兔神经胶质成熟因子β(GMFβ) ELISA 试剂盒 96T/48T
ELISA 试剂盒检测原理：
笃玛生物（DUMABIO）生产的ELISA试剂盒采用抗体夹心法:将抗某蛋白抗体包被于酶标板上，标本和标准品中的某蛋白与抗体结合，加入化的抗某蛋白抗体，再加入SABC复合物与抗体结合，形成免疫复合物，然后加入TMB显色底物，显色剂显蓝色，zui候加终止液变黄色，游离的成分被洗去。在450 nm处测OD值，某蛋白浓度与OD值之间呈正比，可通过绘制标准曲线计算出标本中某蛋白的浓度。
96T/48T 人白介素1β前体(pro-IL1β) ELISA 试剂盒说明书
ELISA 试剂盒试剂盒组分: （保存温度2-8℃）
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 |
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密封袋 | 1个 | 1个 |
|
封板膜 | 12孔×4条 | 2片（96） | 2-8℃保存 |
微孔酶标板 | 1×48 | 12孔×8条 | 2-8℃保存 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 2-8℃保存 |
标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
样品稀释液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
ELISA 试剂盒标本收集与试剂准备:
1. 血清、血浆样本收集应使用一次性的无热原，无内毒素试管（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝均可），血清、血浆避免使用溶血，高血脂标本，标本悬浮物应离心去除，使标本清澈透明。待测样本应尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-80℃）保存，避免反复冻融。
2. 洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）
3. 标准品配制：取7个1.5ml离心管，分别标注1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64，blank。从第壹至七管中分别加入标准品/样品稀释液200ul。在第壹管中加入标准品溶液200ul，置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第六管中吸出200ul弃去，第七管为空白对照。
4.
5. 化抗体工作液配置:使用前20分钟，用化抗体稀释液将100×化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。
6. TMB显色液的配置：使用分钟，将TMB显色液A液和B液1：1混合，避光放置备用。
7. 如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品zui糕值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。
ELISA 试剂盒检测程序:
1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。
2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。
3. 空白孔加入100ul化抗体稀释液，其余孔各加入1×的化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。
6. 洗板：同上。
96T/48T 人白介素1β前体(pro-IL1β) ELISA 试剂盒说明书
7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。
8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
兔神经胶质成熟因子β(GMFβ) ELISA 试剂盒 96T/48T
ELISA 试剂盒结果判断与计算：
1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。
2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。
ELISA 试剂盒试剂盒性能:
1、 检测范围:15.6-1000pg/mL
2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体，不与其它细胞因子有交叉反应。
3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。
ELISA 试剂盒注意事项
1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能 有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶溶解后再配制洗涤液。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2 个月内用完。
4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。
5. 只用于科研，不能用于临床诊断！
试剂盒局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度：小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
兔神经胶质成熟因子β(GMFβ) ELISA 试剂盒 96T/48T
LISA试剂盒技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原) | 间接法(检测未知抗体) |
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 | 1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照) 3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,后一遍用DDW洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 |
技术提示：
1、混合蛋白溶液时，避免起泡。
2、加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，
公共组分应该悬臂加样，避免交叉污染。
3、合适的温育时间，和充分的洗涤步骤，是实验结果准确性的必要条件。
4、底物溶液为无色液体，保存过程中变为蓝色，代表底物溶液已经失效，不得使用。
5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物，会瞬间变为黄色。
6、实验中，用剩的板条，应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
7、所有液体组分，使用前充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。
8、检测必须符合实验室管理规范的规定，严格防止交叉污染，所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。