产品介绍
BiOstic? FFPE Tissue RNA Isolation Kit专门设计无需使用有机溶剂，提取福尔马林固定石蜡包埋样品总RNA。专利配方缓冲液结合蛋白酶K，促使石蜡在60℃加热过程中完全溶解并释放组织样品。接着70℃加热步骤去除影响RT-QPCR的分子交联。总RNA从最新技术低溶液洗脱硅胶离心柱回收洗脱，获得更高浓度。再用我们室温稳定的DNase（RTS）完成基因组DNA消化。此时，总RNA可直接用于RT_QPCR、微数列和测序等下游应用。
操作预览
BiOstic? Low Elution spin column产品使用了MOBIO实验室创新平底洗脱离心柱设计，可加快样品处理速度，提高得率。离心柱滤膜与空气气流接触面增加，离心过程可加快样品滤过，整个滤膜能更快甩干。而硅胶技术可在不使用有机溶剂或氯化铯梯度的情况下，能更快更好回收DNA。
BiOstic? FFPE Tissue Isolation Kit一次处理1-5个切片或15mg石蜡包埋样品。先把组织样品从石蜡中溶解出来，再加入RNA抑制缓冲液，在60℃的水浴锅中用蛋白酶K消化。
70℃的加热步骤用来去除RNA中的分子交联，保证RT-qPCR的顺利进行。接着样品与高离序液盐缓冲液和100%乙醇混匀，RNA选择性吸附绑定在LowElution Spin Filters上。冲洗离心柱去除杂质，“on-column”DNase 步骤消化去除基因组DNA，最后用RNase-FreeWater洗脱纯净RNA。
重点注意：Low Eolution SpinFilters 4℃保存
注意：LowElution Spin Filters只适合本试剂盒使用。虽然外观上与MOBIO的其它SpinFilters相似，但内部构造不一样，不能与其它试剂盒的混用。请把它们存放在原试剂盒的有色袋子中避免混淆。
回收率偏低或RNA降解
若RNA的得率或完整性低于预期，可能是下面的原因：
从FFPE组织中提取到的RNA的得率和质量跟组织来源、样品存放时间、切片厚度、包埋时间及每片组织中石蜡含量有关。
RNA在非变性凝胶中容易形成二构体而产生弥散，电泳情况未能反映其真实情况。请根据下文的“甲醛洋菜胶体电泳”跑变性凝胶电泳。
RNA只能在含有用于螯合二价阳离子防止RNA水解的EDTA的水或加样缓冲液中加热。
RNA水解成小片段或单个核苷酸后，260读数会上升。因此260/280比值能指示RNA质量。比值高于2.3表
明RNA有降解。
若用安捷伦的BioAnalyzer分析RNA，请确保把样品加入到芯片上前加热变性RNA，以获得准确的RNA数据。
浓缩RNA
最终RNA体积为20μl。若后续要求更高浓度，请加入2μl3M 乙酸钠混匀。然后加入100μl100%冷乙醇。混匀后-70℃孵育15分钟或-20℃孵育2h~过夜。4℃160000g离心10-15分钟，弃去滤液。用真空离心蒸发器、干燥器或冷干机除去残余乙醇。避免过分干燥沉淀，以免后面重悬困难。用合适体积RNase-FreeWater重悬。
RNA保存
洗脱到RNase-FreeWater（SolutionFR7）的RNA应立即使用或-20℃~-80℃冷冻保存避免降解。也可用乙醇沉淀后-20℃冷冻保存，尽可能减少长期保存过程的降解。
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