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MICROSTREP plus 反应盘操作及质控手册

适用范围

该试剂盒为定量或定性测定在培养基上生长的包括肺炎链球菌在内的好氧性链球菌菌落抗微生物剂敏感性的试剂。

综述及反应原理

此抗生素的敏感性试验是肉汤培养敏感试验，是用微量的用水稀释或脱水后的肉汤做的药敏试验。

大部分的抗生素可溶于水、缓冲液或符合临床要求的低浓度的肉汤。反应盘中加入115μl已接种过标准敏感菌株的含2%-5%已溶血马血（LHB)的M-H肉汤，在无二氧化碳的温箱内孵育20-24小时，检测细菌的MIC，通过观察读出抑制细菌生长的最低抗生素的浓度。

MicroSTREP Plus Panel Type(B1027-201) 抗链球菌敏感性

注意事项：

1.仅供体外诊断用。

2.按照无菌技术及建立预防措施以防范整个操作过程中的微生物的污染，并应重视对使用过的反应盘的处理。

3.所有器材须经灭菌后，再处理。

贮存条件：

保存于2-30℃。

产品的保质期

贮藏于规定条件以外的环境，可能会使抗生素的效价降低。不要使用已经过期的试剂盒。盘中所有的孔除定位孔外，在加样前应该清澈。

标本的采集和预处理

按照微生物手册上的规定进行适当的收集、运输及接种于初始的分离平板。

操作过程

材料：

1型MicroSTREP plus板（B1027-201）。

操作及质控手册。

1型MicroSTREP plus盘工作标签。

可选材料

1. 0.5 McFarland 硫酸钡标准浊液。

2.100μl消毒吸头

3.盖板（B1010-56B）。

4.普通实验室装备。

D号接种针 60/pk(B1013-5)或240/pk(B1013-4)。

3ml 加样用盐水（B1015-12）。

25ml 3%溶血的马血的M-H肉汤。

微量稀释观察仪（Ｂ１０１０－６）。

质控菌株（参见手册质控章）。

MicroSTREP plus盘1型质控报告（B1014-347）。

RENOK复溶加样系统。

比浊仪。

离心机。

操作步骤：

A． 反应盘的准备

１．从储藏处取出反应盘，不要使用包装不完整如已撕开或破损的。

２．将袋打开取出盘，若冰箱内储存，请尽快打开包装取出反应盘。

３．如有以下情况，反应盘应弃去。

a．干燥剂已消失或破裂。

b． 反应孔已变色。

４．反应盘应平衡到室温再复溶，反应盘可以叠起并在上面用清洁的盖板盖上。所有已打开的反应盘应当天使用，否则弃去。

B． 接种准备

NCCLS认为通过定时菌落数检查接种密度（参照NCCLS M7－A5文件）。

标准浊度技术

用标准浊度技术指示敏感菌株是此反应盘唯一的使用方法。

１．使用接种针或接种环从形态上分离，大菌落上碰４、５下，链球菌在琼脂平板（如５％血平板、巧克力平板）上生长１６－２０小时的小菌落５到１０下。

２．用３毫升盐水稀释细菌，使最终的浊度达0.5 Macfarland 的硫酸钡标准浊度，这一浊度能使Microscan 的比浊仪的浊度范围在0.08±0.02。

３．盖紧后离心标本２－３秒。

４．吸0.1毫升标准的悬浊液到２５毫升LHB肉汤。盖紧后颠倒混匀８－１０次。

５．１５分钟内加入反应盘内。

C．反应盘的复溶和加样。

使用具备D型加样器的RENOK复溶和加样系统，每孔加入115±10μl的上述悬液

要确认分离的细菌是能生长的且是纯的，需将接种液划线接种在干净的血平板或巧克力平板上，孵育过夜，若两种或以上的细菌共存于平板上，应重新分离和检测

１．从工作台上打开转移管的盖子，到孵育槽内加入25毫升LHB肉汤

２．盖好盖子，轻拍在孵育槽内的四个角上的盖子，至少20秒，将其中的气泡排尽

３．打开renok复溶加样仪，加入培养液，按操作手册开始操作

注意：由于溶血马血的物理性质，第一步应尽可能平稳的加入每个孔内，进行这一步，首先加入接种液，当转移管的盖子还盖在孵育槽上的时候，按槽中心的打开按钮，将接种液加入槽中，然后在转移管里加入接种液

４．把RENOK复溶加样仪中的转移管内液体加入Microstrep plus盘内

５．检查一下加样孔的量以确定加样的准确性

D．孵育

１．为了保证热量的分布的均匀，反应盘可３－５个一叠。

２．为了防止蒸发，用干净的盖子把盘盖好，不要让酒精污染盘盖，可用肥皂和水洗净。清洗后室温干燥。

３．在无二氧化碳的孵育箱内孵育２０－２４小时，温度控制在３４－３６℃。

E．数据读取

反应盘通过间接光人工读取（如使用Ｍicroscan的微量稀释观察仪），结果可记录在反应盘工作表上。

１．经２０－２４小时的孵育，从孵箱内取出反应盘。

２．用无尘布擦去盘底的水汽和杂质。

３．仅当生长于质控孔中浑浊方可读盘，如果小孔中培养液清亮或有一点模糊，这是细菌没有完全生长的表现。

４．按照表格记录数据。

５．记录药敏结果（MIC）。

a.小孔生长变混浊，可能是小孔全部混浊，如小孔中心有浑浊，或小孔中的遍布颗粒。用间接光比浊。

b.按以下记录MIC：

１）孵育２０－２４小时，记录MIC，即小孔开始抑制细菌生长的最高浓度。

２）如果在所有的浓度的抗微生物剂中都出现细菌生长MIC应记录为大于最高浓度。

３）若各个小孔都无细菌生长,MIC应记录为小于等于最低浓度。

４）在一系列的生长孔中（如１、２、８μg/dl孔生长，４μg/dl孔不生长）有一个清晰的不生长孔，该现象称为跳孔，该孔应忽略。

５）在分离孔中有污点，提示有污染，应重做。

典型说明

控制性底物澄清，而在生长性底物中有较大点状生长。

在第1和第2列是典型的生长；

第2列显示了生长性底物中的“跳跃”生长，其应被忽略；

第3列中的单独一点与上下的控制性底物相联系说明此点已污染，应忽略；

第1列中的MIC=2μg/ml（最低浓度控制底物）。

第2列中的MIC=>16μg/ml（在所有底物中生长）。

第3列中的MIC=≤0.12μg/ml（所有底物中均无生长）。

第4列中的MIC=2μg/ml（在底物2-8中有拖曳效应）。

（典型的t/s拖曳效应）。

第5列中的MIC=≤0.12μg/ml（所有底物中都有拖曳效应，所以MIC应≤0.12μg/ml）。

（一些药物/微生物组合的典型效应）

第6列中的MIC=≤0.12μg/ml。

质控

合格的抗生素试剂需检测已知MIC范围的菌种。如果结果不符，仔细评估病人的结果，如果是已知的错误，如一些影响病人的结果和因素，有一些问题需要注意，如对个别抗生素的结果进行处理，对一些特殊病例，回顾一下过去的数据，进行一些替代试验或参考实验室的数据，直到问题解决。

MicroSTREP Plus Panel Type(B1027-201)

(肺炎链球菌（ATCC 49619）