产品介绍
HB200304
Uracil DNA Glycosylase (UDG), Heat-Labile 热敏UDG
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格（元） |
Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile 热敏UDG | 10303ES60 | 100 U | 683.00 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile 热敏UDG | 10303ES76 | 500 U | 3083.00 |
Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), heat-labile 热敏UDG | 10303ES92 | 10000 U | 面议 |
产品描述
热敏UDG（尿嘧啶-DNA糖基化酶）能催化水解含有尿嘧啶的DNA链的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶。热敏UDG酶与普通UDG酶相比，避免了常规UDG酶灭活后可能存在的残留活性在常温下对含dU扩增产物的降解作用。本产品在室温下起作用，且对温度敏感、易于灭活。
产品组分
编号 | 组分 | 产品编号/规格 |
10303ES60 (100 U) | 10303ES76 (500 U) |
10303-A | Uracil DNA Glycosylase (UDG), Heat-Labile (1 U/μL) | 100 μL | 500 μL |
产品应用
1. 去除含dU的PCR产物气溶胶污染。
2. 去除单链或双链DNA尿嘧啶碱基。
酶活定义
以25℃，30 min内完全降解1 μg含有尿嘧啶的dsDNA所需酶量定义为1个活性单位（U）。
失活方式
50℃，10 min。
运输储存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期一年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 热敏UDG在多数PCR反应缓冲液中均有活性。
质量控制
核酸内外切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg λ DNA-Hind III酶切产物37℃下孵育16 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：10 U的本酶和1 μg HeLa细胞总RNA在37℃下孵育1 h，RNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留检测：10 U本品经E.coli 16s rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
酶失活检测：10 U本品经50℃处理10 min，与1 μg含dU的dsDNA模板温育30 min，DNA的电泳谱带不发生变化。
应用实例
1. 按下列体系配制PCR反应液：
组分 | 体积（μL） | 终浓度 |
10×PCR Buffer (Mg2+ Plus) | 5 | 1× |
25 mM MgCl2 | 3 | 1.5 mM |
dUTP (10 mM) | 3 | 0.6 mM |
dCTP / dGTP/ dATP/ dTTP (10 mM each) | 1 | 0.2 mM each |
模板DNA | Optional | - |
引物1 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
引物2 (10 μM) | 2 | 0.4 μM |
Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.5 | 0.05 U/μL |
Heat-Labile UDG (1 U/μL) | 1 | 1 U/50 μL |
ddH2O | Up to 50 |
|
注：根据实验需要，dUTP终浓度可在0.2-0.6 mM 之间调整。可选择性掺入0.2 mM dTTP。
2. PCR反应：
反应温度 | 反应时间 | 循环数 | 目的 |
25℃ | 10 min | 1 | 降解含U模板 |
94℃ | 2 min | 1 | UDG酶失活，模板预变性 |
95℃ | 10 sec | 30-35 | 变性 |
60℃ | 20 sec | 退火 |
72℃ | 30 sec/kb | 延伸 |
72℃ | 5 min | 1 | 终延伸 |
注：25℃反应时间可以根据实验需要在5-10 min内调整。
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