产品介绍
产品名称：PureCube Rho1D4 Agarose/Cartidge（特异性亲和纯化重组蛋白-- PureCube Rho1D4琼脂糖填料和预装柱）
产品简介：
PureCube Rho1D4 Agarose是针对Rho1D4标签膜蛋白的亲和层析产品，Rho1D4纯化体系是基于Rho1D4抗体与融合蛋白表面Rho1D4表位的高特异性结合而研发的，适用于膜蛋白的纯化。具有Rho1D4标签的膜蛋白可以通过PureCube Rho1D4 Agarose，利用Rho-tag高特异性来纯化。在洗脱过程中，洗脱液中的Rho1D4多肽被用于竞争亲和吸附在填料上的目标蛋白。相比其他洗脱方式，如通过调整pH，多肽竞争性洗脱是更加温和的洗脱方式。德国Cube Biotech技术团队依托在蛋白和膜蛋白生物化学和有机化学等技术的实力，为您提供专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列高质量PureCube Rho1D4琼脂糖填料和预装柱。
产品优势：
1） 德国制造，欧美领先膜蛋白纯化产品供应商；
2） 膜蛋白研究的理想解决方案；
3） 结合能力可高达3-4mg/mL；
4）高度特异性纯化带有标签的重组膜蛋白；
5）可重复再生使用；
6）有效的膜蛋白研究解决方案，可配合Nanodisc产品使用；
7）良好的流量分布和最小空隙体积；
8）兼容常用的色谱仪器；
9）PureCube Rho1D4琼脂糖产品应用已被Springer旗下Human Press出版社出版的Methods in Molecular Biology Series（分子生物学方法系列实验指南丛书）所采用：
Mattle, D. et al. (2015) Mammalian Expression, Purification, and Crystallization of Rhodopsin Variants. Beata Jastrzebska (ed), Rhodopsin: Methods and Protocols. Methods in Molecular Biology, vol. 1271, Chapter 3, DOI 10.1007/978-1-4939-2330-4_3, Springer Science +Business Media New York.
产品详解：
对膜蛋白提取有高特异性和高产量
每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验，以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用，辅以优化过的纯化操作步骤，能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化溶于Fos-Choline?-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达，再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液，4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段，可以通过排阻层析的方法实现。
图1：用PureCube Rho1D4琼脂糖纯化CXCR4。大肠杆菌裂解液（TL）溶解在Fos-Choline?-14中，溶解的组分（SF）与装有Rho1D4抗体的免疫亲和层析柱相结合。平衡组分中没有测得损失目标蛋白，经分光光度计测定，CXCR4在洗脱组分（E1-E4）中得浓度范围在0.6-1.0mg/mL。
什么是Rho1D4?
Rho1D4是细胞内牛视紫红质C末端的最后九位氨基酸，Rho1D4得名于与该序列特异性结合的单克隆抗体，该表位通过与Rho1D4抗体结合可作为针对膜蛋白的高特异性纯化标签。
蛋白 | 表达系统 | 纯度 | 产率（所有回收蛋白） | 采取的纯化步骤 |
hVN1R1 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 1mg/1g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
FPR3 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 2mg/6g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
TAAR5 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 1mg/9g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
OR131-2 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 2.9mg/10g细胞 | Rho1D4 IAC +centrifugation |
hOR17-4 G蛋白偶联受体 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | 90% | 7.5mg/2.5L培养物 | Rho1D4 IAC+SEC |
hOR17-4 G蛋白偶联受体 | 无细胞小麦胚芽提取物 | 70%* | 0.3mg/mL 反应溶液* | Rho1D4 IAC+SEC |
CD81 四次跨膜蛋白 | 可诱导的HEK293S细胞系（哺乳动物） | ＞95% | 26μg/3×10^7 个细胞 | Rho1D4 IAC |
AE1 溶质载体 | S.啤酒系BJ5457 | 93% | 2.5mg/18L 培养物 | Rho1D4 IAC |
表1：有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族，该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC：免疫亲和层析；SEC：排阻层析。
在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体，当时通过将抗体偶联到Sepharose?上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此，Rho1D4系统（标签，偶联抗体的亲和基质，洗脱肽）开始用于少量膜蛋白的纯化，包括G蛋白偶联受体（GPCR），ATP结合转运体，溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。
图2：假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端，它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A
通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端（或N端）加上Rho1D4标签（如图1）。一旦配有该序列，即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白，并随后通过添加过量Rho1D4多肽，产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白，用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。
Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究，如：配体结合的特性，蛋白与蛋白间的相互作用。
*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的；产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。
技术参数：
粒径大小 | 40μm |
蛋白结合能力 | ≤4mg/mL |
推荐流速 | 0.25-1.0mL/min |
保存温度 | 4℃ |
相关产品:
所有PureCube系列琼脂糖产品均提供用于自动液相色谱系统（如：FPLC）的预装柱（提供1mL）；
用于稀释样品或用于pull-down实验，我们推荐使用PureCube Rho1D4 Magbeads磁珠；
Rho1D4抗体：这种抗体作为分离物质来生产PureCube的Rho1D4琼脂糖。也可以在Western Blot实验或者ELISA实验中检测rho-tagged蛋白；
Rho1D4多肽：在洗脱缓冲液中，Rho1D4多肽竞争结合到亲和层析凝胶上然后释放标签蛋白,相对于改变洗脱液的pH值来说提供了更温和的洗脱环境。Cube Biotech 提供了一系列的Rho1D4肽段，这些肽段已经被PureCube Rho1D4琼脂糖验证；
配合Nanodisc产品使用，是有效的膜蛋白提取解决方案。
Rho1D4多肽可以单独购买，也可以购买PureCube Rho1D4试剂盒套装。详情请参见订货信息以及公司官网。
订货信息:
33101 | PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml) |
33102 | PureCube Rho1D4 Agarose (5 ml) |
33103 | PureCube Rho1D4 Agarose (10 ml) |
33301 | PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml) |
33305 | PureCube Rho1D4 Cartridge (1x5 ml) |
33199 | Rho Starter Set 1: PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg) |
33299 | Rho Starter Set 2: PureCube Rho1D4 MagBeads (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg) |
33399 | Rho Starter Set 3: PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg) |
16201 | Rho1D4 peptide (5 mg) |
16203 | Rho1D4 peptide (25 mg) |
40020 | Rho1D4 Antibody (200 μg) |
德国生产商介绍：
德国Cube Biotech是一家专注于蛋白纯化产品的生产商和服务商，尤其擅长于蛋白纯化及膜蛋白纯化。Cube Biotech研发团队拥有逾40年经验致力于膜蛋白的表达、纯化和结晶等研究。在生物医学研究相关的人体膜蛋白等方面，如：作用于转运蛋白或G蛋白偶联受体(GPCRs)等蛋白的药物设计开发建立在对靶蛋白结构及功能的研究之上，而相关研究也依托于研究蛋白及膜蛋白生物化学和有机化学等多方面技术实力。Cube Biotech将专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列产品产业化，现已与全球多家高校实验室、科研机构、制药企业成为紧密的长期合作伙伴，推进了欧美膜蛋白研究以及生物制药的进展。德国Cube Biotech系列产品应用已刊登在《美国化学会-应用材料与界面》（ACS Applied Materials & Interfaces）等期刊，并且PureCube Rho1D4琼脂糖产品应用已被Springer旗下Human Press出版社出版的Methods in Molecular Biology Series（分子生物学方法系列实验指南丛书）所采用。
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