来宝网 2021/8/21点击802次
AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：SCC中有效的肿瘤细胞迁移和侵袭需要氯化物通道-3。
氯离子通道 3 (ClC-3) 在各种生理和病理生理活动中发挥重要作用，包括细胞迁移和侵袭能力。本研究的目的是评估ClC-3是否影响SCC细胞的迁移和侵袭及其可能的机制。
收集石蜡包埋的宫颈组织，包括正常宫颈组织、SCC和同源癌旁组织.从49例SCC患者中收集SCC和匹配的癌旁组织新鲜组织标本，从45例非SCC患者中收集正常宫颈组织。培养SCC细胞系SiHa。通过实时RT-PCR、免疫组织化学和蛋白质印迹评估ClC-3的表达，并通过蛋白质印迹检测磷酸-PI3K/Akt/mTOR和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。小干扰 RNA (siRNA) 技术用于敲低 ClC-3 的表达。 SiHa 细胞迁移和侵袭能力使用 Transwell 测量，如使用或不使用 Matrigel 涂层膜。SCC患者鳞状细胞ca组织中ClC-3 mRNA和蛋白表达显著上调，相同患者与非SCC患者匹配的癌旁新鲜组织间无显着差异。SiHa 细胞迁移和侵袭以及磷酸化 PI3K/Akt/mTOR 和 MMP-9 表达通过使用 ClC-3 siRNA 敲低 ClC-3 表达而减弱。ClC-3 通过 PI3K/Akt/mTOR 信号通路参与 SCC 细胞迁移和侵袭过程并调节 MMP-9 表达。
LY294002 (Abmole，M1925，纯度99.84%)用于处理 SiHa细胞（10 µM）。Everolimus (Abmole，M1709，纯度99.42%)用于处理SiHa细胞（20 nM）。
Fig. 4. Inhibition of SiHa cell migration and invasion by PI3K and mTOR inhibitors. SiHa cells were incubated in control medium (control, treated with DMSO) or treated with LY249002 (10µM, PI3K inhibitor) or Everolimus (20 nM, mTOR inhibitor) for 48 h before detection of migration and invasion ability by Transwell assay.
使用PI3K抑制剂LY249002和mTOR抑制剂依维莫司来阐明ClC-3通过PI3K/AKT/mTOR途径对SCC细胞迁移和侵袭的影响。用 LY249002 (10µM) 处理后，SiHa 细胞迁移和侵袭分别降低了 74% 和 72%，用Everolimus (20 nM) 处理后，SiHa 细胞迁移和侵袭分别降低了 74% 和 71% ) 。
Fig. 5. ClC-3 is a positive regulator of MMP-9 expression via the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway.
结果发现 MMP-9 蛋白在其中 ClC-3 被 siRNA 下调的细胞中降低，并且在 SiHa 细胞中用 LY249002 和Everolimus处理观察到类似的变化。与对照组相比，阴性对照siRNA对MMP-9表达无显著影响，说明ClC-3调控的MMP-9表达依赖于PI3K/Akt/mTOR信号通路.
鸣谢：Yutao Guan, et al. Gynecol Oncol. 2019 Jun;153(3):661-669.
