产品介绍
A549-luc 人肺癌细胞
一、 细胞名称 A549-luc细胞
二、 组织 人肺癌细胞
三、 母细胞来源 ATCC
四、 转染方法与标记过程的描述 质粒转染后G418筛选
1.使用质粒：GL4.51,购于promega公司。
2.质粒转染：转染采用脂质体法转染，试剂为lipo 2000。两管EP管中分别加入100ul无血清高糖DMEM，其中一管加入1ug量的质粒GL4.51，轻轻震荡混匀，再轻微离心；在另一管中加入lipo 2000，轻轻震荡混匀，轻微离心，然后把含有lipo 2000的EP管中的溶液加入含有的质粒管中，混匀后室温孵育10min。将以上混合液加入需要转染的24孔（提前一天种植A549细胞，培养基为10%FBS+双抗+DMEM，细胞密度约30%）内，37 ℃、5 %CO2条件下培养，8小时后换培养液。
3.细胞筛选：细胞转染后48h消化并转移到6孔板孔内，即时加入G418筛选，浓度800ug/ml，每3天换液一次，持续2周，然后G418浓度降至400 ug/ml，持续筛选2周。最终保持筛选浓度为200ug/ml,传代时按1：5比例。
4.报告基因检测：将转染GL4.51细胞消化并种植到96孔板内，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性对照共同进行单报告基因检测。
五、 培养条件 ：置于37℃、5％CO2培养箱中，用含10％胎牛血清（FBS; Hyclone,）和1％双抗（100 U/ ml青霉素和100 μg/ ml链霉素，Hyclone,Logan, UT, USA）的高糖DMEM培养基培养，培养三天（密度大概80%）按照1：3的比例传代。
六、 细胞传代所需时间：3天/代
七、 筛选标记维持压力和选择压力：G418 200ug/ml 和800ug/ml 。
八、 体内实验 ：
植瘤: 2×106的细胞数分别注射于两只雄性，周龄和体重相似的裸鼠的背部皮下。
成像: 提前0.5h打开活体成像仪，把要拍摄的肿瘤部位周围的鼠毛用8％Na2S脱去以使成像结果更清晰，然后给小鼠腹腔注射荧光素（luciferase的底物，每只注射3mg，稀释于200ul生理盐水中），等待8-10min使酶和底物充分反应后将小鼠置于通有异氟烷气体的麻醉箱内麻醉，有必要可调整空气与异氟烷气体的流入量。也可使用戊巴比妥，但在注射luciferin后约3-5分钟后即开始麻醉。小鼠完全被麻醉后，关闭通入麻醉箱的麻醉气体，打开通入成像仪暗箱的麻醉气体通道，将小鼠放置于暗箱平台中（小鼠头应嵌入异氟烷流入槽内，防止其中途醒来影响成像结果）。第一次拍摄为有外加照明光源存在情况下的小鼠形体背景图；第二次拍摄是无外加光源下拍摄的小鼠体内发出的生物发光，Expose时间为10-30s（可调节），第二次生物发光的图像与第一次背景图叠加后可清晰地观察到小鼠发出生物发光的位置，荧光强弱。最后用软件计算出光源区域的单位光子数，获取和整理图像和处理数据。
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