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化学发光标记物——吖啶酯发光介绍

来宝网 2020/7/15点击728次


吖啶酯外观为黄色粉末,是一种重要的化学发光试剂,具有较高的量子产率,其化学发光效率较高,通常是鲁米诺的五倍或五倍以上。除此之外吖啶酯的化学发光过程反应迅速,本底低,在氢氧化钠和过氧化氢的存在下即可发光。在氧化反应过程中,结合物被分解,不影响游离吖啶酯的发光,另外吖啶酯类化学发光试剂具有较好的稳定性,易于储存。

吖啶酯粉末

1、化学发光简介: 

最早发现的化学发光现象是在生物体内发现的,如萤火虫,现称之为生物发光,是因生物体发出的可见光而得名。19 世纪 80 年代末,Dubois研究荧光甲壳虫素的冷热水提取物的实验,结果发现在氧存在的条件下,热水提取物和冷水提取物混合时会发生发光现象。到了19世纪末期,人们发现了简单的非生物有机化合物也可以产生化学发光现象。1877年,Radziszewski 研究发现洛汾碱(2,4,5-三苯基咪唑)在碱性介质中被过氧化氢等试剂氧化可发出绿色的光,这种试剂至今仍然普遍得到使用。

1935 年,Gleu 和 Petsch首次报道了光泽精(N,N-二甲基二吖啶硝酸盐)与过氧化氢反应能够产生化学发光现象,在以葡萄糖的测定为例的许多还原性物质的测定中获得了应用。此后吖啶酯衍生物的化学发光现象的发现、化学发光标记试剂的合成和化学发光免疫分析成为20世纪80年代的一个热门的研究内容,促进了这类分析方法在人体成分分析中的应用。但是,由于多数化学发光现象的光强度非常微弱,而且稍纵即逝,故早期的化学发光研究的进展一直比较缓慢,几乎没有得到实质性的应用。直到20世纪60年代,使过去难以测试的微弱光的检测成为了可能,化学发光迈进了定量分析的研究时代。以自由基作为初始反应物的碳水化合物的自动氧化发光,荧光素、曙红等具有荧光特性的染料和过氧化草酸酯与过氧化氢反应的化学发光等新体系的出现,在测定超微量的儿茶奈酚、氨基酸、甾族类等化合物的高灵敏度的检测中发挥了重要的作用。

2、吖啶类化学发光体系

光泽精(Lucigenin, N, N-二甲基二吖啶硝酸盐)是吖啶类化合物的一种,也是研究及应用较为广泛的发光试剂之一,它最先于1935年由Glen和Petscsh发现。李光浩对光泽精化学发光体系的动力学性质、光致发光光谱、化学发光光谱及化学发光机理进行过研究。该反应是快速动力学反应,特别适用于毛细管电泳或色谱的柱后检测。其中研究最多的就是吖啶酯化合物,在碱性条件下,吖啶酯被过氧化氢氧化后产生化学发光。McCapra等对吖啶类衍生物的化学发光机理做了详细的研究。

通常吖啶类衍生物的化学发光寿命相当短,但改进的吖啶环和离去基团的取代会加速或延缓这一快速动力学过程。Ruberto等将该反应引入毛细管电泳,同时分离了四种不同取代基的吖啶酯。在生物活性物质检测中,该体系的研究也有报道。PLWintrod和GIMakhatadze等在碱性条件下测定了肾上腺素和异丙肾上腺素。利用Fe3+-Lucigenin发光体系测定Vc的方法也有报道。还有很多种药物和生物活性物质,例如异丙肾上腺素、苯三酚,卡那微素、抗坏血酸等的测定都取得令人满意的结果。

吖啶酯的化学发光量子产率比鲁米诺高,而且吖啶酯标记条件温和,标记率高,标记后不影响分离,因此有广阔的应用前景,常作为化学发光免疫分析和DNA发光探针的化学发光标记物,广泛用于多种疾病的灵敏检测和诊断,也可用于蛋白质、核酸、肽等含有氨基化合物的分离检测。

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