产品介绍
组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
货号:SH676K
规格:50T/24S
产品内容:
提取液:液体30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体10mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体30mL×1 瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。
标准品:液体0.5mL×1 支,2μmol/mL 酚标准液,4℃保存。
产品说明:
AKP/ALP 是一种含锌的糖蛋白酶,在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中,以肝脏为主。
通过测定510nm 吸光度增加速率,来计算AKP 活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
称取约0.1g 组织,加提取液1mL 充分研磨,4℃,10000rpm 离心10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,或者适当稀释后用于测定。
二、测定步骤:
1.可见分光光度计预热30 min 以上,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。
2. 操作表
试剂名称(μL) | 测定管 | 对照管 | 空白管 | 标准管 |
蒸馏水 | - | - | 20 | - |
2μmol/mL标准 | - | - | - | 20 |
上清液 | 20 | - | - | - |
试剂一 | 200 | 200 | 200 | 200 |
试剂二 | 200 | 200 | 200 | 200 |
混匀后置于 37℃水浴中保温 15min |
试剂三 | 600 | 600 | 600 | 600 |
上清液 | - | 20 | - | - |
混匀后于 510 nm测定吸光度,分别记为 A测定管、 A对照管、 A空白管、 A标准管。 |
三、AKP/ALP 活性计算:
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 酚为一个酶活力单位。
AKP/ALP (U/mg prot)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样]÷(Cpr×V 样)÷T
=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1 μmol 酚为一个酶活力单位。
ACP 活力(U/g 鲜重)= [C 标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样] ÷(W÷V提取×V样)÷T
=0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管) ÷W
3.血液中ACP 活性计算
活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol 酚为一个酶活力单位。
ACP 活力(U/mL)= [C 标准品×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样] ÷V 样÷T =0.133×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标准品:2μmol/mL;V 反总:反应体系总体积(mL),1020μL=1.02mL; V 样:加入反应体系中上清液体积(mL),0.02mL;T:反应时间(min),15 min;V 提取:加入提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL。
注意事项:
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。
SH676K-50 组织及血液碱性磷酸酶(AKP/ALP)活性检测试剂盒 可见分光光度法 金克隆G-CLONE 50管/24样
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