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在肿瘤免疫治疗领域，特异性T细胞疗法跟传统治疗方法显著不同，具有显著的抗肿瘤效果，被认为是癌症治疗的终极治疗方案之一。其中，小鼠T细胞特异性识别肿瘤抗原的特异性T细胞免疫疗法在抗肿瘤治疗领域具有重要作用。Absin新推出的小鼠肿瘤抗原特异性T细胞检测刺激试剂盒是一款专门用于小鼠体内肿瘤特异性T细胞检测和分析的试剂盒。该试剂盒基于先进的免疫学和分子生物学技术，通过提供特定的肿瘤抗原刺激剂，刺激T细胞增殖和活化，最终通过流式细胞术或ELISPOT定量检测激活的肿瘤抗原特异性T细胞含量，从而实现对抗肿瘤药物或肿瘤疫苗的效果评价。

多样本检测，包括：

1）小鼠外周血免疫细胞中的肿瘤抗原特异性T细胞的含量；
2）小鼠脾细胞中的肿瘤抗原特异性T细胞的含量；
3）小鼠淋巴结细胞中的肿瘤抗原特异性T细胞的含量；
4）小鼠肿瘤组织细胞中的肿瘤抗原特异性T细胞的含量；

一、产品介绍

肿瘤抗原特异性T细胞是杀伤癌细胞的主力，由于癌细胞和肿瘤抗原的高度异质性，癌细胞没有一种或多种占主导的抗原，因此也就没有几种占主导的抗原特异性T细胞，而传统的使用几种多肽抗原或MHC四聚体技术等检测肿瘤抗原特异性T细胞时，只能检测针对几种已知特定抗原的抗原特异性T细胞，导致检测的抗原特异性T细胞不全面、不准确。

该试剂盒检测纳米颗粒负载癌细胞的全细胞抗原，抗原种类全面、多样和广谱，可全面准确检测不同组织中的肿瘤抗原特异性T细胞。具有特异性高，准确性高，所检测肿瘤抗原特异性T细胞种类全面等优点。

二、产品分类&组成

三、使用方法&检测步骤

1、在细胞培养皿或细胞培养板各孔中加入待检测细胞和相应的培养基，细胞浓度0.8*106-5*106个细胞/mL，考虑到细胞损失和流式细胞术检测的准确性，建议至少使用100万个细胞以上，建议使用12孔或24孔板培养，至少使用1-2mL以上培养基；

2、向其中加入使用PBS或相应培养基重悬后的纳米粒子；（本检测试剂盒中检测纳米粒子使用终浓度为0.5mg/mL-1.0mg/mL）

3、纳米粒子与待检测细胞共孵育32-48h；

4、在培养基中加入Brefeldin A Solution (BFA) (1000*稀释到细胞培养基中)，共孵育4h；

5、使用移液器吹打收集培养基中的悬浮细胞，收集完细胞后将样品细胞在400-500g离心5min，弃去上清液后收集细胞；

6、收集完细胞后将样品细胞重悬于1mL PBS中；

7、除空白对照之外，每个样品加入2μL活死细胞染料标记活细胞和死细胞，混合均匀，冰上避光孵育15-30min；

8、孵育完毕后，400-500g离心5min，用100μL FACS buffer重悬细胞；

9、除空白对照之外。每个样品中加2μL Fc Block封闭免疫细胞表面的Fc受体，混匀后冰上孵育5min；

10、孵育完毕后，每管加入相应的不同荧光染料标记的膜标记抗体CD3抗体、CD4抗体、CD8抗体，冰上孵育15-30min；

11、直接加入500μL 4%多聚甲醛固定细胞，冰上孵育40-60min；

12、400-500g离心5min，弃去上清液，然后加100μL破膜剂重悬细胞，冰上孵育30min；

13、孵育完毕后，每管加入相应的荧光染料标记的IFN-γ抗体，冰上孵育30min；

14、400-500g离心5min，弃去上清后用200μL FACS buffer 重悬细胞或者使用500μL 4%多聚甲醛固定细胞，冰上孵育40-60min后再检测；

15、使用流式细胞术检测所标记抗体为阳性的细胞比例；（注：上机检测时需先过400目滤布之后再检测）

16、使用流式细胞术分析软件分析活细胞中的CD3+IFN-γ+ 、CD3+CD4+IFN-γ+和CD3+CD8+IFN-γ+的T细胞占相应细胞的比例，即为肿瘤抗原特异性T细胞的比例和含量（细胞越多检测越准确。建议检测时活细胞收取数大于10万，最好收集的活细胞数大于20万）。

四、注意事项

1、本产品仅为体外检测用产品，不可食用，也不可注射使用等；请放置在远离儿童可及的范围；
2、现配现用，一旦使用培养基或PBS重悬纳米颗粒后立即加入待检测细胞中混合；
3、使用过程中可根据需要自由搭配所使用的不同抗体的荧光探针；
4、请将固定后的细胞放置在4℃并于一周内完成检测；
5、本产品只适用于小鼠样本的检测。

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