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文献信息
题目：Regulation of the migration of colorectal cancer stem cells via the TLR4/MyD88 signaling pathway by the novel surface marker CD14 following LPS stimulation
杂志：Oncology Letters 27.2 (2024): 60.
作者：Li Y, Shi J, Liu Z, et al
DOI：https://doi.org/10.3892/ol.2023.14194
图 文献引用产品信息
研究背景
结直肠癌(CRC)是全球癌症相关死亡的主要原因之一，主要原因与CRC干细胞(CCSCs)引起的术后癌症复发、转移或癌细胞耐药有关，CCSCs缺乏一致和可靠的标记物限制了它们在临床实践中的使用。为了启动促炎反应，脂多糖(LPS)和CD14（单核细胞、巨噬细胞和中性粒细胞的一种特殊表面标志物）通过Toll样受体4(TLR4)信号通路相互作用，此外，脂多糖通过TLR4信号通路促进结直肠癌的发展和转移，CD14与肿瘤的复发、生长、转移和治疗耐药有关，这与CSC的特征（如复发、生长、转移和耐药）是一致的，这表明CD14可能与CCSCs相关。
研究方法
本研究采用免疫荧光双标记法检测CD133和CD14，定量评估结直肠癌组织和癌旁组织石蜡包埋切片CCSCs中CD14的表达。随后，从结直肠癌组织中提取CD14+细胞，通过分析增殖、肿瘤亲和性和治疗耐药性来检测其干性特征，以证实表型鉴定。此外，迁移的体外检测能够检测CD14的功能。
研究结果
1、癌旁组织相比，所有结直肠癌组织中CD14和CD133共表达的阳性率均显著升高。
图 CD14在CD133标记的结直肠csc中表达
2、EdU和CCK-8检测结果显示结肠癌CD14+细胞表现出更强的增殖能力。
图 结肠癌CD14+细胞表现出增强的增殖能力
（CCK-8购自爱必信abs50003 CCK-8试剂盒）
3、细胞克隆实验表明，与CD14-细胞相比，CD14+细胞更大，核分裂增加，聚集成簇。用裸鼠异种移植实验表明植入45天后，CD14+细胞组的肿瘤明显大于CD14-细胞组。
图 CD14+细胞在结肠癌中具有致瘤性
4、耐药性分析。CD14+组和CD14-组细胞的IC50分别为2.554和17.02mg/L，表明与阴性组相比，阳性组的耐药性增加。
图 CCK-8测定5-FU对CD14+和CD14-细胞48h的IC50效应曲线
5、Transwell实验结果显示，与对照组相比，内毒素组表现出更强的迁移能力，而内毒素+中和抗体组的迁移能力比对照组更强（图A）。创面愈合实验表明，内毒素组的细胞迁移能力明显高于内毒素+中和抗体组（图B）。RT-qPCR结果显示MyD88基因表达水平以内毒素组最高（图C），Western blotting显示TLR4和MyD88蛋白的表达在内毒素+中和抗体组和内毒素组均显著高于对照组，其中内毒素组的增加更明显（图D）。
图 内毒素影响细胞迁移
（RIPA裂解液abs9229、彩色PAGE快速凝胶试剂盒(10%)abs9367、ECL化学发光检测试剂盒abs920、 TLR4抗体abs132000、MyD88抗体abs135682、LPSabs47014848, 细胞快速RNA提取试剂盒 abs60027）
常规裂解液对比
品名 | RIPA裂解液（弱） | RIPA裂解液（中） | RIPA裂解液（强） |
货号-规格 | abs9230-100mL | abs9228-100mL | abs9229-100mL |
成分表 | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) | 50mM Tris-HC(pH7.4) |
150mM NaCl | 150mM NaCl | 150mM NaCl |
1%NP-40 | 1%NP-40 | 1%Triton X-100 |
0.25% 脱氧胆酸钠 | 0.5% 脱氧胆酸钠 | 1% 脱氧胆酸钠 |
| 0.1% SDS | 0.1% SDS |
以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂 | 以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂 | 以及正钒酸钠，氟化钠，EDTA和抑肽酶等多种抑制剂 |
特点 | 不含高浓度去垢剂 | 有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度 | 有较高浓度的去垢剂，不适合用Bradford法来测定总蛋白浓度 |
裂解强度 | 温和 | 中 | 强 |
膜蛋白 | 一般 | 较好 | 很好 |
胞浆蛋白 | 很好 | 很好 | 很好 |
核蛋白 | 较好 | 较好 | 很好 |
应用推荐 | WB，IP，Co-IP | WB，IP | WB，IP，Co-IP |
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