in a prepacked column
Shelf life: 1-year
Ligand load: 15-30 µM/ml
Application(s):
Immobilized Amino Acids are used for purification of amino acid binding proteins.
Biogradetech提供预先包装的5毫升柱状固定化氨基酸树脂。固定化氨基酸是通过将氨基酸偶联到预活化的6%交联琼脂糖上来制备的。与琼脂糖（树脂）的共价偶联是通过将氨基酸的氨基或巯基交联到预活化树脂上来实现的。
艾美捷Biogradetech固定化D-丙氨酸树脂柱（BGT-OPU-160）特征：
1、6%交联琼脂与氨基酸偶联
2、通过氨基酸的氨基与预活化的琼脂糖连接，偶联是共价的。
3、作为20%乙醇中的水合树脂运输
4、可在预包装柱中提供5毫升尺寸
5、保质期：1年
6、配体负载：15-30µM/ml
应用程序：固定化氨基酸用于纯化氨基酸结合蛋白。
固定化D-丙氨酸树脂柱文献参考：
Mossmann et al., (2023) Arginine reprograms metabolism in liver cancer via RBM39, Cell 186, 5068-5083
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固定化多聚L-赖氨酸树脂柱--高效、特异的分离介质
多聚L-赖氨酸树脂柱（Poly-L-lysine Resin Column）作为一种高效、特异的分离介质，被广泛用于生物分子的分离、纯化和分析。它利用多聚L-赖氨酸的正电荷特性，通过静电作用与带负电的生物分子相互作用，实现选择性结合和分离。
使用多聚L-赖氨酸树脂柱进行生物分子分离通常包括以下步骤：
样品准备：根据目标分子的特性，准备适当的样品溶液。
装载树脂柱：将多聚L-赖氨酸树脂填充到柱中，并平衡至所需的缓冲体系。
样品加载：将样品溶液缓慢通过树脂柱，使目标分子与树脂发生吸附。
洗涤步骤：使用适当的缓冲液洗涤柱子，去除未吸附的杂质。
洗脱：改变缓冲液的离子强度或pH值，洗脱结合在树脂上的目标分子。
固定化多聚L-赖氨酸树脂柱的制备采用了先进的固定化技术，将多聚L-赖氨酸共价键合到适当的树脂基质上。这种固定化方式不仅保持了L-赖氨酸的生物学活性，同时也增强了其在多变实验条件下的稳定性和耐用性。
艾美捷Biogradetech固定化D-丙氨酸树脂柱（BGT-OPU-161）特征：
1、6%交联琼脂与氨基酸偶联
2、通过氨基酸的氨基与预活化的琼脂糖连接，偶联是共价的。
3、作为20%乙醇中的水合树脂运输
4、可在预包装柱中提供5毫升尺寸
5、保质期：1年
6、配体负载：15-30µM/ml
固定化多聚L-赖氨酸树脂柱应用程序：固定化氨基酸用于纯化氨基酸结合蛋白。
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PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成定制服务
PNA Bio提供定制的CRISPR/Cas9（RGEN）合成服务，无论是否经过验证。
艾美捷PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成定制服务：
IVT sgRNA合成服务（aRGEN）
包括设计、脱靶搜索和合成
提供50微克冻干形式的sgRNA
注射/转染就绪
在琼脂糖凝胶中确认质量和数量
时间线：2周
sgRNA载体合成服务（dRGEN）
包括设计、脱靶搜索和合成
提供sgRNA和Cas9的表达质粒
时间线：2周
提供与GFP/HygroR和RFP/PuroR卡盒共表达的Cas9载体，这些载体在CMV或EF1a启动子下用于筛选
sgRNA验证服务
客户提供基因名称、物种和项目目标（KO、KI等）
包括设计、脱靶搜索以及4~8个gRNA载体的合成
将CRISPR/Cas9转染到细胞中，并执行错配敏感的核酸酶检测，以找到Z有效的核酸酶
sgRNA以表达质粒形式（dRGEN）或RNA形式（aRGEN）提供
也提供PCR引物、PCR条件和用于KO筛选的错配敏感的核酸酶检测
时间线：3~6周
Cas9载体
CV01 & CV11: Cas9（CMV或EF1a启动子）
CV02 & CV12: Cas9-HygR-GFP（CMV或EF1a启动子）
CV03 & CV13: Cas9-RFP-PuroR（CMV或EF1a启动子）
导向RNA（gRNA）设计
通常，寻找没有1个碱基和2个碱基错配的gRNA序列，并包含45~70% GC含量。如果无法避免脱靶，S选靠近PAM的错配，而不是位于gRNA 5'端的错配。请注意，非典型PAM（-NAG，-NGA）也可以被切割。
PNA Bio已经开发了PNA Bio的gRNA工具，它可以输出脱靶序列、GC含量和其他特征。您也可以使用公开可用的工具进行各种选项的搜索。
Cas-Designer
ChopChop
E-CRISP
Cas-Offinder（查看脱靶列表）
eGFP对照sgRNA
已验证在体外和体内切割eGFP
注射就绪形式，冻干粉末
也提供eGFP质粒和Cas9蛋白作为体外切割检测的阳性对照试剂
可用尺寸：20微克或100微克（20微克x 5管）
目录编号：AR04
PNA Bio-CRISPR/Cas9（RGEN）合成定制服务文献：
Laminar flow downregulates Notch activity to promote lymphatic sprouting. Choi D et al. (2017) J. Clin Investigation. In press.
Generation and characterization of tamoxifen-inducible Pax9-CreER Knock-In Mice using CrispR/Cas9. Jifan F et al. (2016) Genesis 54(9):490-496.
Efficient delivery of nuclease proteins for genome editing in human stem cells and primary cells. Liu J et al. (2015) Nat Protoc. 10:1842-1859.
Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Kim S et al. (2013) Gen Res. 24:1012-1019.
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection. Liang X et al (2015) J Biotech. 208: 44-53.
艾美捷科技是PNA Bio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/PNA-Bio.shtml
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PNA Bio-KO/KI细胞丨细胞系生成（敲除和敲除）方案
PNA Bio及时提供经济的细胞系生成（敲除和敲除）。工程细胞系生成过程如下所示：
设计并合成4到8个gRNA载体
通过错配敏感的核酸酶检测选择最有效的工程核酸酶
合成报告载体，用于富集基因编辑事件的细胞
优化转染协议
设计基因敲入项目的供体载体
通过MACS（磁珠分选）、FACS（流式细胞分选）或海波霉素抗性进行细胞池的选择（选项：在选定的细胞池中验证效率）
单细胞克隆
使用T7E1检测和/或F-PCR对克隆进行筛选
通过TA克隆和测序确认纯合子基因敲除
基因敲除细胞系服务：
提供至少两个独立的基因敲除（KO）克隆，并确认无支原体污染
时间线：4到7个月
基因敲入细胞系服务：
提供至少两个独立的克隆，并确认无支原体污染
包括供体载体设计和合成
时间线：5到7个月
艾美捷PNA Bio 通过FACS确认基因敲除（示例）：
PNA Bio-KO/KI细胞相关文献：
Enhanced tumor-targeting selectivity by modulating bispecific antibody binding affinity and format valence. Mazor Y et al (2017) Sci Rep 7:40098.
Modeling human epilepsy by TALEN targeting of mouse sodium channel Scn8a. Jones JM & Meisler MH (2014) Genesis 52(2):141-148.
Small molecules enhance CRISPR genome editing in pluripotent stem cells. Yu C et al (2015) Cell Rep 16(2):142-147.
Inhibition of non-homologous end joining increases the efficiency of CRISPR/Cas9-mediated precise [TM: inserted] genome editing. Maruyama T et al (2015) Nat Biotech 33(5):538-542.
ssODN-mediated knock-in with CRISPR-Cas for large genomic regions in zygotes. Yoshimi K et al (2016) Nat Comm 7:10431.
Efficient CRISPR-Cas9-mediated generation of knockin human pluripotent stem cells lacking undesired mutations at the targeted locus. Merkle FT et al (2015) Cell Rep. 11(6):875-883.
艾美捷科技是PNA Bio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/brand/PNA-Bio.shtml