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和血益智方对VD大鼠学习记忆和海马的影响

资料来源：http://www.bio-will.com/pdlistone/tech/722081.html

〔 摘要〕目的 观察和血益智方对VD大鼠行为学和形态学的影响。

方法 动物随机分为假手术组和模型组。VD模型制作成功后随机分为和血益智方小剂量组和大剂量组、思尔明组、生理盐水（NS）组。用穿梭箱和水迷宫检测大鼠行为学并作海马 常规染色，光镜观察。 和血益智方、思尔明均能缩短VD大鼠穿梭箱实验主动逃避时间和遭受电击时间，减少遭受电击次数；能缩短VD大鼠水迷宫实验时定位航行潜伏期、游泳的路径，增加大鼠空间探索实验中穿越原目标的次数。NS组海马细胞体积变大、核变小、有核仁消失和核固缩；除假手术组正常外，其余各组海马细胞层次有减少，但细胞排列比较密集、细胞形态尚可。

结论 和血益智方可改善VD大鼠的学习记忆能力。

〔关键词〕血管性痴呆；MORRIS水迷宫；学习记忆；海马

血管性痴呆（vascular dementia''VD）是老年人多发痴呆之一，系继发于脑血管病变后的缓慢性、渐进性智能障碍。它不仅给患者带来躯体上的痛苦，也带来精神上的巨大负担。中医学院名老中医教授用和血益智方治疗VD有较好的临床疗效。本实验从行为学和形态学方面研究了和血益智方抗大鼠VD的作用，现报道如下。

1材料和方法

1.1动物及分组

经穿梭箱实验筛选的健康正常SD大鼠，体重220~250 g 10，雄性，随机分为假手术组（10只）和模型组。将造模成功的VD大鼠40只随机分为HXYZ组1（和血益智方小剂量）、HXYZ组2（和血益智方大剂量）、思尔明（Sermion）组、生理盐水（NS）组，每组各10只。各组大鼠均常规饲养。

1.2试剂及器材

Sermion、染发剂

和血益智方含当归、川芎、白芍、生地、黄芪、旱莲草、女贞子、益智仁等。所有药材一次性水煎浓缩为水煎液，用无菌玻璃瓶分装、密封，经Co60照射后 4℃ 保存。给药前在40℃ 恒温水温箱中加热备用。

Morris水迷宫、穿梭箱实验系统、电热恒温水温箱。切片机、显微镜、显微摄像系统。

1.3 方法

1.3.1 模型制作及给药

VD模型制作及术后处理按参考文献[1]进行，夹闭大鼠双侧的颈总动脉5 min、后复灌1 h、连续3次、末次灌注后永久性结扎双侧颈总动脉造模型。假手术组仅分离双侧颈总动脉，既不夹闭也不结扎双侧的颈总动脉，其他与模型组相同。

动物造模成功后，适应性饲养3d后开始给药：HXYZ组1、假手术组大鼠给予125%

和血益智方水煎剂，Sermion组给予0.5 mg/100g思尔明混悬液、NS组给予生理盐水，以上各组均按1 mL/100g灌胃；HXYZ组2用125% 2 mL/100g和血益智方灌胃；各组动物均用药30d。

1.3.2行为学检测

从用药第26天起，分别进行大鼠穿梭箱实验和Morris水迷宫实验。

1.3.2.11

穿梭箱实验 大鼠穿梭箱实验每日1次，连续5 d ，共5次；每次穿梭箱实验于当天晚6时进行，方法参考文献[1]。

1.3.2.2水迷宫实验

Morris水迷宫实验每天2次，连续5d，内容包括学习训练、定位航行（游泳时间设定为120s）、空间探索实验（游泳时间设定为30 s），具体操作方法同参考文献[1]。水迷宫实验于每天白天进行。每次大鼠穿梭箱实验和Morris水迷宫实验各组别顺序相同。

1.3.3病理学观察

行为学检测完毕，立即断头处死大鼠，取左侧海马甲醛固定，然后作HE常规染色，光镜观察。

1.4统计方法

各组穿梭箱实验电击次数、电击时间、主动回避时间和水迷宫实验潜伏期、穿越目标次数、路径等指标用SPSS 10.0软件进行AVON（单因素方差分析）检验。根据方差齐与否，再选择相应的统计分析方法。

2结果

2.1行为学实验结果

2.1.1穿梭箱实验

和血益智方能明显缩短VD大鼠主动逃避时间和遭受电击时间，减少遭受电击次数，与NS组比较有显著性差异（P< 0.05）。但作用不如Sermion组。

2.1.2水迷宫实验

经过和血益智方治疗30 d后，药物组比NS组动物定位航行潜伏期缩短，游泳的路径也缩短；在空间探索实验中，30s内大鼠穿越原目标的次数增加。上述指标经统计分析均有显著性差异。它们的游泳轨迹如图1~5 。

2.2病理学检测结果

光镜下观察：假手术组海马CA1区、CA2区、CA3区、CA4 区以及齿状回等各区的分子层、锥体细胞层（颗粒细胞层）、多形细胞层之细胞排列紧密有序，颗粒细胞大小一致，核圆而大，边界及核仁可见，神经纤维排列整齐；NS组海马CA1区细胞大小不规则，锥体细胞层层次减少，排列稀疏，细胞体积变大，有数量不等的小空泡，细胞核变

小，结构不清，核仁消失，核固缩为三角形或多角形，神经纤维排列紊乱，神经元脱失现象明显。其它各组海马颗粒细胞层次有减少，但层数较模型组多，细胞排列比较密集、整齐有序，细胞缺失存在，核圆而大，边界及核仁尚清楚，胞浆内成分减少，神经纤维排列不太整齐。组织病理切片提示模型组神经元有损伤，用药物治疗后神经元损伤有所减轻。海马组织（HE染色，400倍）的病理切片如图6~10。

3 讨论

VD是继发脑血管病变的中枢神经元结构和功能损害，导致患者认知、学习、记忆、理解等能力下降。不同类型的记忆有不同的神经结构和回路参与，这些神经结构的血流减少或中断，就会引起功能障碍，如不及时恢复血流，神经细胞就会肿胀、死亡[2]。因此，现代医学对VD的治疗[3] 包括：①治疗原发脑血管病；②改善脑功能。所用的药物如思尔明为二氢麦角碱类药，有α受体阻断作用，能扩张颅内脑血管，改善脑血流，有比较明显的抗VD效果。 [4-6]

VD的证候与中医的“呆病”、“文痴”、“健忘”、“善忘”等相当，教授从临床实践观察认为VD以气血亏虚、肝肾不足者居多，兼有痰瘀互病者亦不少见，治宜调和气血、滋补肝肾。方中当归辛温，血虚能补、血瘀能散，使气血调和、各有所归；川芎辛温，活血解郁、行血中之气；白芍微温，和营滋阴，与当归、地黄同用为滋阴养血之良药；生地甘寒养阴，与归芍同用有补血生血之功；黄芪炙之则温，大补元气，填空补虚（髓），为补气药之长，与四物汤同用，起益气养血之用；旱莲草、女贞子甘寒补血，滋肝肾之阴；益智仁补肾益智；法夏则辛燥，降气化浊，对本方中补气养血药起补而不滞，润而不腻的作用，故和血益智方能调和气血、滋补肝肾，填精生髓。

中药药理学研究表明川芎有扩张脑血管、改善微循环、抑制血小板聚集的作用；黄芪、当归有促进骨髓造血、扩张血管的作用，当归还有稳定细胞膜作用；生地能增加“阴虚”动物模型脑内M-胆碱受体的结合位点，并且可促进“血虚”动物红细胞、血色素的恢复，有显著的“生血”作用；白芍有抗血小板聚集作用。黄芪对双侧颈动脉结扎所致的动物脑缺氧有显著对抗作用，可增加小鼠的学习记忆能力。和血益智方抗VD的确切机制与生物活性成分有待进一步研究。