产品介绍
microRNA 过表达载体构建
真核生物MicroRNA的产生有三种形式。1)miRNA以长的pri-miRNA形式从基因组中转录出来;2)pri-miRNA被RNAaseIII内切酶或剪接体组分切割,形成大约60~70nt的pre-miRNA;3)pre-miRNA被运出细胞核,进而在Dicer样内切酶切割下,形成miRNA。
本公司提供miRNA质粒的构建服务,采用U6、CMV启动子构建的miRNA表达载体,可以在细胞内直接转录出miRNA,行使其功能。同时还可以提供pre-miRNA表达载体及腺病毒载体 (Adenoviral),慢病毒载体(Lentiviral),逆转录病毒载体 (Retroviral) 病毒型载体构建服务。基于载体的miRNA构建流程:
1、客户可选:
提供不同长度、不同形式,由客户自行设计的miRNA,由本公司将其克隆到miRNA表达载体上。
也可据需要,提供来自Sanger miRNA数据库的miRNA序列,由本公司将其克隆到miRNA表达载体上。
提供商业化的miRNA表达载体。
2、合成设计好的DNA序列,将其克隆到客户要求的载体上,并通过测序进行验证。
3、构建好的miRNA质粒连同测序文件、产品说明书一起寄送到客户手中。
本公司的可免费提供的miRNA常用表达载体有:
载体名称 |
启动子 |
筛选基因 |
标记基因 |
pRNAi-U6.1/Neo |
U6 |
Neomycin |
GFP |
pRNAi-CMV3.2/Neo |
CMV |
Neomycin |
GFP |
pRNAi-CMV4.1/Neo
(pSilencer4.1) |
CMV |
Neomycin |
|
microRNA靶基因报告载体/ 荧光素酶报告载体构建
A. 优点:
MiRNA 荧光素酶报告载体具有以下优点:
· 功能性检测:是一种功能性的分析方法,用于监测细胞内miRNA介导的靶基因的调控
· 可定量分析: miRNAs介导的调控可以通过荧光素酶基因的表达进行定量监测
· 可构建稳定细胞系–载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系.
B. 原理:
pLuc-3UTR报告载体是一系列基于荧光素酶报告的构建体,用于监测miRNA介导的细胞内靶基因调控。每个载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40终止子序列。MiRNA的表达并与3 ' UTR结合,导致荧光素酶基因表达的抑制。因此miRNA介导的特异靶的调控可通过荧光素酶活*进行监测。比较二个样本荧光素酶活性可解析调控,明确差异。
本公司的可免费提供的microRNA靶基因报告载体 有:
载体名称 |
启动子 |
标记基因 |
pGL4.17 |
CMV |
荧光素酶基因 |
pGL-Basic |
CMV |
荧光素酶基因 |
pGL3-Control |
CMV |
荧光素酶基因 |
pRL-TK |
CMV |
荧光素酶基因 |