产品介绍
UltraClean? Maxi Plasmid Prep Kit专门设计用于提取大体积E. coli菌液的质粒DNA。与UltraClean? 6 Minute Mini Plasmid PrepKit同样使用了硅胶离心柱。可以处理500ml LB培养基或250ml高营养培养基。
先由改进配方的碱性裂解液裂解细菌，DNA吸附到硅胶离心柱滤膜上，经洗涤重悬与小体积的缓冲液中。最终DNA浓度较大，可直接进行自动测序，或进行酶切、标记、PCR等下游使用。
DNA浓缩
最终洗脱到10mM Tris中的DNA体积是4ml，pH8。可根据需要用乙醇沉淀法进行浓缩。加入1/10体积的 3M乙酸钾和2倍体积的100%冷乙醇。-20℃放置1h或过夜。微型离心机上全速离心20min，若使用的是50ml管，5000g离心30min。弃去上清，加入70%乙醇冲洗沉淀中可能存在的盐分。全速再次离心10min。Tube管倒扣在吸水纸上5min，然后风干沉淀。最后用适当量的Solution 5重悬沉淀即可。
菌液使用量
本试剂盒设计一次最多提取250ml LB菌液。为获得更高得率，可用TB DRY? Powerder Growth Media（极品肉汤培养基的干粉）。
低回收率
有好几种因素会降低质粒的回收率。细菌的培养条件是最大的影响因素。先从含有抗生素的新鲜琼脂平板中挑取单个菌落接种到5ml的培养液中，孵育生长8h。然后以1000倍稀释接种到含有抗生素的大体积培养液中，孵育12-16h。延长孵育时间或扩增培养时使用过多原菌液，都会导致菌液在12h前提前进入衰亡期。死亡细胞的自溶会导致质粒的损失，抗生素消耗加快，质粒的选择性下降。处理衰亡期的菌液还会增加最终质粒DNA中基因组DNA杂质。
挑取单个琼脂平板菌落接种扩增培养或使用了非新鲜的琼脂平板菌落会延迟对数生长期的道来，降低收获菌液的密度。非新鲜琼脂平板的菌落，抗生素的降解无法保证挑取的是目标筛选菌。
培养过程最佳的空气条件是，生长容器中的空余空间至少是菌液体积的四倍。
Solution 4未能正确制备也会降低回收率。请确保试剂盒使用前加入了100%乙醇到Solution 4。不要使用95%乙醇或变性酒精。
文献
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