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产品介绍

脯氨酸（Pro）含量检测试剂盒说明书

可见分光光度法

注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：SH140K

规格：50T/48S

产品内容：

提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：冰乙酸4℃保存。（自备）

试剂二：液体45 mL×1 瓶， 4℃保存。

试剂三：JB 4℃保存。（自备）

标准品：脯氨酸10mg，4℃保存。

 产品简介：

脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加试剂三萃取后，在520nm 测定吸光度。

自备实验用品及仪器：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、冰乙酸、试剂三、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理：

1、细胞、细菌或组织样品的制备：

细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每100 万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3 秒，间隔10 秒，重复30 次），之后置沸水浴振荡提取10min；10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

组织：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取10min，10000g，常温离心10min，取上清，冷却后待测。

2、血清（浆）样品：取100μL 血清（浆）加入0.9mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取10 分钟，10000g，常温离心10 分钟，取上清，冷却后待测。

3、标准品的处理：称取1mg，将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。

二、测定操作：

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至520nm，试剂三调零。

2、取0.5mL 上清液（或稀释后的标准品）+0.5mL 试剂一+0.5mL 试剂二于有盖试管中，置沸水浴中保温30min（盖紧，防止水分散失），每10min 振荡一次。

3、待冷却后，在试管中加入1mL 试剂三，振荡30s，静置片刻，使色素转至试剂三中；吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL 玻璃比色皿中，于520nm 波长处比色，记录吸光值。

4、根据标准品吸光值和浓度，建立标准曲线。

三、Pro 含量计算：

1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y 为脯氨酸含量，μg/mL；x 为OD 值)

2、按照细菌、细胞个数或者组织鲜重计算，首先根据标准曲线求得y 值：

细胞或细菌中脯氨酸含量(μg/10⁴ cell)= y÷细胞浓度(10⁴ cell/mL)

Pro 含量(μg/g mass) =y÷样本鲜重(g/mL)

3、血清（浆）中脯氨酸含量，首先根据标准曲线求得y 值：

Pro 含量[μg/mL 血清（浆）] = y÷0.1mL 血清（浆）/mL

注意：提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。

SH140K-50 脯氨酸含量测定试剂盒（可见光分光光度法） 金克隆G-CLONE 50管/48样

SH140K-50 脯氨酸含量测定试剂盒（可见光分光光度法） 金克隆G-CLONE 50管/48样

SH140K-50 脯氨酸含量测定试剂盒（可见光分光光度法） 金克隆G-CLONE 50管/48样

氨基酸代谢系列检测试剂盒