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产品介绍

UltraClean? standard Mini Plasmid Prep Kit使用了常规质粒提取所采用的标准碱性裂解法。试剂盒的试剂盒容量与大多数商业化试剂盒一样，无需再学习新的操作说明。优化的试剂盒和更短的离心时间使其比其它试剂盒提取速度更快更简单。硅胶离心柱法可最大可能地回收到测序级纯度的质粒。可兼容LB等所有高营养培养基。最终质粒溶液不含基因组DNA污染。浓度足够直接进行自动化测序，可直接用于酶切、连接反应、PCR等下游实验。

本试剂盒设计提取1-5ml菌液质粒DNA。由改良的碱性裂解试剂裂解细胞，质粒DNA绑定到硅胶离心柱上。经过冲洗，回收到Tris缓冲液或水中。DNA的浓度足够直接用于上面提到的下游应用。

MO BIO实验室的UltraClean?Standard Mini Plasmid Prep Kit与同类产品Q对比提取LB肉汤培养基过夜孵育的2mL和4ml细菌培养液。

凝胶电泳显示两款试剂盒的提取得率和质量没有明显差异。而同类产品Q的条带上能看到RNA的污染。

一般的核酸定量仪只检测dsDNA的浓度，两款产品的DNA得率差不度。而使用同时检测ss、sd核酸的NanoDrop分光光度计检查DNA质量时却发现同类产品Q因为RNA污染，DNA浓度虚高。

菌液使用量

使用2-5ml LB培养菌液。为获得更高得率，可用TB DRY? Powerder Growth Media（极品肉汤培养基的干粉）。

合并5ml LB培养菌液的细胞

    在2ml管中离心菌液30s。弃去上清，重复操作直至把5ml菌液离心到同一个Tube管中。

低回收率

• 导致低回收率的两个常见原因：

  1、培养基未能完全去除。在这种情况下，加入Solution 3，然后离心。Tube管中形成的沉淀松散，很难转移出所有的液体细胞裂解物。若出现这种情况，请按照下面的方法从头开始。

• 去除所有培养基的好办法：

  本方法需要用到两个Tube管。每次离心时，都要调整Tube管的位置，让Tube管的铰链盖朝向离心机转轴的反方向。第一次离心（1min）把细胞沉淀下来。在把所有液体培养基倒到废液缸中。调整Tube管位置，在离心机上放好，再次离心（5s）可把盖子和管壁上的液滴也集中到Tube管底。每次Tube管离心时都朝一个反向，可使沉淀一直在同一个位置，更容易吸干净所有培养基。最好用小体积枪头，尽可能吸掉所有液体。此时，细胞可用Solution 1进行重悬（见下面的注意事项）。

  2、细胞沉淀未能完全重悬。在这种情况下，细胞团无法有效裂解，影响最终得率。有个好方法可很好重悬细胞。

         涡旋仪调到最大速度，Tube管点振重悬细菌沉淀。点振过程，先顶着转头震10s，离开1s，再继续点振。重复上面操作1min。1min后水平拿着Tube管正对光源，检查是否有团块，液体能否从Tube管一头顺利地流向另一头。若有团块存在，继续点振。一般用涡旋仪最大速度重悬100μl细胞，至少需要1min。若处理的样品比较多，一次可同时点振两管。

  文献

• Wells, C.A., Salvage-Jones, J.A., Li, X., Hitchens, K., Butcher, S.,Murray, R.Z., Beckhouse, A.G., Lo, Y., Manzanero, S., Cobbold, C., Schroder,K., Ma, B., Orr, S., Stewart, L., Lebus, D., Sobieszczuk, P., Hume, D.A., Stow,J., Blanchara, H., and Ashman, R.B. TheMacrophage-Inducible C-Type Lectin, Micle is and Essential Component of theInnate Immune Response to Candida albicans. The Journal of Immunology. 180: 7404-7413(2008).

• Morin, P.A., Hedrick, N.M., Robertson, K.M., Leduc, C.A. ComparativeMitochondrial and Nuclear Quantitative PCR of Historical Marine Tissue, Bone,Baleen, and Tooth Samples . Molecular Ecology Notes. (7) 3: 404-411(2007).

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