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溶酶体绿色荧光探针DND-26 是对活细胞中的酸性区室进行染色的一种绿色荧光染料，具有 504/511 nm 的zui大激发 /发射波长。本品以溶于无水DMSO的1mM储存液形式提供。

使用方法

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。zui佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制

利用培养基或合适的缓冲液将 1mM   储存液稀释至工作浓度，推荐工作液浓度为 50-75nM ；

【注意】： 1 ）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。 2 ）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

2.  染色

2.1对于贴壁细胞

1 ）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

2 ）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量 37 ℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育 30min ～ 2h （具体孵育时间需根据细胞类型而定）。【注意】：对 溶酶体绿色荧光探针 DND-26 内化过程的动力学研究表明，活细胞摄取此染料仅需数秒即可。缺点在于此探针可能引起溶酶体产生“碱性效应 Alkalizing effect ”，也就是说过长孵育时间会诱导溶酶体 pH 值提高。建议仅当该探针于 37 ℃孵育细胞 1-5min 才可用作 pH 指示剂。

3 ）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

2.2   对于悬浮细胞

1 ）离心，吸除上清。

2 ）利用 37 ℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育 30min ～ 2h （具体时间需根据细胞类型而定）。

3 ）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

4 ）置于荧光镜下观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或加长染色时间。

【注意】：对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经 BD Cell-Tak 处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。1）DMSO有毒，使用时请小心操作。

2）了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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