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产品介绍

产品信息

产品简介

LysoTracker?系列探针是对活细胞中的酸性区室进行选择性染色的一类荧光染料， LysoTracker探针由一种连接一个弱碱基的荧光基团组成，其中仅弱碱可部分提供质子，以维持PH在中性值。这使LysoTracker?探针能自由无阻地渗透细胞膜，使其能够标记活细胞。一般聚集在球形细胞器上，适用于观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。该类探针具有几大重要的特点，1）选择性标记酸性细胞器；2）纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞；3）具有多色探针提供，可根据情况对样品进行多标实验。Lysotracker中性pH下仅仅发生部分质子化，因此该探针标记细胞器的原理可能与其完全质子化并滞留在细胞器膜上有关。探针对酸性细胞器有高选择性，与二硝基苯 (DNP)不同， 溶酶体红色荧光探针DND-99探针不需二抗来检测。

warbio公司提供LysoTracker? Red DND-99为红色荧光标记的溶酶体探针，具有577/590 nm的激发/发射波长。本品以溶于无水DMSO的1 mM储存液形式提供。

溶酶体红色荧光探针DND-99可用于多种颜色荧光检测。

步骤说明

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。zui佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制

利用培养基或合适的缓冲液将 1mM   储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度为 50-75nM ；

【注意】： 1 ）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。 2 ）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

2. 染色

2.1 对于贴壁细胞

1 ）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

2 ）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量 37 ℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育 30min ～ 2h （具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3 ）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2   对于悬浮细胞

1 ）离心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育 30min ～ 2h （具体时间需根据细胞类型而定）。

3 ）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

4 ）置于荧光镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。

【注意】：对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经 BD Cell-Tak 处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。注意事项

1）DMSO有毒，使用时请小心操作。

2）了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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