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产品介绍

【产品名称】

通用名称：马传染性贫血病病毒(EIAV)核酸检测试剂盒(RT-PCR法)

Name  ：Diagnostic Kit for Equine Infectious Anemia Virus RNA

【包装规格】48T/盒                  

【预期用途】

本试剂盒适用于检测抗凝血等标本中的马传染性贫血病病毒RNA，适用于马传染性贫血病病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对马传染性贫血病病毒特异性引物，用RT-PCR技术对EIAV RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【试剂组成】

说明：不同批号的试剂盒组分不可交互使用。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于7次，有效期12个月。

【所需仪器】

PCR仪、电泳仪、紫外凝胶成像仪等

【标本采集】

无菌采集被检马属动物的抗凝血

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6个月，标本运送应采用2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）

1）样本前处理

在室温放置30~40min，收集中间淡黄色的白细胞层，每管分装500μL，4000rpm离心10min，弃上清液，白细胞沉淀-80℃保存备用。

2）RNA提取

采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的RNA提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照），每测试反应体系配制如下表：

3.加样（样本处理区）

将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取4μL，加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

4.2 推荐循环参数设置：

反应体系为25μL； 

5. 电泳检测

2%琼脂糖凝胶配制：稀释50×TAE缓冲液至1×TAE缓冲液(取20mL 50×TAE缓冲液，加980mL双蒸水至1L)，称4g琼脂糖放于500mL 锥形瓶中，1×TAE 缓冲液200 mL，置入微波炉中加热熔解(避免加热沸腾溶液外溢)，再加入10μL 染料充分混匀。在电泳槽内放好梳子，倒入琼脂糖凝胶，待凝固后使用；

电泳：在电泳槽中加入1×TAE缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。用移液器取10μL PCR 扩增产物于琼脂糖凝胶孔中。加样后，以5V/cm 电压，电泳20-30min（每次电泳时，每隔10min观察一次。当加样缓冲液中溴酚蓝电泳过半至凝胶下2/5处时，可停止电泳）。电泳后，紫外灯下观察结果。

6.结果判定

EIAV阳性质控品出现314bp条带，阴性质控品不出现条带或出现片段较小的引物二聚体条带，实验结果成立。若被检样品出现314bp 条带，判断为阳性，否则为阴性。

7.产品性能指标

试剂灵敏性10-3以上，特异性100%，批间批内差异≤3%。

【注意事项】

所有操作严格按照说明书进行；

试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；

反应液应避光保存；

反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。