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酶制剂—α-葡萄糖苷酶的用途在这里

来宝网 2020/12/14点击1192次

α-葡()糖苷酶,又名葡萄糖苷水解酶或葡萄糖基转移酶(EC.3.2.1.20),是一种α-D-葡萄糖苷葡,它在糖的催化反应中具有水解和转糖苷的双重作用。外观呈淡白色或浅黄色粉末,无臭无味,用于水,不溶于乙醚和乙醇。储藏于干燥、低温环境中2-8°为宜。

作用:葡萄糖苷酶是生物体内糖代谢途径中的重要成员之一。α-葡萄糖苷酶是直接参与淀粉及糖原的代谢途径。这类酶的功能发生异常会导致出现代谢类的疾病,同时这类酶也是多种药物与抑制剂的作用靶点,用以调节人体内的糖化学代谢。

葡萄糖苷酶应用α-()糖苷酶可用于筛选活性天然药物;

1、葡()糖苷酶固定化:用三羟甲基磷为交联剂,以壳聚糖作载体固定化α-葡萄糖苷酶;

2、制作抑制剂筛选模型:将上述固定化Α-()糖苷酶装入直径为0.8cm、长度为8cm的层析柱中,柱中加入pH6.8的磷酸钾缓冲液,于4℃保存,构成筛选模型;

3、模型有效性验证:用具有代表性的Α-()糖苷酶抑制剂阿卡波糖进行该筛选模型有效性验证,将上述柱子下端紧密插入带有活塞的小管,上端插入一注射器,将柱中的缓冲溶液压到离柱顶下约0.4cm后,分别加入50μl4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(0.116mol/L)和一定量的阿卡波糖溶液(250mg/L),轻轻震荡使柱顶的溶液混匀,然后继续压溶液至液面和柱顶相平,关上底端活塞,再把该柱放入水溶槽,在37℃下温育10分钟,待反应完毕,用5ml pH6.8磷酸钾缓冲液冲洗柱内,收集洗液,把洗脱液稀释至10ml体积,用紫外分光光度计在400nm处测定吸光度值;并把上述50μl4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷、阿卡波糖溶液和5ml缓冲溶液稀释至10ml作空白,按照所得反应液的吸光度数据计算抑制剂阿卡波糖的抑制率;

4.抑制率I()的计算:I()(ΔAE-ΔA)/ΔAE×100%,ΔAE=未加抑制剂前固定Α-()糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷反应后的吸光度值(扣除相应空白);ΔA=加入抑制剂后固定化Α-()糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷反应后的吸光度值(扣除相应空白)C为抑制剂浓度,C为横坐标,抑制率I%为纵坐标,作抑制剂浓度C与相应抑制率I%的回归曲线,并于50%抑制率处得到半抑制率浓度IC50

5用固定化Α-()糖苷酶筛选模型进行中药虎仗水溶性部位的Α-()糖苷酶抑制活性筛选,筛选虎仗水溶性部位。

德晟除了α-葡萄糖苷酶外还有胱硫醚β裂解酶(CBL)、胱硫醚β合成酶(CBS)尿酸酶、甜菜碱同型半胱氨酸S-甲基转移酶、L-同型半胱氨酸甲基转移酶(HTM)、S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、S腺苷甲硫氨酸合成酶(EC 2.5.1.6)、牛源胰蛋白酶、人D-氨基酸氧化酶/-超氧化物歧化酶等


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