1) Bradford法对于去污剂敏感,受高浓度去垢剂的影响。需确保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween-20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用Novoprotein生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。Bradford蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性表,参见Bradford蛋白浓度测定兼容性表。
2) Bradford染色液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使用前请颠倒6~8次并且竖直抓住瓶口做水平圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。
3) 低温会降低Bradford染色液的敏感度,因此每次使用前应该使Bradford染色液回复到室温,可以倒出每次需要的Bradford染色液,将原瓶放回冰箱,仅仅将需要的Bradford染色液复温,可以减少复温时间。
4) 蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
5) 由于Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出相对精确的蛋白浓度。所测蛋白质浓度应确保处于标准曲线线性范围内,否则未知蛋白浓度将出现较大误差。
6) 每次测定蛋白样品时,同时应做新的标准曲线。
7) 反应在5分钟后显色充分,但在10分钟后开始出现沉淀,故建议在加入染色液后5-10分钟内完成检测,误差较小。
8) 如果用玻璃比色杯,可先用甲醇冲洗,然后用洗涤剂清洗,最后用水和丙酮冲洗,或用浓盐酸浸泡过夜,再用水洗净。