产品介绍
Megazyme甘油检测试剂盒
(K-GCROL)
70次
引言:
食品行业中,甘油在烘焙食品生产中是一种重要的润湿剂。在糖果和酥皮制造中,可以防止结晶,也可以作为食用色素的溶剂和增味剂与提取物的携带品。作为发酵产物,在啤酒和葡萄酒工业中,甘油可以作为检测指标,如果发现甘油浓度达到1 % (v/v),说明有质量问题。洗涤液、乳酪和牙膏中会有甘油。作为保湿剂,在预处理时喷上甘油,可以防止烟草破碎。这个试剂盒的优点在于NADH, ATP和PEP都以高度稳定的药片形式存在。
原理:
甘油在甘油激酶(GK)的作用下被ATP磷酸化成L-3-磷酸甘油(L-glycerol-3-phosphate)(1)。
上式中形成的ADP在丙酮酸激酶(PK)的催化下可与PEP作用,生成ATP及丙酮酸(2)。
丙酮酸在L-乳酸脱氢酶(L-LDH)的作用下可被NADH还原为L-乳酸,NADH被氧化为NAD+(3)。
以上反应形成的NAD+可以用来计算甘油的量,NADH的消耗量可通过340nm处减少的吸光率测定。
特异性,灵敏度,测量范围和精确度:
该实验方法是专门用于测定甘油含量的,对于纯甘油(水中的游离甘油)几乎可以100%检测到。
检测灵敏度为0.010个吸光度单位,这相当于当样品体积为2.00 mL时,样品溶液浓度为0.171 mg/L。检测限为0.342 mg/L,这是在0.020的吸光度差异,样品体积为2.00 mL为得到的 。检测的线性范围为0.8ug-35ug甘油,同一样品分别进行两次测定,其吸光度值会有0.005-0.010吸光度单位的变化,这相当于样品体积为2.00 mL时,样品溶液中甘油浓度大约在0.086-0.171 mg/L。如果样品是经过稀释的,在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数(F),如果在样品制备阶段,样品的重量是被称量的,如:10g/L,可能会产生0.02 到 0.05 g/100 g 的差异。
干扰:
如果在试验规定的时间内(大约5分钟)完成甘油转化过程,通常认为没有干扰发生。这个也可以进一步验证,通过在实验的完成时,向比色皿中加入甘油(0.1mL中加20ug),吸光光度值有会明显降低。
利用附带的内部的标准质控物可以对干扰物质进行鉴定。定量回收试验:通过向样品中添加标准质控物,计算样品在处理和提取时的损失。如:在最初的提取步骤时添加一定量的甘油.
安全性:
甘油测定所使用的试剂没有有毒物质,然而浓缩缓冲液中含有作为防腐剂用的叠氮化钠(0.02 % w/v),这个通常需要按照有毒物质的安全操作流程进行试验。
试剂盒:
Megazyme甘油含量测定试剂盒可以进行70次的测定试验,并提供有全部的试验方法:
瓶 1:Tris/HCl 缓冲液 (20 mL, 1.0 M, pH 7.4) + 氯化镁 (30 mM) +叠氮化钠(0.02 % w/v) 作为防腐剂4°C保存,稳定性> 2年。
瓶 2:药 片 (14) 含有 NADH + ATP +PEP。 4°C 或 -20°C保存,稳定性> 2年。
注意: 将药片瓶放置在加入干燥剂比如硅胶的密闭容器内,于4°C 或-20°C 密封保存,这样可以最大限度的保证药片成分的稳定性。
瓶 3:丙酮酸激酶 (600 U/mL) 加 L-乳酸脂脱氢酶 (550 U/mL) 悬浮液, 1.5 mL。4°C保存,稳定性> 2年。
瓶 4:甘油激酶悬浮液(1.5 mL, 85 U/mL)。4°C保存,稳定性> 2年.
瓶 5:甘油标准溶液 (5 mL, 0.20 mg/mL)溶于 0.02 % (w/v) 叠氮化钠。4°C保存,稳定性> 2年.
详情请联系:13426290554