本质粒以Nco I线性化方式提供,请配合NovoRec?PCR产物一步无缝克隆试剂盒使用(CatNo. NR001)。
Trx是实验室中最常用的融合标签之一,能够促进目标蛋白质的溶解性和正确折叠。在需要用肠激酶(Enterokinase, CatNo. PE001)切除的时候,由于S Tag中存在非特异性降解位点,酶切条件难以控制,常出现两条标签带(17KD,14KD),pNovoTrx通过删除部分氨基酸序列,在保留原有Trx融合蛋白质优势的同时,避免了非特异性酶切,使酶切结果的判断和目标蛋白质的分离变的更加方便。在不希望使用肠激酶切割时,也可通过KpnI或BglII位点引入Tev或其他蛋白酶切割位点。
目的基因扩增按常规方法设计引物后,在5′端引物前添加以下序列:GAC GAT GAT GAC AAG; 3′端引物前添加:TTC GGA TCC GAT ATC。注意:5′端引物从第一个氨基酸不能为Pro。不希望目标蛋白C端保留His Tag时,3′端引物需要加入终止密码子。