来宝网 2022/3/30点击521次
AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：Obtusifolin对缺氧下视网膜色素上皮细胞生长的抑制作用。
本研究旨在探讨Obtusifolin对缺氧条件下视网膜色素上皮细胞生长的影响。采用氯化钴（CoCl2）建立ARPE-19细胞体外化学缺氧模型。通过细胞计数试剂盒 8 (CCK-8) 测定法测试细胞活力。Western印迹和实时定量聚合酶链反应分别用于检测蛋白质和mRNA。流式细胞术用于检查细胞周期。血管内皮生长因子的分泌 (VEGF) 通过使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行测试。结果发现，在CoCl2建立的化学缺氧模型下，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）mRNA和蛋白水平上调。细胞活力增加，S期比例更高。Obtusifolin 可以在缺氧条件下降低细胞活力并将细胞停滞在G1期。Obtusifolin 在缺氧环境中降低了 Cyclin D1 和增殖细胞核抗原 (PCNA) 的表达，并增加了 p53 和 p21 的表达。缺氧条件下VEGF、VEGFR2和eNOS蛋白及mRNA的含量显著升高，而奥妥叶林抑制升高。该结果表明，Obtusifolin可抑制缺氧条件下的细胞生长，下调ARPE-19细胞HIF-1/VEGF/eNOS的分泌。
RIPA（Abmole，M9637，纯度>99%，）是一种高效的，选择性的受体相互作用蛋白1（RIP1）抑制剂，在本研究中用于进行Western blot试验。Phosphatase inhibitors（Abmole，M7528）适用于保护哺乳动物细胞及组织中蛋白和脂类磷酸化的稳定性。在本研究中用于进行Western blot试验。
Figure 3 Effecst of Obtusifolin on cell cycle associated proteins
为研究 100、200、400 μg/mL Obtusifolin 在缺氧环境下对细胞周期的影响，采用 Western blot 和 RT-qPCR 测定细胞周期相关蛋白和 mRNA 的表达水平。 当ARPE-19细胞在缺氧条件下，Cyclin D1和PCNA蛋白及mRNA的水平显著升高，而p53和p21的水平降低（图3）。
Figure 4 Effecst of Obtusifolin on HIF-1, VEGF, and eNOS
为研究Obtusifolin对缺氧细胞模型中HIF-1、VEGF和eNOS的影响，分别通过RT-qPCR和Western blot检测通路中相关mRNA和蛋白的表达水平。 当 ARPE-19 细胞缺氧时，HIF-1α、VEGF、VEGFR2 和 eNOS 蛋白和 mRNA 的水平显著增加（图 4）。
鸣谢：Li-Fei Wang, et al. Int J Ophthalmol. 2019 Oct 18;12(10):1539-1547.
