产品介绍
抗性淀粉分析试剂盒K-RSTAR (100次分析)
原理(AOAC法 2002.02 AACC法32-40)
样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶(AMG)37℃振荡水浴孵育16小时,在这期间,通过两种酶的联合作用,非抗性淀粉被溶解,水解成D-葡萄糖,孵育结束后,加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精(IMS,变性乙醇)终止反应。离心上述溶液,收集上清勿弃,底部残留絮状团即为样品中的RS,用含水的IMS或乙醇(50%v/v)洗涤絮状团,洗涤后离心,再重复一次洗涤离心,收集离心后获得的上清,与之前收集的上清混合。小心倒出试管残留的液体,将絮状团置于冰水浴中,加入2M KOH溶解,溶解的同时用磁力搅拌机用力搅拌。用醋酸盐缓冲液将这个溶液调至中性,用AMG将淀粉定量水解成葡萄糖。D-葡萄糖用葡糖氧化酶/过氧化物酶试剂(GOPOD)测定,这也是对样品中RS含量的测定。非抗性淀粉(可溶性淀粉)的测定可通过集中的上清液并定容至100mL,再用GOPOD测定D-葡萄糖完成。
应用性和精确性
这个方法需要样品中RS含量多于2% w/w。如RS含量多于2% w/w,常规标准误差为+5%。少于2% w/w RS的误差更高。
试剂盒
瓶子1:淀粉葡糖苷酶AMG[pH4.5,40℃,12 ML(消化可溶性淀粉单位为3300U/ mL,消化p-硝基苯基β-麦芽糖苷单位为200U/mL*)]。4℃下稳定性> 3年。
瓶子2:α-胰淀粉酶(胰酶,10g,3Ceralpha U/mg)。4℃下稳定性> 3年。
瓶子3:GOPOD 试剂缓冲液。磷酸钾缓冲液(1M,pH7.4),p-水杨酸(0.22M)和叠氮化钠(0.4%W/V)。4℃下稳定性> 3年。
瓶子4:GOPOD试剂酶。葡糖氧化酶(>12,000U)加上过氧化物酶(>650U)和4-氨基安替比林(80mg)。冻干粉,-20℃下稳定性>5年。
瓶子5:D-葡萄糖标准溶液(5ML,1.0mg/mL)溶于苯甲酸0.2%(w/v)。室温下稳定性>5年。
瓶子6:抗性淀粉对照。抗性淀粉含量如表所示。室温下稳定性>5年。
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