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 STEMCELL Technologies 研发的 mTeSR™1（产品号 #05850）和 TeSR™2（产品号#05860），作为无饲养层细胞条件下维持 hPSC 的标准化培养基。它们的成分基于 Ludwig等公布的研究成果，是完全的、成分确定的无血清培养基，其生产得到 WiCell Research Institute 的授权。mTeSR™1含牛血清白蛋白来源，用于支持长期、无饲养层细胞条件下培养 hPSC 以及在无饲养层细胞条件下衍生 hiPSC。TeSR™2则是不含动物蛋白的配方，同样支持长期、无饲养层细胞条件下培养 hPSC。两者均不需要进一步添加生长因子。它们旨在维持和扩增未分化的hPSC，并与作为基质的 BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix（BD 产品号#354277）配合使用。STEMCELL Technologies 预先对每一批次的 BD Matrigel™的质量进行检测，确保均一性、可重复性和可靠性。若要获得完全不含动物蛋白的培养体系，TeSR™2 可与Vitronectin第替代基质配合使用。

在 mTeSR™1 和 TeSR™2 中培养的 hPSC：

·  表型均匀且核型正常

·  表达高水平的多能性标记如：Oct-3/4、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81

·  表达多能性所需的基因：Oct-3/4、nanog

·  形成包含内、中、外胚层谱系衍生物的畸胎瘤

·  可在体外分化为功能成熟的细胞类型（如造血细胞）

·  从基于饲养层细胞的培养物转化时，不需要驯化培养期（即无细胞低产期）

使用 mTeSR™1 和 TeSR™2 的优点包括：

·  去除不确定的培养基成分和消除与饲养层细胞和条件培养基有关的固有可变性，使 hPSC 培养的条件保持一致性

·  标准化培养方法，从而提高数据的可重复性

·  省去制备饲养层细胞或条件培养基的程序，节省了时间和劳力

·  完全的培养基配方，无需添加额外的生长因子或其他添加物

 
图1.  mTeSR™1 培养基对细胞扩增效果的一致性。

H1 和 H9 hESCs 在 mTeSR™1 中分别传代培养了19代和18代。培养结果显示各代之间均保持7至10倍的扩增。

 
图2.  在 mTeSR™1 中培养的 hESCs    和    hiPSCs 的形态特征。

H1 hESCs 的集落具有 (A) 确定的边界，(B) 细胞核质比率较高的特点。hiPSC 细胞系 (C) iPSC(IMR90)-3 和 (D) MSC-iPSC1 在 mTeSR™1 中的维持培养显示了相似的形态特征。(E-G) H9 hESCs 通常每5-7天传代一次。与含饲养层细胞或条件培养基的培养相比，hESCs 在 mTeSR™1 中的形态有少许差异。

 
图3.  在 mTeSR™1 中培养的 hESCs 在长期传代后依然保持正常核型。

通过染色体分析表明，即使在 mTeSR™1 中培养了48代的 H1 hESCs，其核型在长期传代过程中仍保持正常。

  
图4.  在 mTeSR™1 中培养的 hESCs 具有多能性。

H9  hESCs  在  mTeSR™1  中培养了6代，然后通过皮下注射入免疫缺损的小鼠。生成的畸胎瘤包含来自所有3个胚层的细胞类型。照片显示具有代表性的组织类型。

使用mTeSR™1（产品号 #05850/05870/05875）或TeSR™2（产品号 #05860/05880）培养和维持人胚胎干细胞（hESCs）和人诱导多能干细胞（iPSCs）时，需要用基质包被培养板，从而对细胞的附着和扩增起到支持作用。

我们推荐使用BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix（BD产品号 #354277）包被培养板。BD Matrigel™ hESC-qualified Matrix的稀释方法说明随产品附送，由BD Biosciences提供。基质的稀释倍数由BD Biosciences根据每批号的蛋白质浓度计算。

很重要的一点是，包被组织培养板时必须将Matrigel™涂得均匀并且完全覆盖培养板。否则在Matrigel™包被不完全的部位，细胞将不能完全贴壁。避免包被不均匀的一个方法是，将涂过基质胶的培养板于室温下放置在生物安全柜1小时，并将培养板的盖子盖好（防止基质变干）。如果实验时间比较匆忙，也可将涂好的培养板放在37℃培养箱中30分钟。同时确保生物安全柜或细胞培养箱的表面水平（可使用气泡水平仪确认），也不要将各培养板叠放。
包被好的培养板可在2 – 8℃保存长达一个星期（用Parafilm™将培养板封口，以防基质变干）。同时也要确保冰箱搁板水平而不倾斜。我们不建议使用局部包被不均匀或因保存不当而导致Matrigel™变干的培养板。

应用成份完全确定的TeSR™2培养基培养hPSC，培养板的包被可使用StemAdhere™成分确定，用于人多能干细胞培养的基质（产品号 #07160）而非Matrigel™。