产品介绍
蛋白酶K / Proteinase K
(Lyophilized Powder, from Tritirachium album limber)
简介
蛋白酶K是现有蛋白酶中活性最高的品种,来源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)。蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。在pH 4~pH 12的条件下均有活性,在SDS、尿素或EDTA存在时亦很稳定。它可切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,用于生物样品中蛋白质的降解。蛋白酶K在尿素和SDS中稳定,具有降解天然蛋白质的能力。
应用
u 基因诊断试剂盒
u 基因组DNA提取试剂盒
u RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶
u 提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质-譬如DNA疫苗和肝素的制备
u 制备脉冲电泳的染色体DNA
u 蛋白质印迹
u 蛋白酶K的一般工作浓度50-100ug/ml
质量指标
货号
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170290
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品名
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蛋白酶K / Proteinase K
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来源
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林伯氏白色念球菌(Tritirachium album limber)
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外观
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白色冻干粉
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比活
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>40 U/mg蛋白。
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分子量
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29,730
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CAS No.
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39450-01-6
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EC No
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3.4.21.14
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活性单位定义
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37oC、pH 7.5条件下,每分钟可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量,定义为一个单位(U)。
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DNase残留
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以λ DNA为底物,37oC消化6小时以上,未检测到脱氧核糖核酸酶活性。
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RNase残留
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25oC消化16小时以上,未检测到核糖核酸酶活性。
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失活方法
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反应体系中加入PMSF或DFP抑制剂即可失活,65℃温育10-15min可部分失活
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包装/价格
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100mg/350元,1g,10g,询价 现货
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储存
干粉状态可在0~4oC条件下低温保藏。溶解后分装为适当体积,-20oC贮存。运输可在室温下进行。
正确的贮存条件下,干粉状态的有效期可达一年。液体状态在-20oC有效期为半年。打开包装使用后,如果在2~8oC环境下放置超过一周时间,建议过滤除菌或增加稳定剂如0.5%叠氮化钠,防止微生物污染。
贮存和稀释缓冲液:50 mM Tris-HCL缓冲液,2mMCaCL2 (pH 8.0)。
反应条件:反应缓冲液中37-56℃温育一小时
实验数据
1. 酶活测定和稳定性试验
(1) 酶活测定
Specificity Activit of Proteinase K
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Product Manufacture
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国外M品牌
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Seebio
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Activty from lyophilized product u/mg
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33.5
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49.5
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(2)纯度和消化蛋白测试(SDS-PAGE)
结果: 蛋白质纯度超过 99% (激光扫描 SDS-PAGE胶)
(3) 稳定性测试:
结论:冻干粉正确储存一年内活性不变;液体酶酶活半年内降低小于5%。
2. 对比试验
以Roche蛋白酶K和seebio蛋白酶K对比。
对比反应条件:roche蛋白酶k65℃10m; Seebio 蛋白酶k65℃10m; Seebio 蛋白酶K55℃60m
以下结果QC符合要求。每管均为500ul全血。共3组对照。
实验条件
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得率
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ROCHE65℃10m
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33ug
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19.2ug
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5ug
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SEEBIO65℃10m
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30ug
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20ug
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4.8ug
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SEEBIO55℃60m
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30.4ug
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18.5ug
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5.4ug
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结论:SEEBIO 蛋白酶K与ROCHE蛋白酶k实验结果显示在65℃水浴10m后得率及跑胶图效果基本相同。可替代使用。
全血提取DNA试剂盒电泳图
日期:2010.06.09 凝胶浓度:0.7%琼脂糖RNA胶 上样量:1ug/孔 电泳条件:U=105V T=15min 1. 090826-15(roche,65℃ 10m) 2.090826-15 (seebio,65℃ 10m) 3. 090826-15(seebio,55℃ 60m) 4.090826-17 (roche, 65℃10m) 5. 090526-17(seebio, 65℃10m) 6.090826-17 (seebio, 55℃60m) 7. 090826-20(roche, 65℃10m) 8.090826-20 (seebio, 65℃10m) 9. 090826-20(seebio, 55℃60m)
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全血提取DNA actin电泳图
日期:2010.06.10 凝胶浓度:0.7%琼脂糖DNA胶 上样量:10ug/孔 电泳条件:U=95V T=15min 1. 090826-15(roche,65℃ 10m) 2.090826-15 (seebio,65℃ 10m) 3. 090826-15(seebio,55℃ 60m) 4.090826-17 (roche, 65℃10m) 5. 090526-17(seebio, 65℃10m) 6.090826-17 (seebio, 55℃60m) 7. 090826-20(roche, 65℃10m) 8.090826-20 (seebio, 65℃10m) 9. 090826-20(seebio, 55℃60m) -:Negative control +:Positive Control
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参考文献
1. Kraus, E; et.al.
Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and
Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
2. Jany,KD, et al. Amino
Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber.
Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS
Letter, 199,139.1986.
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