前处理操作简单,操作时间仅需45min,试剂盒灵敏度:0.05ppb,可定性、定量检测动物组织(含水产)、牛奶、蜂蜜、饲料、鸡蛋等样品中氯霉素的残留
一、概要
氯霉素 (Chloramphenicol,CAP)曾是应用广泛的抗菌素,但由于其存在严重的副作用,能引起人的再生障碍性贫血,粒细胞缺乏症等疾病,欧美等发达国家已相继禁止或严格禁止使用。
氯霉素检测试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品,,能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
氯霉素检测试剂盒采用直接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被氯霉素抗体,样品中残留的氯霉素和酶标氯霉素抗原竞争微孔条上预包被的抗体,经TMB底物显色,样品吸光值与其残留物氯霉素的含量成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中氯霉素的含量。
三、适用范围
氯霉素检测试剂盒 可定性、定量检测动物组织(含水产)、牛奶、蜂蜜、饲料、鸡蛋等样品中氯霉素的残留。
四、交叉反应率
氯霉素………………………………………………………100%
氯霉素碱……………………………………………………0.5%
甲基氯霉素……………………………………………≤0.05%
氟苯尼考…………………………………………………<0.01%
氟苯尼考胺………………………………………………<0.1%
五、使用单位需自备的设备及试剂
设备:
┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm
┅┅振荡器
┅┅涡旋仪
┅┅离心机
┅┅水浴锅
┅┅天平:感量0.01g
┅┅刻度移液管:10ml
┅┅洗耳球
┅┅离心管:10ml、50ml
┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置
┅┅玻璃离心管:10ml
┅┅微量移液器:单道 20ml~200ml、200ml~1000ml
多道 250ml
试剂:
![](file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-18394.png)
┅┅乙酸乙酯
┅┅正己烷
┅┅氯化钠
┅┅去离子水
六、提供的材料与试剂
酶标板
标准品×6瓶*
高浓度标准品100ppb
氯霉素酶标物
底物液A液
底物液B液
终止液
浓缩洗涤液(10×)
氯霉素浓缩样品稀释液(2×)*注:标准品浓度为0ppb,0.05ppb,0.15ppb,0.45ppb,1.35ppb,4.05ppb
七、[样品处理前须知]:
(a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否洁净,必须使用洁净的实验器具,以避免污染干扰实验结果。
(c)未处理的样品需冷冻保存。
(d)处理后的样品可在2~8℃避光保存24h。
八、[检测步骤]
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
[操作步骤]
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样品/标准品对应微孔按序编号,并记录标准孔和样品孔所在的位置。
5、加标准品/样品:加标准品/样品70ml到对应的微孔中,再加入氯霉素酶标物30ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300ml/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50ml/孔,再加底物液B液50ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15~20min。
8、测定:加入终止液50ml/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止液用目测法可进行判定)。
九、[检测方法灵敏度、准确度、精密度]
试剂盒灵敏度:0.05ppb
样品最低检测限:
组织样品……………………………………………0.1ppb
牛奶………………………………………………0.05ppb
饲料……………………………………………0.2ppb
蛋…………………………………………………………0.05ppb
蜂蜜…………………………………………………0.05ppb
回收率:
组织样品……………………………………………… 102±15%
牛奶………………………………………………… 110±10%
饲料………………………………………………………93±10%
蛋………………………………………………………95±15%
蜂蜜………………………………………………………80±10%
精密度…………………………………………试剂盒的变异系数均小于10%
十、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样品没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长),但不得超过40min。反之,则减短反应时间。
9、该试剂盒最佳反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
十一、贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。