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产品介绍

• 产品信息
  
  

  产品名称	产品编号	规格	价格
  Hieff NGS? Novel DNA Ligation Module 新型DNA连接模块	12626ES24	24 T	3282.00
  	12626ES96	96 T	10882.00

  
  产品描述
  

  Hieff NGS^? Novel DNA Ligation Module是针对Illumina^?与MGI^?高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块，采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3′-dA DNA片段的两端连接Illumina^?与MGI^?测序平台适用的DNA接头，具有的连接能力，兼容各类样本，同时也适用于自动化平台，对于复杂结构核酸片段的连接更显，均可得到优异的测序质量。

  本产品与Hieff NGS^? Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace^? II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文库构建，通过Illumina^?高通量平台测序已验证其有效性。

  本产品与Hieff NGS^? Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Novel HF Amplification Mix for MGI^?（Cat#13344）共同用于DNA文库构建，通过MGI^?高通量平台测序已验证其有效性。

  本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，程度保障产品优异性能与批间稳定性。

  
  产品组分
  
  

  产品编号	组分名称	产品编号/规格
  		12626ES24	12626ES96
  12626-A	Novel T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL
  12626-B	5×Novel Ligation Buffer	480 μL	2×960 μL

  
  

  运输与保存方法
  
  

  冰袋运输。

  -20℃保存，效期一年。

  
  注意事项
  
  

  1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
  2）本产品仅作科研用途！
  

  
  使用方法

  
  1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

  表1.  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

  Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比
  1 μg	10:1	50 ng	100:1
  500 ng	20:1	25 ng	200:1
  250 ng	40:1	1 ng	200:1
  100 ng	100:1	500 pg	400:1

  【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

  2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A兼容，进行接头连接。反应请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15分钟即可。

  表2.  Adapter Ligation

  名称	体积（μL）
  dA-tailed DNA	60
  5×Novel Ligation Buffer	20*
  Novel T4 DNA Ligase	5
  DNA Adapter	X**
  ddH2O	To 100

  【注】：*对于5×Novel Ligation Buffer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时离心后使用。

  **根据自身需求加入适量的接头。

  【接头添加计算举例】：当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

  第1步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

  Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

  第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；

  根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

  第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

  接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

  综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头加入体积不超过5 μL）

  
  HB210810