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产品介绍

PowerPlant? RNA Isolation Kit专门设计用来提取叶片、根、茎部组织等各种类型植物材料的总RNA。最多可处理50mg样品。在RNA洗脱前使用了专利的抑制因子去除技术（Inhibitor Removal Technology?）及PhenolicSeparation Solution去除组织匀浆中的多糖多酚等PCR抑制因子。可在RNA提取后用DNase Max? Kit（货号：15200-50）或提取过程中用On-SpinColumn DNase I Kit（货号：15100-50）消化去除残余的基因组DNA。On-spinColumn DNase I Kit处理步骤见附录。

操作预览

新鲜或冷冻的植物组织样品通过各种方法均质，方法包括PowerLyzer? 24（珠磨研磨法）、液氮处理和手工研钵磨碎等。往匀浆加入特制的裂解缓冲液，保护RNA免于降解。细胞裂解释放出来的RNA选择性的吸附于硅胶滤膜。经过冲洗去除杂质后洗脱回收，此时RNA可自己用于下游实验。注意：推荐使用MO BIO的On-Spin Column DNase IKit（Mobio货号：15100-50）消化残余的基因组DNA。

样品制备

事先剪碎样品有助于提高研磨均质效率。新鲜稚嫩的组织样品可获得更多高质量的RNA。因为随着年龄的增长组织中的多酚含量增加，提取过程中组织中部分多酚、蒽醌类、细胞壁中的多糖等会混入到RNA中。研磨均质过程中细胞破裂后多酚类氧化并吸附到核酸上，影响分光光度发测量得率，还会抑制对核酸的后续实验。所以提取植物RNA前有必要考虑好植物样品的年龄和类型。

样品起始量

建议以50mg起始量提取新鲜的或冷冻组织样品。超过50mg起始量可能会影响提取效果，导致基因组DNA污染增加或堵塞离心柱（Spin Filter）。若提取的是脱水或冻干样品，加样量请改为25mg。

RNA平均得率

植物组织的类型、年龄、保存方法以及多酚含量都会影响RNA提取得率。下面是几种植物样品使用PowerPlant? RNA Isolation Kit提取的平均RNA得率：

*＋，添加PSS有助提高得率；-，添加PSS得率下降；＋/ -，是否添加PSS不影响得率。

FAQ：

Q. 我可以用PowerPlant RNA Isolation Kit提取microRNA和siRNA吗？

A.PowerPlant RNAkit只需对操作流程稍作修改就能很好地回收到小片段RNAs。为了加大mciroRNA和siRNA的回收率，在吸附RNA到离心柱上前的步骤，加大100%乙醇用量650μl。其它步骤不变。

Q. 所有类型植物样品都可以通过添加PSS（酚类分离溶液）来增加核酸得率吗？

A. 不能。植物样品酚类含量差异很大。有些植物样品（如葡萄叶、草莓叶、番茄茎、松针）富含酚类复合物，严重影响DNA/RNA提取。加入PSS溶液能去除酚类复合物并提高核酸得率。然而，如果植物样品酚类含量不高（如棉花种子、草叶、稻叶、薄荷叶），加入PSS反而会降低得率。不是所有植物样品都富含酚类，因此是否需要添加PSS取决于研究的植物哪个部位。如果你能确定特性样品酚类含量，做个对比实验即可。