产品介绍
1~5mL 细菌培养液中纯化提取10~30 ug 高纯度质粒DNA。
试剂盒组分
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Catalog#
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PD1211-01
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Preps
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50
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ezBind Columns
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50
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Buffer A1
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15 mL
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Buffer B1
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15 mL
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Buffer N1
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20 mL
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Buffer KB
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30 mL
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DNA Wash Buffer*
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15 mL
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Elution Buffer
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10 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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1.5 mg(75 µL)
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User Manual
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1
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保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
- 使用前请将适量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇终浓度为80%
- 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer
- 若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
操作简要步骤：
- 接种新鲜的单个菌落到1-4 mL的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
- 加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
- 加入 250 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
- 加入350 µL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
- 室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
- 小心吸取离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室温下13,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
- 向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（确保已加入无水乙醇），室温下，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“8”。
- 将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
- 将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 µL（体积>50 µL）的ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置2分钟，13,000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。将洗脱液再加入到柱中，在13,000 rpm 离心1分钟，收集洗脱液。
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