来宝网 2022/1/19点击760次
AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：LH和雌激素通过GPR30和EGFR通路加速卵丘扩张的协同作用。
雌激素膜受体 GPR30（也称为 G 蛋白偶联受体 30）最近已被证明参与调节卵母细胞成熟和卵丘扩张。然而，GPR30的表达是否受促性腺激素刺激的调节以及它如何参与成熟过程的调节仍不清楚。在这项研究中探索了促黄体生成素和 17β-雌二醇 (17β-E2) 之间协同作用以改善小鼠卵母细胞成熟过程中卵丘卵母细胞复合体 (COC) 中表皮生长因子 (EGF) 反应的机制。通过实时定量 PCR、蛋白质印迹和免疫荧光染色检测 GPR30、EGFR 和 EGF 样生长因子的表达和分布。 Lyso-Tracker Red 标记用于检测卵泡颗粒细胞 (FGC) 中的溶酶体活性。在体外成熟 16 小时后评估 COC 的积云扩张。研究发现 EGF 样生长因子通过抑制溶酶体中的蛋白质降解来传递 LH 信号以增加 GRP30 水平。同时，17β-E2 刺激 GPR30 信号通路增加 EGF 受体水平，增强 COC 中 EGF 信号传导的反应能力，从而促进卵丘扩张。总之，本研究揭示了 LH 和雌激素在调节卵母细胞成熟过程中卵丘扩张的协同机制。
AG1478（Abmole，M2312，纯度>99%）是EGFR酪氨酸激酶抑制剂，被用于阻断EGFR的激活。
Figure 4. Illustration of mice treatment.
在体内实验中，如图4所示，小鼠每隔一天（48小时间隔）腹腔注射 AG1478（1 mg/kg 体重，溶于含15% captisol 的盐水）或 captisol（对照），并且在第三剂后注射 PMSG。结果显示hCG显著激活p-EGFR(Tyr1068)，而AG1478阻断hCG刺激诱导的p-EGFR激活(p<0.05)。
Figure 5. LH/EGF promoted GPR30 protein accumulation in cumulus cells via a non-genomic pathway mediated by the activation of the EGF receptor.
注射hCG后GPR30蛋白水平增加，但通过 AG1478 处理GPR30蛋白水平降低（p<0.05，图 5A、5B） 。在体外实验中，EGF 处理显著增加GPR30蛋白水平，并伴随p-EGFR (Tyr1068) 激活（p<0.05）。然而，当p-EGFR被3 μM AG1478阻断时，GPR30蛋白的积累被下调（p<0.05，图 5C，5D）。此外，如上所述，GPR30的mRNA被EGF刺激下调，而AG1478逆转了由EGF 处理引起的GPR30转录抑制（p<0.05，图 5E）。结果表明，EGF刺激显著促进GPR30在卵丘细胞中的积累，但 AG1478逆转了由EGF处理引起的积累（p<0.05，图 5F，5G）。然而，在对照、EGF和EGF+AG1478组的卵母细胞中观察到的强度变化很小（p>0.05，图 5F，5G）。
Figure 6. EGFR positively regulates GPR30 protein stability.
由于卵丘细胞数量有限，初级卵泡颗粒细胞 (FGC) 用于进一步的实验。 最初，COCs 用 EGF 或 EGF加AG1478处理，并检测蛋白质表达。结果表明，与卵丘细胞类似，GPR30 蛋白也在 EGFR 激活后在FGC中积累（图 6A-6C）。
鸣谢：Jie Liu, et al. Aging (Albany NY). 2020 Oct 28;12(20):20801-20816.
