产品介绍
简介：蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。
主要实验步骤：
1. 组织或细胞蛋白质蛋白质提取
2. 蛋白定量
3. SDS-PAGE胶电泳
4. 转膜
5. 封闭
6. 一抗二抗
7. ECL显色
8. 数据分析
具体流程：
1. 收集样品：
1） 以PBS漂洗细胞后裂解/研磨裂解组织样本
2. 蛋白质定量(BCA法)
3. 制胶
4. 上样：每孔50ug体积。.
5. 电泳
6. 转移：
1） 戴手套切取硝酸纤维素滤膜一张，并以转移液平衡。
2） 转移仪阳极端依次放置whatman滤纸，硝酸纤维素滤膜，凝胶，whatman滤纸。
3）350 mA转移1小时。
7．丽春红染色10分钟。
8 摇床上封闭1—2小时或4度过夜。
9 封闭液稀释一抗（1：500 or 1：1000），以洗涤液洗3次，每次15分钟。
10 封闭液稀释二抗（1：1000 or 1：2000），室温45分钟。
12. ECL 显色. 1:1 配制显色液.
结果提供：
Western 图片（如有需要可进行灰度分析）
客户需提供：
一抗， 二抗（一抗若是兔抗或鼠抗则不需要提供二抗），蛋白样品
收费标准
每张膜上可上10个或15个样品（包括marker在内）
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