来宝网 2021/1/23点击1288次
AbMole精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：磷脂酶D1-mTOR轴在肝纤维化中的体外作用。
肝星状细胞（HSC）的激活在肝纤维化进程中起着核心作用。磷脂酶D（PLD）酶参与多种细胞活动。但是，PLD是否以及如何调节HSC的激活仍不清楚。通过Western印迹和免疫组化测定CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型中肝内PLD1和PLD2的表达。使用重组转化生长因子β1（TGFβ1）处理的大鼠HSCs系（HSC-T6）构建肝纤维化的细胞模型。在增殖，促成纤维细胞标志物的表达和迁移方面评估了纤维发生。使用小分子PLD1抑制剂，PLD1-SiRNA，雷帕霉素（mTOR抑制剂）和MHY1485（mTOR激活剂）处理的HSC-T6评估了PLD1-mTOR轴介导的TGFβ1诱导的纤维形成的作用。与正常肝组织相比，在CCl4引起的肝硬化中，PLD1显着增加，而PLD2不明显。PLD抑制剂抑制PLD1活性或HSC-T6中PLD1表达下调可显着抑制TGFβ1诱导的纤维化，这表现为细胞增殖减少和促纤维化标志物表达降低。此外，无论是PLD1抑制剂还是PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。 HSC的PLD1-mTOR轴可在晚期肝纤维化中进行治疗靶向。
MHY1485（AbMole，M9050，纯度 99.33%）是一种mTOR激活剂，通过抑制自噬体和溶酶体之间的融合，有效抑制自噬。在本研究中用于处理细胞。在存在或不存在PLD1抑制剂或SiRNA寡核苷酸的情况下，用MHY1485（5μM，mTOR激活剂，Abmole）处理每孔总计1×104 HSC-T6 48小时。
Fig. 5. Activation of PLD1-mTOR axis enhanced TGFβ1-induced fibrogenesis in HSC-T6.
结果表明，在存在或不存在TGFβ1的情况下，MHY1485并不直接通过HSC-T6调节a-SMA /胶原I的表达。MHY1485增强的增殖也可能被PLD1抑制剂抑制，雷帕霉素和MHY1485不调节促纤维化标记物的表达。
鸣谢：Yizhong Chang, et al. Life Sci. 2020 Jun 15;251:117595.
