来宝网 2021/12/3点击921次
AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：中轮阿汤含药血清通过抑制Janus激酶/信号转导和转录信号通路激活剂对胶原性关节炎大鼠成纤维细胞样滑膜细胞凋亡的影响。
通过研究Janus激酶，研究中格鲁那汤含血清（ZHONGL-CS）对胶原性关节炎（CIA）大鼠成纤维细胞样滑膜细胞（FLS）体外凋亡的影响/信号转导器和转录激活剂 (JAK/STAT) 信号通路。本研究中采用牛Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型。 FLS被分离、培养和鉴定。使用细胞计数试剂盒-8 检测细胞活性。计算半数最大抑制浓度（IC50）。实验对象分为对照组、CIA、ZHONGL-CS、JAK2抑制剂AG490和带AG490的ZHONGL CS组。通过流式细胞术检测FLS中的体外细胞周期和细胞凋亡率。通过蛋白质印迹法检测 FLS 中 Bcl-2 相关 X 蛋白 (Bax)、B 细胞淋巴瘤 2 (Bcl-2)、caspase-3、细胞周期蛋白 D1、磷酸化 JAK2、STAT1 和 STAT3 蛋白的表达。 JAK2、STAT1 和 STAT3 mRNA 水平通过定量实时聚合酶链反应进行检查。结果表明，与CIA组相比，ZHONGL-CS组FLS增殖受到抑制，FLS G0/G1期细胞周期停滞，FLS细胞凋亡率增加。与CIA组相比，ZHONGL CS组Bcl-2和cyclin D1蛋白水平降低，FLS中Bax和caspase-3水平升高。在ZHONGL-CS组中，JAK2、STAT1和STAT3 mRNA的表达以及磷酸化的JAK2、STAT1和STAT3蛋白的水平降低。总之，ZHONGL-CS 可能诱导 CIA 大鼠 FLS 细胞凋亡。 JAK/STAT 信号通路的激活在体外 FLS 中受到抑制。
AG490 (Abmole, M1646，纯度 100% ) 被用于培养细胞，浓度为25μmol/L。
与对照组相比，CIA 组 S 期 FLS 的百分比升高（P < 0.05），G0/G1 期 FLS 的百分比降低（P < 0.01）。G2/M期CS、AG490或ZHONGL-CS+AG490较CIA组显著降低。 同时，处于G0/G1期的显著增加。此外，与 CIA 组相比，ZHONGL-CS + AG490 组 S 期 FLS 的百分比降低。与AG490组相比，ZHONGL-CS或ZHONGL-CS+AG490组G0/G1和G2/M期细胞百分比有显着差异。细胞周期停滞是细胞增殖抑制的主要原因。
ZHONGL-CS、AG490或ZHONGL-CS+AG490处理显著增加Bax和caspase-3的蛋白水平，并降低Bcl-2的蛋白水平和细胞周期蛋白 D1 ，与 CIA 组相比。 与 AG490 组相比，ZHONGL-CS 治疗显著降低了 Bax 和 caspase-3 的蛋白质水平，并增加了 Bcl-2 的水平（P < 0.01）。 ZHONGL-CS 和 AG490 组之间的细胞周期蛋白 D1 水平没有显著变化。
与CIA组相比，ZHONGL-CS、AG490、ZHONGL-CS+AG490处理FLS后JAK2、STAT1、STAT3 mRNA的表达水平和磷酸化蛋白的水平显著降低。 此外，qRT-PCR 分析显示，与 ZHONGL-CS 相比，AG490 处理对 STAT3 mRNA 的表达水平的抑制程度更大。 此外，蛋白质印迹分析表明，与 ZHONGL-CS 相比，AG490 处理降低了 p-JAK2 和 p-STAT3 的水平。
鸣谢：Yongsheng Yang, et al. J Tradit Chin Med. 2019 Apr;39(2):181-190.
