永生化细胞研究丨附一些常见的永生化方法
永生化细胞是指细胞在体外培养的过程中，由于自身基因变化或者是外界各种刺激条件，避免的正常传代细胞衰老死亡的过程，以至于可以长期传代培养、无限分裂增殖。
永生化细胞原理图：
永生化细胞的意义：
1、能获得大量的细胞资源，改善细胞传代少、增殖慢的困境，使细胞可以无限传代，并且永生化的细胞生长更强劲，节省了实验周期。
2、可以帮助研究者熟悉掌握细胞增殖与衰老死亡的的生理过程。
3、是体外研究肿瘤细胞各个阶段的的良好模型，为癌症治疗、抑制癌症细胞增殖等提供新的研究方向。
4、在遗传上属于同一种群，能够建立相同遗传性状的细胞库，有助于实验结果的稳定性。
永生化细胞的方法：
细胞永生化一般有两种分子机制：外源病毒蛋白抑制或者自身突变导致原癌基因活化或抑癌基因失活，使细胞绕过正常细胞的周期检查点，细胞衰老死亡途径受阻，达到无限增殖的目的；另一种是激活端粒酶使端粒长度延长，可以持续增殖；具有致瘤性的病毒如SV40病毒、EB病毒、人乳头状瘤病毒HPV等。
永生化细胞有不同的方法，不同的方法适用于不同的组织细胞。如HPV可介导人的上皮细胞如口腔上皮细胞、表皮细胞、角化上皮等的上皮细胞永生化；猿猴病毒的SV40 大T抗原（TAg）用于黏附细胞、成纤维细胞、内皮细胞等、EBV用于淋巴母细胞样细胞；端粒酶TERT则用于间充质干细胞和其他一些细胞。
艾美捷总结了一些常见的永生化方法：
试剂 机制 ABM可提供的形式
SV40T Antigen Suppresion of p53 and Rb genes Lentivirus, Adenovirus, Retrovirus
p53 siRNA Knockdown of p53 tumor suppression gene siRNA Lentivirus
Rb siRNA Knockdown of Rb tumor suppression gene siRNA Lentivirus
Ras Suppression of Rb Lentivirus
C-myc T58A Suppression of p53 Lentivirus
Bmi1 Inhibition of p16/Rb pathway Lentivirus
CDK4 Suppression of p16/Rb pathway Lentivirus
HPV 16 E6/E7 Inhibition of p16/Rb pathway Lentivirus
EBV Viral oncogene -
hTERT Elongation of telomeres Lentivirus, Adenovirus, Retrovirus
艾美捷在永生化细胞系方面有着丰富的经验，已成功将不同物种（如人、大鼠、小鼠以及猪）的不同细胞类型，如内皮细胞，上皮细胞，成纤维细胞，神经元细胞，以及难度较大的悬浮细胞，B细胞、T细胞，巨噬细胞等成功永生化。
无论何时，细胞永生化在研究生物生长发育机制，调控生命活动，疾病诊断治疗等领域都有很大的研究意义。艾美捷拥有您所需功能的任何物种和任何组织的永生细胞系，可以在短周期内完成永生化细胞系的构建。
https://www.amyjet.com/brand/immortalized-cells.shtml
————————————————————
附文献丨永生化小鼠雪旺细胞解决方案
雪旺细胞（Schwann cell）也称施万细胞，是一种周围神经的胶质细胞，为轴突提供支持，并且形成髓鞘。其功能极其活跃，可分泌多种活性物质（如神经营养因子、细胞外基质及粘附因子等），其分泌的物质对维持神经纤维的存活、生长及再生具有重要意义。
永生小鼠雪旺细胞表达神经胶质细胞标记物（S100，GFAP，p75NTR）；参与施万细胞发育和外周髓鞘形成的转录因子（Krox2、Oct6、PAX3和SOX10）；和神经营养因子（NGF、BDNF、GDNF和CNTF）。
艾美捷abm永生化小鼠雪旺细胞基本参数：
货号：T0295
名称：永生化小鼠施万细胞（IMS32）
生物体：小鼠（M. musculus）
组织：大脑
供体历史：ICR 小鼠
生长特性：贴壁，纺锤形
细胞类型：永生化细胞
储存条件：液氮的气相，或低于-130°C。
运输条件：干冰运输。
产品格式：冷冻
预期用途：本产品仅用于实验室研究。不适用于任何动物或人类的治疗用途，任何人类或动物的消费，或任何诊断用途。
生物安全等级：II
生长条件：
建议使用 PriCoat™ T25 烧瓶（G299）或应用细胞外基质（G422）以促进细胞对培养容器的粘附。PriGrow III (TM003) + 10% FBS + 1% 青霉素/链霉素溶液（G255），37.0°C，5% CO₂。
冷冻保存：
使用冷冻保存培养基(TM024)，或含有10% DMSO的完全生长培养基进行冷冻保存。
细胞播种密度（每平方厘米细胞数）：50,000 - 60,000
细胞群倍增时间（小时）：45 - 55
永生化方法：自然永生化
表达：
表达胶质细胞标记物（S100, GFAP, p75NTR）、参与施万细胞发育和周围髓鞘形成过程中的转录因子（Krox20, Oct6, PAX3, 和 SOX10），以及神经营养因子（NGF, BDNF, GDNF, 和 CNTF）。
永生化小鼠雪旺细胞相关产品：
永生化小鼠雪旺细胞分离培养试剂盒
永生化小鼠雪旺细胞分离培养组织处理缓冲液
永生化小鼠雪旺细胞分离培养组织解离缓冲液
永生化小鼠雪旺细胞分离培养组织解离液
永生化小鼠雪旺细胞培养添加剂
永生化小鼠雪旺细胞专用完全培养液
永生化小鼠雪旺细胞鉴定试剂盒
永生化小鼠雪旺细胞文献参考：
Watabe, K., Fukuda, T., Tanaka, J., Honda, H., Toyohara, K., & Sakai, O. (1995). Spontaneously immortalized adult mouse Schwann cells secrete autocrine and paracrine growth-promoting activities. Journal of neuroscience research, 41(2), 279–290.
https://www.amyjet.com/brand/immortalized-cells.shtml
————————————————————
永生小鼠系膜细胞-SV40：实时PCR技术的定量分析
您可能习惯于使用直接从活体组织中提取的细胞，称为原代细胞。原代细胞的难点在于，每次细胞分裂后，它们的端粒都会缩短，导致细胞进入衰老状态并停止分裂，仅经过几个细胞周期。这意味着如果您正在进行长期项目，您将经常需要不断收获和重新建立新的原代细胞批次。此外，由于不同的收获条件，每个细胞批次都是不同的，这使得可重复性成为一个问题！
永生化细胞（也称为连续细胞或细胞系）是端粒和/或肿瘤抑制基因已经被改变的原代细胞。肿瘤抑制基因（例如p53和Rb）对于在DNA损伤的可能性更高时（即在多个细胞周期后，更多关于细胞周期的信息请访问我们的知识库）向细胞发出停止分裂的信号非常重要。在永生化细胞的情况下，这些基因已经被抑制或其功能被抑制，使细胞能够无限期地继续分裂。
今天给大家带来的是永生小鼠系膜细胞-SV40：使用实时PCR技术对永生化细胞系中的SV40基因表达进行了定量分析。
艾美捷abm永生小鼠系膜细胞-SV40基本参数：
货号：T0623
名称：SV40永生化小鼠系膜细胞
生物体：小鼠（M. musculus）
组织：肾脏
生长特性：贴壁，多边形
细胞类型：永生化细胞
储存条件：液氮蒸汽相，或低于-130°C
运输条件：干冰冷链运输
产品形式：冷冻
预期用途：本产品仅用于实验室研究。不适用于任何动物或人类的治疗用途，任何人类或动物的消费，或任何诊断用途。
生物安全等级：II
生长条件：
使用PriCoat™ T25烧瓶（G299）或应用细胞外基质（G422）是必需的，以确保细胞贴附在培养容器上。PriGrow IV (TM004) + 10% FBS + 1%青霉素/链霉素溶液（G255），37.0°C，5% CO₂
永生小鼠系膜细胞-SV40部分相关产品：
货号 永生化细胞
T0573 永生化人晶状体上皮细胞-SV40
T0599 永生化小鼠远端附着附睾上皮细胞系(DC2)
T0038 永生化小鼠Floxed Fam20c成骨细胞
T9423 永生化子宫内膜基质细胞SV40T/hTERT
T9427 永生化子宫内膜基质细胞SV40+hTERT
T0688 永生化小鼠肝星状细胞-SV40
T1074 永生化人卵巢上皮细胞-SV40T
T9040 永生化毛细血管内皮细胞-SV40
T0598 永生化小鼠近端附睾附睾上皮细胞系(PC1)
T3105 BMP报告永生化(BRITER)细胞系
T0251 永生化人小胶质细胞-SV40
T1013 永生的人二倍体成纤维细胞-Htert
T9202 永生化成年大鼠海马星形胶质细胞sv40
T9097 永生化大鼠视网膜毛细血管内皮细胞
T0495 永生化小鼠肺上皮细胞(MLE-15
T0448 永生化猪主动脉内皮细胞(AOC
T9258 永生化小鼠心脏微血管内皮细胞SV40
T0446 永生化人心脏成纤维细胞
https://www.amyjet.com/brand/immortalized-cells.shtml
————————————————————
PI(4)P抗体特性、数据和特色文献参考
抗PI（4）P主要与指示的磷酸肌醇（合成或天然来源）的头部基团反应，并根据测定形式显示与其他磷酸肌醇或磷脂的低交叉反应性。
艾美捷PI(4)P抗体（#EEB-Z-P004）：
纯化的抗磷脂酰肌醇4-磷酸（PtdIns(4)P）单克隆抗体。
亚类：IgM
来源：小鼠
应用：ELISA（酶联免疫吸附试验）、免疫荧光、荧光偏振、蛋白-脂质叠加（PIP条带）
分类：抗体与蛋白质
筛选器：抗体、脂质结合、PI(4)P
运输温度：干冰
存储：2-8°C持续30天，-20°C持续超过30天。不要多次冻融
PI(4)P抗体特性：
形态 液体
储存说明 4°C下储存最多30天。如果需要更长时间储存，分装后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
储存缓冲液 PBS（磷酸盐缓冲液），pH 7.4
浓度 0.5 毫克/毫升
纯度 使用Protein G琼脂糖亲和纯化
免疫原 合成的PI(4)P（磷脂酰肌醇4-磷酸）
克隆性 单克隆；克隆号PI4-2
类型 IgM（免疫球蛋白M）
数据：免疫荧光
图像已获得Gerald Hammond的许可进行改编。共聚焦图像显示了用抗PI(4)P染色的细胞（左侧）或在染色前预先与PI(4)P预孵化的细胞（右侧）。DAPI对细胞核进行对比染色。
PI(4)P抗体出版物中的特色：
1) Weber, S. S., C. Ragaz, et al. (2006). “Legionella pneumophila exploits PI(4)P to anchor secreted effector proteins to the replicative vacuole.” PLoS Pathog 2(5): e46.
2) Blagoveshchenskaya, A., F. Y. Cheong, et al. (2008). “Integration of Golgi trafficking and growth factor signaling by the lipid phosphatase SAC1.” J Cell Biol 180(4): 803-12.
3) Cheong, F. Y., V. Sharma, et al. (2010). “Spatial Regulation of Golgi Phosphatidylinositol-4-Phosphate is Required for Enzyme Localization and Glycosylation Fidelity.” Traffic 11(9): 1180-1190.
4) Bojjireddy, N., J. Botyanszki, et al. “Pharmacological and Genetic Targeting of the PI4KA Enzyme Reveals Its Important Role in Maintaining Plasma Membrane Phosphatidylinositol 4-Phosphate and Phosphatidylinositol 4,5-Bisphosphate Levels.” Journal of Biological Chemistry 289(9): 6120-6132.
PI(4)P抗体相关产品：
PI(4)P Mass ELISA K-4000E
PI4-Kinase Activity Assay K-4000K
PI(4)P Beads P-B004a
PI(4)P P-4008,P-4016
BODIPY-FL,TMR PI(4)P C-04F6a,C-04M6a
https://www.amyjet.com/products/EEB-Z-P004.shtml
————————————————————
艾美捷Molecular Depot--一站式仓库解决方案
Molecular Depot是一家位于加利福尼亚州圣地亚哥的创新生化公司。是一个一站式品牌，其中包括抗体、蛋白、试剂盒、酶、染料、脂质、分子试剂等多种产品类型。专注于开发省时、经济高效的研究工具，以及难以找到的生物化学品。
艾美捷 Molecular Depot主产品线：
特色细菌培养基
抗体、抗原和试剂盒
酶与蛋白质
化合物和分子共轭物等
Molecular Depot提供以下领域的咨询和合同研究服务：
蛋白质表达与纯化
抗体和抗原筛查
酶促反应的优化
检测开发（包括ELISA、EIA、FIA、CLIA、免疫比浊法）
实验设计、数据收集和数据分析等
作为Molecular Depot在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的Molecular Depot产品。
https://www.amyjet.com/news/Molecular-Depot-new.shtml
————————————————————
艾美捷Molecular Depot尿素溶液（40%w/v）：各种生化应用的分子工具
尿素溶液40%（重量/体积）是一种高质量的液体溶液，其中含有尿素，尿素是一种通常在尿液中发现的化合物。该产品已被用作各种生化应用的分子工具。它也已在广泛的其他化学和免疫学应用中使用。
艾美捷 Molecular Depot尿素溶液40%：
产品目录编号：B2016521
数量：1瓶
分子量或浓度：60.06
提供形式：溶液
应用：各种生化应用的分子工具
储存条件：2-8°C
关键词：氨基甲酸酯，碳酰二胺
等级：生物技术级。所有产品均为高纯度。所有溶液均使用I型超纯水（电阻率>18 MΩ-cm）配制，并通过0.22微米过滤器过滤。
Molecular Depot尿素溶液（40%w/v）文献参考：
1: Panyachariwat N, Steckel H. Stability of urea in solution and pharmaceutical preparations J Cosmet Sci. 2014 May-Jun;65(3):187-95.
2: Paul S, Paul S. Molecular insights into the urea-choline-O-sulfate interactions in aqueous solution Phys Chem Chem Phys. 2021 Nov 17;23(44):25317-25334.
3: Shao G, Himmelfarb J, Hinds BJ. Strategies for optimizing urea removal to enable portable kidney dialysis: A reappraisal Artif Organs. 2022 Jun;46(6):997-1011.
4: van Gelder MK, Jong JAW, Folkertsma L, Guo Y, Blüchel C, Verhaar MC, Odijk M, Van Nostrum CF, Hennink WE, Gerritsen KGF. Urea removal strategies for dialysate regeneration in a wearable artificial kidney Biomaterials. 2020 Mar;234:119735.
5: Glickman JD, Teitelbaum I, Golper TA. Prescribing Home Hemodialysis Adv Chronic Kidney Dis. 2021 Mar;28(2):157-163.
6: Meyer TW, Sirich TL, Hostetter TH. Dialysis cannot be dosed Semin Dial. 2011 Sep-Oct;24(5):471-9.
7: Pstras L, Ronco C, Tattersall J. Basic physics of hemodiafiltration Semin Dial. 2022 Sep;35(5):390-404.
8: Jones CB, Bargman JM. Should we look beyond Kt/V urea in assessing dialysis adequacy? Semin Dial. 2018 Jul;31(4):420-429.
9: Steinke N, Genina A, Lorenz CD, McLain SE. Salt Interactions in Solution Prevent Direct Association of Urea with a Peptide Backbone J Phys Chem B. 2017 Mar 2;121(8):1866-1876.
10: Basile C, Lomonte C. Kt/V urea does not tell it all Nephrol Dial Transplant. 2012 Apr;27(4):1284-7.
Molecular Depot是一家位于加利福尼亚州圣地亚哥的创新生化公司。是一个一站式品牌，其中包括抗体、蛋白、试剂盒、酶、染料、脂质、分子试剂等多种产品类型。专注于开发省时、经济高效的研究工具，以及难以找到的生物化学品。艾美捷科技是Molecular Depot的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Molecular-Depot-new.shtml
————————————————————
艾美捷Molecular Depot高质量化学溶液：双丙烯酰胺，2%溶液
双丙烯酰胺，2%溶液是分子生物学和生物化学研究中常用的一种高质量化学溶液。它是交联剂双丙烯酰胺和用于制备电泳用聚丙烯酰胺凝胶的单体丙烯酰胺的混合物。该溶液通常用于浇铸聚丙烯酰胺凝胶，以在诸如SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）或天然PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳（native PAGE））的技术中分离蛋白质或核酸。小心处理这种溶液很重要，因为丙烯酰胺是一种神经毒素和潜在致癌物。该产品已被用作各种生物化学应用的分子工具。它还被广泛用于其他化学和免疫学应用。
艾美捷 Molecular Depot双丙烯酰胺，2%溶液：
产品目录编号：B2016484
数量：250毫升
分子量或浓度：154.17克/摩尔
提供形式：粉末
应用：各种生化应用的分子工具
储存条件：2-8°C
关键词：双丙烯酰胺，2%溶液
等级：生物技术级。所有产品均为高纯度。所有溶液均使用I型超纯水（电阻率>18 MΩ-cm）配制，并通过0.22微米过滤器过滤。
Molecular Depot双丙烯酰胺，2%溶液文献参考：
1: Sonagra AD, Dholariya SJ. Electrophoresis 2024 Feb 4. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2024 Jan–.
2: Fan W, Zhu S, Nie J, Du B. Thermo-Sensitive Microgel/Poly(ether sulfone) Composited Ultrafiltration Membranes Materials (Basel). 2023 Jul 21;16(14):5149.
3: Sorkhabi TS, Samberan MF, Ostrowski KA, Majka TM, Piechaczek M, Zajdel P. Preparation and Characterization of Novel Microgels Containing Nano-SiO(2) and Copolymeric Hydrogel Based on Poly (Acrylamide) and Poly (Acrylic Acid): Morphological, Structural and Swelling Studies Materials (Basel). 2022 Jul 8;15(14):4782.
4: Shi Y, Xu H, He Y, Tang X, Tian H, Liang J. Antibacterial Mesoporous Silica Granules Containing a Stable N-Halamine Moiety ACS Omega. 2023 Jun 5;8(24):21410-21417.
5: Li Y, Gong Q, Han L, Liu X, Yang Y, Chen C, Qian C, Han Q. Carboxymethyl cellulose assisted polyaniline in conductive hydrogels for high-performance self-powered strain sensors Carbohydr Polym. 2022 Dec 15;298:120060.
6: Amutenya ELM, Zhou F, Liu J, Long W, Ma L, Liu M, Lv G. Preparation of humic acid-bentonite polymer composite: A heavy metal ion adsorbent Heliyon. 2022 Jun 20;8(6):e09720.
Molecular Depot是一家位于加利福尼亚州圣地亚哥的创新生化公司。是一个一站式品牌，其中包括抗体、蛋白、试剂盒、酶、染料、脂质、分子试剂等多种产品类型。专注于开发省时、经济高效的研究工具，以及难以找到的生物化学品。艾美捷科技是Molecular Depot的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Molecular-Depot-new.shtml
————————————————————
艾美捷Molecular Depot-Church和Gilbert的杂交缓冲，高质量常用缓冲液
Church和Gilbert杂交缓冲液是分子生物学中用于核酸杂交实验（如Southern和Northern印迹）的高质量常用缓冲液。缓冲液被设计为提供核酸探针与靶核酸杂交的Z佳条件。该产品已被用作各种生物化学应用的分子工具。它还被广泛用于其他化学和免疫学应用。
艾美捷 Molecular DepotChurch和Gilbert的杂交缓冲：
产品目录编号：B2016480
数量：50毫升
分子量或浓度：不适用（N/A）
提供形式：溶液
应用：各种生化应用的分子工具
储存条件：2-8°C
关键词：Church和Gilbert的杂交缓冲液
等级：生物技术级。所有产品均为高纯度。所有溶液均使用I型超纯水（电阻率>18 MΩ-cm）配制，并通过0.22微米过滤器过滤。
Molecular Depot-Church和Gilbert的杂交缓冲文献参考：
1: Church GM, Gilbert W. Genomic sequencing Proc Natl Acad Sci U S A. 1984 Apr;81(7):1991-5.
2: Tizard R, Cate RL, Ramachandran KL, Wysk M, Voyta JC, Murphy OJ, Bronstein I. Imaging of DNA sequences with chemiluminescence Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Jun;87(12):4514-8.
3: Nilsen TW. An alternative method for processing northern blots after capillary transfer Cold Spring Harb Protoc. 2015 Mar 2;2015(3):314-8.
4: Pfeifer GP, Riggs AD. Genomic footprinting by ligation mediated polymerase chain reaction Methods Mol Biol. 1993;15:153-68.
5: Church GM, Gilbert W. The genomic sequencing technique Prog Clin Biol Res. 1985;177:17-21.
6: McDonald D, Hyde E, Debelius JW, Morton JT, Gonzalez A, Ackermann G, Aksenov AA, Behsaz B, Brennan C, Chen Y, DeRight Goldasich L, Dorrestein PC, Dunn RR, Fahimipour AK, Gaffney J, Gilbert JA, Gogul G, Green JL, Hugenholtz P, Humphrey G, Huttenhower C, Jackson MA, Janssen S, Jeste DV, Jiang L, Kelley ST, Knights D, Kosciolek T, Ladau J, Leach J, Marotz C, Meleshko D, Melnik AV, Metcalf JL, Mohimani H, Montassier E, Navas-Molina J, Nguyen TT, Peddada S, Pevzner P, Pollard KS, Rahnavard G, Robbins-Pianka A, Sangwan N, Shorenstein J, Smarr L, Song SJ, Spector T, Swafford AD, Thackray VG, Thompson LR, Tripathi A, Vázquez-Baeza Y, Vrbanac A, Wischmeyer P, Wolfe E, Zhu Q; American Gut Consortium; Knight R. American Gut: an Open Platform for Citizen Science Microbiome Research mSystems. 2018 May 15;3(3):e00031-18.
Molecular Depot是一家位于加利福尼亚州圣地亚哥的创新生化公司。是一个一站式品牌，其中包括抗体、蛋白、试剂盒、酶、染料、脂质、分子试剂等多种产品类型。专注于开发省时、经济高效的研究工具，以及难以找到的生物化学品。艾美捷科技是Molecular Depot的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/Molecular-Depot-new.shtml