产品介绍
AFLP 技术服务
AFLP标记技术是1993年由荷兰的Zabeau和Vos博士提出并完善的。现已广泛应用于生物多样性,指纹图谱的构建,遗传图谱的构建,基因克隆等诸多研究领域,显示了广阔的应用前景。AFLP与其他分子标记相比具有:1、DNA 用量少;2、可重复性好;3、多态性强;4、分辨率高;5、样品适用性广;6、对基因组序列信息依赖性低等优点。在物种多态性分析中获得广泛的应用。AFLP的选择扩增产物目前主要通过两种方法进行分离检测,传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的方法和自动化程度较高的毛细管凝胶电泳进行检测。
PAGE方法主要是AFLP的选择扩增产物经过聚丙烯酰胺凝胶电泳得到分离,然后通过银染将条带显现出来,然后通过照相得到相应的图片,优点是引物可以是普通引物,价格相对较低,做少量样本或者大量样本的引物筛选比较合适,另外还可以对差异条带进行克隆测序,获得差异条带的序列信息。
毛细管电泳检测方法的优点是自动化,可以对大量样本进行实验,速度快,后期的条带读取可以依靠软件,降低了人为读取的标准不一。
1)AFLP实验路线
前期确认阶段:试验样本类型,数量,引物,签订试验合作合同;
试验阶段:DNA提取,酶切,预扩增,选择性扩增,电泳检测;若需要克隆,进行目的条带的回收并测序(周期视工作量而定);
数据分析:和客户详细沟通,确认分析方案:读取01矩阵;聚类分析;多样性分析;多态位点数(AP) 、多态位点百 分率(P) 、平均等位基因数(Na) 、有效等位基因数(Ne) 、Nei′s基因多样性指数(H) 、Shannon′s信 息指数(I) 、遗传分化度(Gst)等。利用NTSYS进行聚类分析。
2)目前已经进行的样本类型:树木,草,花卉,昆虫,鱼类,虾类,真菌等
3)客户须知:
本公司需要签订技术服务合作合同;
本公司再试验结束后,如没要求,试验样本将统一销毁;
本公司不接受具有致病性和潜在危险的原始样本,此类样本请您提供样本DNA。
图1 PAGE检测引物筛选图
图2 毛细管电泳检测大量样本图