产品介绍
乙醇检测试剂盒
K-ETOH 60次
引言:
乙醇在食品中普遍存在,因此不仅在葡萄酒,啤酒和烈性酒制造业中要检测乙醇,而且许多低乙醇和无乙醇饮料,果汁和一些食品生产中也要检测乙醇,如巧克力,糖果,果酱,蜂蜜,醋和奶制品。在很多非食品中也含有大量的酒精,例如化妆品和药品。
原理:
乙醇的定量测定需要两步酶促反应;第一步反应由乙醇脱氢酶(ADH)催化,在NAD+的存在下,乙醇被氧化成乙醛(1)
然而,由于反应(1)的平衡在于乙醇和NAD+的浓度,因此需要进一步反应消耗掉产品—乙醛,这可以通过乙醛脱氢酶(AI-DH)催化,在NAD+的存在下将乙醛定量氧化成乙酸完成。
在这个反应路径中,形成的NADH的量是乙醇的量的2倍,再通过340nm下吸光度值的增加测定NADH。
特异性,灵敏度,线性检测范围和精确度:
分析中试剂的添加顺序可去除醛和酮的所有干扰。因为使用的酶的Km-值很不利,所以甲醇不会被转换。
此方法是针对乙醇优化的,然而也可定量转换n-丙醇,n –丁醇。高级伯醇则以显著降低的速度反应,如果存在,会导致样品依赖型渐变反应。
检测的灵敏度为0.005 个吸光度单位。相当于样品最大体积为2.00 mL 时,样品浓度为0.023 mg/L。检测限为 0.093 mg/L,这是在0.020的吸光度差异,样品最大体积为2.00 mL为得到的 。
在这个分析方法中,乙醇线性检测范围为0.25 到 12 μg 。在重复测定中,同一份样品溶液,可能产生0.005 到 0.010 个吸光光度值的差异。这就相当于样品2.00 mL,样品溶液中乙醇的浓度大约为0.023 到 0.046 mg/L 。如果样品在制备阶段被稀释过,结果要乘以稀释倍数F。如果样品制备阶段,称量过样品,比如10 g/L,可能会产生0.02 到 0.05 g/100 g 的差异。
干扰:
如果分析过程中的蒸馏水和缓冲液,空气里存在乙醇可分别导致空白对照组值增加和渐变反应。因此有必要在分析过程中盖好比色皿。
如果乙醇的转换在分析过程中特定的时间内(大约5分钟)完成,通常认为是没有发生任何干扰。不过,这个也可以进一步验证,通过在实验的完成时,向比色皿中加入乙醇(大约每0.1mL中5ug),吸光光度值有会明显增加。
样品中的干扰物质的分析可以通过加入一个内参来确定。需要进行一个标准品定量回收实验,回收率可以预期。通过这个回收实验(即在最初的提取步骤中向样品中加入乙醇)可以算出样品在处理和提取过程中的损失量。
安全:
乙醇检测中用到的试剂没有有毒物质。不过浓缩缓冲液中含有叠氮化钠(0.02 % w/v)作为防腐剂。这个通常需要按照有毒物质的安全操作流程进行试验。
试剂盒:
Megazyme乙醇检测试剂盒可以进行60次试验,并提供所有的实验方法。
瓶1:焦磷酸钾缓冲液(15 mL,1.5M,pH 9.0)和叠氮化钠 (0.02 % w/v)作为防腐剂 4°C保存,稳定性>2年。
瓶2:NAD+(155mg)。-20°C保存,稳定性>5年。
瓶3:乙醛脱氢酶(AI-DH)悬浮液(1.3 mL,15U/ mL)。-20°C保存,稳定性>2年。
瓶4:乙醇脱氢酶(ADH)悬浮液(1.3 mL,167U/ mL)。4°C保存,稳定性>2年。
瓶5:乙醇标准溶液(5 mL,5mg/ mL)。4°C密闭保存,稳定性>2年。
详情请联系:13426290554