产品介绍
使用方法
细胞冷冻保存方法
选择冻存处于对数生长期的细胞有助于提高复苏细胞存活率。
1.按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
2.按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。
(参考:5×105至5×106 cells/ml)。
3.取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量,置于离心管中,离心收集培养细胞(参 考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min)。移去离心管中的上清液。
4.加入适量的无血清型细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度为5×105至5×106 cells/ml。缓慢地混合均匀,制成细胞混合液。
5.将离心管中的细胞混合液分装于已标示完全的冷冻保存管中。
6.直接将含细胞混合液的冻存管放入-80℃冰箱,长期冷冻保存。
7.若研究者需要液氮保存时,可将完全冻结的冻存管(放入-80℃冰箱后至少一 昼夜)移至-196℃液氮罐。
冻存细胞复苏方法
1.从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37℃振动水浴槽中快速解冻。
2.待冻存管中细胞混合液完全融化后,立即加入1 ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9 ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。
3.离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000 rpm,4℃,3~5 min), 移去上清液。
4.清洗细胞,充分洗净残留冻存液。
5.加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。
6.镜检后,研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。
注意事项
a.最好用处于对数生长期的细胞进行冻存。
b.控制好胰酶的消化时间,切记消化过度,会影响细胞复苏效果。
c.重悬细胞的过程中,请务必要轻柔,以免损伤细胞,但同时也一定要充分重悬,这样细胞在复苏时才不会成团。
d.细胞操作请注意无菌