产品介绍
1. Fragment AnalyzerTM仪器介绍
Fragment AnalyzerTM全自动毛细管电泳系统是基于荧光检测技术和毛细管电泳技术发展而来的新型DNA/RNA片段分离仪器,它采用敏感的嵌入染料以及强大的LED光源,避免了传统方法中对荧光标记引物的依赖。
DNA/RNA片段的分离是通过对毛细管列阵里填充的可导电的分离胶施加高压电场,依据核酸片段长度不同在凝胶电泳中迁移速度不同的原理,来达到分离检测的目的。
TILLING(Targeting Induced Local Lesions In Genomes),即定向诱导基因组局部突变技术,是一种高通量、低成本且全新的反向遗传学研究方法。TILLING技术借助高通量的检测手段,可快速有效从化学诱变剂处理的突变群体中进行点突变鉴定、突变体鉴定和突变表型鉴定以及SNP检测等。传统的未知突变检测是一个极具挑战且费时费力的过程。由美国AATI公司研发改进的TILLING流程省去荧光标记引物的使用和样品的清洗环节,大大缩短检测时间和人工操作步骤,使得突变检测更加快速、更加容易。
目前,Fragment AnalyzerTM全自动突变检测系统已成功应用于水稻、玉米、小麦、莴苣、西红柿、大豆的反向遗传学TILLING研究中。
2. Fragment AnalyzerTM系统Tilling分析优势
● 全自动 分离胶和样品自动上样,无需手动灌胶,避免交叉污染
● 高通量 可一次检测12或96个样品,最多为288个样品
● 高分辨 分辨率为2bp
● 高灵敏 检测最低浓度可达5pg/ul
● 运行快 15min内完成700bp片段分离
● 成本低 无需芯片,毛细管可反复利用
● 易操作 PROSize2.0软件直观显示分析结果
● 用途广 可分析片段范围为35-40000bp
● 更灵活 可提供12和96两种型号的毛细管列阵
3. Fragment AnalyzerTM在TILLING平台的应用
n 点突变鉴定;突变体鉴定;突变表型鉴定;突变特性研究
n SNP检测和发掘;
n 自然资源评价;
n 作物品种改良;
n 创造突变资源;
n 功能基因组学研究
4. 与传统DNA突变检测技术相比,Fragment AnalyzerTM优势
u 不需要标记的引物
u 省去脱盐清除步骤
u 分析片段长度可达2kbp以上,最高可达40k
u 可同时分析8个不同的DNA样本组成的DNA池
u 电泳时间短
u PRO Size™ 软件全自动突变检测

AdvanCETM FS 96系统:3种不同浓度DNA样品突变位点检测结果
180ng/ul(红色)、90ng/ul(蓝色)、45ng/ul(绿色)均可检测到2个突变位点:215bp和417bp
DNA 2ul+2ul消化酶,酶切45min, 突变检测试剂盒AATI#DNF-480, 异源核酸:同源核酸为1:16(相当于8个二倍体个体混合)

AdvanCETM FS 96系统:无添加剂(红色)和有添加剂(蓝色)的相同DNA样品突变信号比较。异源核酸:同源核酸为1:16(相当于8个二倍体个体混合);LM: Lower Marker ; UM: Upper Marker

AdvanCETM FS 96系统:不同比例的异源核酸:同源核酸DNA样品突变检测结果。
结果显示,在1:24混合比例下系统仍有检测信号,保证了DNA样品检测的高通量。

AdvanCETM FS 96系统与突变检测试剂盒(AATI#DNF-480)结合应用实例
A:1492bp玉米(二倍体),1:3; 1:9; 1:17倍混合
B:1220bp水稻(二倍体),1:2; 1:16混合
C:西红柿(二倍体),水稻(二倍体),莴苣(二倍体),1:6倍混合
D:油菜(四倍体),1:4倍混合

1194bp六倍体小麦的DNA 2倍池化,传统的板胶方法可得到2个突变位点:397bp和786bp,Fragment Analyzer TM显示传统方法中未检测到的另外两个突变位点:563bp和608bp。
灵敏度更高,可检测传统方法检测不到的突变