产品介绍
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产品名称：兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(RLAⅢ)ELISA试剂盒
产品规格：96T 48T
产品品牌：R&D TSZ
样品类型 血清、血浆、细胞培养上清等样品类型
检测方法 酶联免疫法
特 异 性 公司ELISA试剂盒具有较高的灵敏度和出色的特异性
交叉反应 由于当前的酶联免疫科学技术和知识有限，现有技术不可能完成药物检测的靶抗原之间和所有其他物种的类似物。因此，交叉反应可能仍然存在
样 本 量 50-100 μL
实验时间 1–4.5h
储存条件 2-8°C
储存方法 可以存储在2 - 8°C长达1个月（专家建议：4°C恒温保存，酶免试剂盒实验效果更佳）。对于长期存储,请在-20°C的存储。尽量保持试验板在密封铝箔袋，避免潮湿
有 效 期 6 months
使用优点 ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。
■灵敏，准确和一致的性能
■用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证
■在半天内可完成的现成，方便的检测
标本要求
一、标本的采集及保存
1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
4. 样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过1个月，-80℃不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
储存方式
二、“兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(RLAⅢ)ELISA试剂盒”保存：
1.所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20℃。
2.使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。
3.试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用。使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
注意事项
三、兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(RLAⅢ)ELISA试剂盒注意事项：
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在 4 ℃ 备用，如有特殊 原因需要周期收集标本，
将标本及时分装后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 条件下保存。避免反复冻融。标本 2 -8 ℃ 可保存 48 小时， -20 ℃ 可保存 1 个月。 -70 度可保存 6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
液体类标本：
标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。 1ml 的 全血可得到 0.5ml 的血清或血浆。每个标本量收集体积＝ 100ul × 检测种类。取材前须向销售人员索要说明书。
血清：
室温血液自然凝固 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：
应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入 10 ％（ v/v ）抗凝剂 （ 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合10-20 分钟后，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形 成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：
用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。检测细胞内的 成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀
释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万 /ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS ，缓冲液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制剂或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀
浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分）。仔细收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
操作流程
四、【兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(RLAⅢ)ELISA试剂盒】操作步骤
(1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
(2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
(3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
(4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
(5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
(6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
(7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
(8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
(9）在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用领域
五、判定兔子主要组织相容性复合体Ⅲ类(RLAⅢ)ELISA试剂盒结果计算
对于新入行不久，对ELISA的结果分析这块不太熟悉。客户的实验是通过人源的蛋白作为抗原，兔源多克隆抗体作为一抗（我们就是为了通过做ELISA来检测其效价），然后通过辣根过氧化物作为二抗及显色组分。实验做完了，但不知道怎么分析结果，例如标准曲线怎么做之类的。另外，还想问一下，有没有实用的软件可用来分析。对于客户的问题回答：
间接ELISA要是试剂盒，会有标准品的，把标准品按一定浓度梯度稀释一块儿做（一般有三个重复），最后酶标仪或分光光度计比色，用软件（oringe）绘制标准曲线，的出公式，按公式将样品带入公式，
用于ELISA结果计算最方便的是logit曲线。曲线的横坐标用标样各浓度（ng/ml 或其他单位）的自然对数表示，纵坐标用各浓度显色值的logit值表示。Logit值的计算方法如下：
B/B0 B
Logit（B/B0）=ln———— =ln————
1-B/B0 B0-B
其中B0是0ng/ml孔的显色值，B是其它浓度的显色值。
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