产品介绍
氨快速检测试剂盒
K-AMIAR
96次
引言:
氨是一种广泛存在的自然化合物，经常是微生物蛋白质代谢的产物，因此，氨可以作为果汁，牛奶，奶酪，肉类，海产食品和烘焙食品的质量指标。与其他试剂盒相比，本试剂盒的优点在于采用了不受丹宁抑制的谷氨酸脱氢酶，丹宁常见于果汁和葡萄酒中。在葡萄酒生产中，氨的检测对于计算酵母可利用氮（YAN）很重要。YAN由三种高变量组成：游离氨离子，初级氨态氮（来源于游离氨基酸）和L-精氨酸侧链。最精确地测定YAN需要定量检测三种化合物，因此，Megazyme设计生产了L-精氨酸/尿素/氨检测试剂盒(K-LARGE)和初级氨态氮检测试剂盒（K-PANOPA）。
原理:
氨的定量分析只需要一步酶化反应。在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)和谷氨酸脱氢酶(GIDH)的存在下，氨（或氨离子；NH4+）与2-酮戊二酸反应生成L-谷氨酸和NADP+（1）。
反应中产生的NADP+ 的量可以用来计量氨的量。NADPH的消耗量可通过340nm处减少的吸光率测定。
特异性，灵敏度，线性和精确性
此方法特异性检测氨。在试剂级硫酸铵的检测中，大约可以预期结果为100%。
检测的灵敏度为0.005 个吸光度单位。这相当于最大样品体积为2.00 mL 时，样品溶液浓度为0.018 mg/L。检测限为 0.071 mg/L，这是在0.020的吸光度差异，最大样品体积为2.00 mL得到的 。
氨检测的线性检测范围为0.2 到 7 μg （图1）。在重复测定中，同一份样品溶液，可能产生0.005 到 0.010个吸光光度值的差异。这就相当于样品体积为2.00 mL，样品溶液中氨的浓度大约为0.018到0.035 mg/L。如果样品在制备阶段被稀释过,结果要乘以稀释倍数F。如果样品制备阶段，称量过样品，比如10 g/L，可能会产生0.02 到 0.05 g/100 g 的差异。
干扰:
如果氨的转换在实验指定的时间内（大约3分钟）彻底完成，通常认为是没有发生任何干扰。不过，这个也可以进一步验证，通过在实验的完成时，向比色皿中加入氨（大约每0.1mL4ug），吸光光度值有会明显降低。
样品中的干扰物质的分析可以通过加入一个内参来确定。需要进行一个标准品定量回收实验，通过这个回收实验（也就是在最初的提取步骤中向样品中加入氨）可以算出样品在处理和提取过程中的损失量。
在碱性缓冲液溶液中，蛋白片段会缓慢释放氨，这将会导致缓慢的渐变反应（creep action）。这不是试剂盒的问题。果汁中的丹宁会明显抑制来源于牛肝的GIPH，但Megazyme公司的氨和尿素/氨检测试剂盒使用的GIPH是其他来源的，因此不存在抑制问题。
安全:
氨检测中用到的试剂没有有毒物质。不过浓缩缓冲液中含有叠氮化钠(0.02 % w/v)作为防腐剂。这个通常需要按照有毒物质的安全操作流程进行试验。
试剂盒:
Megazyme 氨检测试剂盒可以进行96次试验，并提供所有的实验方法。
瓶1:TEA缓冲液 (48 mL，0.5 M，pH 8.0) 加咪唑(200mM)，2-酮戊二酸（40mM）和叠氮化钠 (0.02 % w/v)作为防腐剂 4°C保存，稳定性>2年。.
瓶2:含NADPH的片剂。这些片剂装在预装填干燥剂的特殊塑料小瓶里。在打开瓶子取出片剂之前，需恢复至室温（尽可能在有干燥剂的环境下），这可以使剩余片剂不会吸收水分因此保证最大的稳定性。4°C 或-20°C干燥保存（尽可能在有干燥剂的环境下），稳定性>2年。
瓶3 :谷氨酸脱氢酶悬浮液(2.2 mL，475 U/mL)，4°C保存，稳定性>2年。
瓶4 :氨标准溶液(5 mL，0.04 mg/mL) 溶于0.02 % (w/v) 叠氮化钠溶液。4°C保存，稳定性>2年。
详情请联系：13426290554
来宝会员