|
1.引物、探针设计与合成：根据基因序列设计并合成特异性real-time PCR引物和探针。
2. RNA抽提：
（1）组织样品：取100mg组织样品加1ml Trizol，匀浆后抽提RNA。
（2）细胞样品：取1×107个细胞，PBS洗涤三次，去PBS后加1ml Trizol，裂解后抽提RNA。
3. RNA质量检测：
（1）测定RNA在260nm和280nm波长处的吸收值，以计算其浓度并评估纯度。
（2）变性琼脂糖凝胶电泳，检测RNA纯度及完整性。
4. 逆转录：使用逆转录酶（RNase H-）将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 标准曲线制备：将标准品质粒做梯度稀释后，进行real-time PCR扩增和检测，以Ct值对拷贝数绘制标准曲线。
7. 定量PCR反应：将待测样品加入优化过的real-time PCR反应液中，进行real-time PCR扩增，检测目的基因和内参基因的Ct值。每反应均做3个平行复孔。
8. 数据分析：
（1）相对定量：使用△△Ct法计算目的基因在不同组间的表达差异。
（2）绝对定量：将样品的Ct值代入标准曲线，以对目的基因进行定量。
（3）熔解曲线分析：确定产物特异性。
9. 实验报告：
（1）详细实验步骤。
（2）数据结果和相关图表
您需提供：
1. 新鲜的组织样品或细胞样品，干冰保存。
2. 背景资料：目的基因的Gene ID、样品来源和mRNA丰度等。
收费标准及实验周期：
1. RNA提取费用：
少于20样品：150元/个
20样品以上：120元/个
2. 定量PCR反应费用：
一个基因每样品150元
二个基因每样品120元
三个基因以上100元/反应
3. 引物和探针合成费用：
引物：1.6元/bp
探针：1200元/条
4. 内参引物探针：免费
5. 实验周期一般为两周
- Email: info@realgene.com.cn;
- 电话: +86-21-61911601 (手机): +86-152 2118 0720
- 传真: +86-21-61911602
|
来宝会员